跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2006年11月15日；20(22):3185-97.
doi:10.1101/gad.1463206。

p63调节发育成熟角质形成细胞的增殖和分化

艾米·B·张 1, 马库斯·克雷茨, 托德·W·里奇, 罗宾·金梅尔, 保罗·A·哈瓦里
附属公司

p63调节发育成熟角质形成细胞的增殖和分化

艾米·B·张等。 基因开发. .

摘要

p63是表皮发育所必需的多亚型p53家族成员。已经提出p63在分层上皮细胞命运的初始承诺或干细胞自我更新中的对比作用。为了研究p63在发育后的功能，我们使用针对p63的siRNAs下调再生人类表皮中p63的表达。p63缺失导致严重的组织发育不全，并以细胞自主的方式抑制分层和分化。尽管p63缺失细胞表现出低增殖，但分化缺陷并非由于组织发育不全。同时敲除p63和p53可单独挽救p63敲除的细胞增殖缺陷，但未能恢复分化，这表明表皮增殖和分化的缺陷分别通过p53依赖和独立机制介导。此外，尽管TAp63亚型可能有助于晚期分化，但DeltaNp63亚型别是p63效应的主要介质。这些数据表明，p63是发育成熟角质形成细胞增殖和分化潜能所必需的。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
p63是再生表皮分层和分化所必需的。(A类)将siRNA寡核苷酸双链体引入人原代角质形成细胞后，在6天内进行Western blot。主带代表ΔNp63α，这是培养的角质形成细胞中的主要物种。（对照）对照寡核苷酸；（pan-p63）寡核苷酸，靶向所有p63亚型。(B)用靶向pan-p63或对照寡核苷酸双链体的寡核苷酸双链体进行核感染后p63 mRNA水平的qRT-PCR分析的时间进程。(C)在引入靶向所有p63亚型（pan-p63）和对照siRNA的siRNA后，从原代人角质形成细胞再生出器官型表皮组织。在第3、6和9天（分别为d3、d6和d9）用识别所有p63异构体（p63）的抗体进行组织学和免疫染色分析组织分化标记物转谷氨酰胺酶1（Tg）、角蛋白1（K1）和洛林蛋白（Lor）均为橙色。（绿色）VII型胶原，基底膜区标记；（蓝色）Hoechst 33342核染色。注意p63缺失的组织中发育不全和缺乏分化标记表达。(D类)对由对照组或pan-p63 RNAi处理的角质形成细胞生成的第四天器官型表皮组织进行角蛋白K8和K18（橙色）的免疫染色，并对VII型胶原（绿色）进行共染色；注意对照组中K8/K18的缺失及其在p63缺乏组织中的出现。棒材，100μm。
图2。
图2。
p63缺失对分层和分化的影响不是由于细胞数量不足或增殖不足。(A类)p63效应与细胞总数无关。将越来越多的对照细胞或p63 RNAi处理的细胞接种到失活的真皮上，并在第4天收获组织。注意，即使p63 siRNAi治疗的细胞存在于多层中，也缺乏组织极性和组织结构，并且没有分化标记表达。棒材，100μm。(B)p63敲除导致G1细胞周期阻滞。转染后60 h，对照组或pan-p63 siRNA处理的角质形成细胞的FACS细胞周期谱。显示G1、S或G2/M中的细胞百分比。(C)增殖减退不能解释p63缺失所观察到的分化缺陷。在第4天，用0.2 mM DNA合成抑制剂HU处理的组织呈现低增殖状态，与缺乏p63和p53的细胞生成的组织进行比较。注意，HU处理的组织中有丝分裂活性降低，但保留了诱导分化标记物转谷氨酰胺酶1（Tg）、K1和K10的能力。棒材，100μm。(D类)器官型组织的定量有丝分裂指数。HU表示向培养基中添加0.2 mM HU。
图3。
图3。
p63缺乏引起的低增殖依赖于p53。(A类)p63敲除增加p21蛋白水平。在siRNA转染后第2天（d2）和第4天（d4），对对照细胞或pan-p63 siRNA-转染细胞进行Western blot。(B)同时敲低p53或p21的表达并结合p63敲低抑制p21的诱导。角质形成细胞裂解物的Western blot；引入的siRNA沿着顶部，每个面板使用的抗体显示在左边. (C)p53基因敲除可在体外挽救细胞增殖缺陷。在用指示的siRNA转染后第2天（d2）和第4天（d4）测定BrdU掺入水平。将水平归一化为接受对照siRNA的细胞，误差条表示四份样品之间的标准偏差。(D类)p53敲除可拯救器官型表皮组织中的细胞增殖。用所示siRNA处理的细胞产生的4-d器官型培养物的有丝分裂指数。在收获前12小时用BrdU标记细胞，并用BrdU抗体染色组织。(E类)拯救细胞增殖并不能拯救p63缺乏的表皮组织中的分化缺陷。用抗BrdU和转谷氨酰胺酶1（Tg）的抗体对由所指示的siRNA转染的细胞产生的器官型组织进行免疫染色。注意pan-p63/p53双敲除样品中BrdU染色增加，但没有分化标记表达。棒材，100μm。
图4。
图4。
p63对表皮分化的影响是细胞自主的。(A类)逆转录病毒基因转移和寡核苷酸核感染后原代角质形成细胞提取物的蛋白质印迹；导入的基因显示在顶部带有siRNA寡核苷酸的小组在下面。用于免疫印迹的抗体显示在左边每个面板的。分别用LacZ（LZ）和HA-epitope-tagged K14标记对照和pan-p63敲除的细胞。(B、 C类)LacZ标记对照细胞生成的表皮组织(顶部面板），HA-K14标记的pan-p63敲除细胞(底部面板），或各面板的1:1混合物(中间的用分化标记K10的抗体染色(B)和K1(C). 在第4天采集组织。注意p63敲除细胞中完全没有分化标记表达，并且相邻的正常细胞也无法挽救。棒材，50μm。(D类)逆转录病毒转导和siRNA转染后细胞提取物的蛋白质印迹。转基因基因和siRNA寡核苷酸沿着顶部对于每个样本。Western blot检测到的抗体显示在左边面板的。(E类)由1:1比例的LacZ表达的对照细胞和HA-K14表达的细胞生成的器官型组织，这些细胞接受以下siRNAs之一：对照、pan-p63、p53或pan-p63和p53。第4天采集组织，用识别HA（绿色）和K1（橙色）的抗体进行免疫染色。请注意，在对照组和p53单一敲除混合物中，HA-K14表达细胞和K1之间存在重叠，但在HA-K14-表达细胞产生的组织中没有重叠，而pan-p63单独敲除或与p53敲除结合。棒材，50μm。
图5。
图5。
ΔNp63亚型是表皮分层和分化所必需的。(A类)引入对照寡核苷酸或靶向ΔNp63亚型的寡核苷酸后的Western blot。(B、 C)靶向ΔNp63亚型的寡核苷酸处理细胞的qRT-PCR分析的时间进程(B)或TAp63亚型(C). (D类)用对照或TAp63 siRNA转染的角质形成细胞产生的4-d器官型培养物的组织组织学的高倍放大（100×）。显示棘层（sp）、颗粒层（g）和角质层（s.c.）。注意TAp63敲低细胞产生的组织中不存在颗粒或角质层。棒材，20μm。(E类)对照组或TAp63敲低的4-d器官型表皮组织的分化标记表达。棒材，100μm。(F类)对照、pan或ΔNp63等特异性RNAi转染的角质形成细胞用于再生器官型皮肤组织。第4天采集组织，通过组织学和免疫染色分析所示分化蛋白的表达。注意，ΔNp63亚型敲除导致分层和分化明显失败。棒材，100μm。(G公司)文氏图显示了器官型培养中伴随TA或ΔNp63敲除的基因表达变化数量。维恩图中的数字代表的基因显示出两倍或更大的变化第页-通过单向方差分析，值≤0.05。符合这些标准并参与分化或细胞-细胞粘附的基因列在方框中。基因名称旁边的数字表示表达的平均倍数变化，（+）表示上调，（−）表示下调。对于TA和ΔN p63敲除组织中发生变化的基因，第一个数字对应TA敲除样本，第二个数字对应ΔN敲除样本。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Bond，J.、Haughton，M.、Blaydes，J.，Gire，V.、Wynford-Thomas，D.、Wyllie，F.关于p53转录激活在诱导细胞衰老中起直接作用的证据。癌基因。1996;13:2097–2104.-公共医学
    1. Candi，E.，Rufine，A.，Terrinoni，A.，Dinsdale，D.，Ranalli，M.，Paradisi，A.，De Laurenzi，V.，Spagnoli，L.G.，Catani，M.V.，Ramadan，S.等。p63亚型在表皮发育中的差异作用：p63缺失小鼠的选择性遗传互补。细胞死亡不同。2006;13:1037–1047.-公共医学
    1. 卡罗尔，D.K.，卡罗尔，J.S.，梁，C.O.，郑，F.，Brown，M.，Mills，A.A.，Brugge，J.S..，Ellisen，L.W.p63调节上皮细胞中的粘附程序和细胞存活。自然细胞生物学。2006;8:551–561.-公共医学
    1. Delehedde，M.，Cho，S.H.，Hamm，R.，Brisbay，S.，Ananthaswamy，H.N.，Kripke，M..，McDonnell，T.J.Bcl-2和Ha-ras对器官型培养中角质形成细胞的影响。J.投资。皮肤病。2001;116:366–373.-公共医学
    1. Donehower，L.A.、Harvey，M.、Slagle，B.L.、McArthur，M.J.、Montgomery，C.A.，Jr.、Butel，J.S.、Bradley，A.缺乏p53基因的小鼠发育正常，但易患自发性肿瘤。自然。1992;356:215–221。-公共医学

出版物类型

MeSH术语