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.2006年10月13日;281(41):30947-56.
doi:10.1074/jbc。M603741200。 Epub 2006年8月10日。

将蛋白激酶C活性报告子定位于离散的细胞内区域揭示了激动剂依赖信号的时空差异

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将蛋白激酶C活性报告子定位于离散的细胞内区域揭示了激动剂依赖信号的时空差异

丽莎·加列戈斯等。 生物化学杂志. .
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摘要

蛋白激酶C(PKC)家族成员能传递丰富多样的细胞内信号。在这里,我们通过实时测量活细胞中特定细胞内位置的内源性PKC活性,来探讨空间和时间分离在信号特异性中的作用。我们针对PKC活性的基于基因编码的荧光共振能量转移报告子C激酶活性报告子(CKAR)(Violin,J.D.,Zhang,J.,Tsien,R.Y.,and Newton,a.C.(2003)J.Cell Biol。161,899-909),通过将适当的靶向序列融合到CKAR的NH2或COOH末端,将其转移到质膜、高尔基体、胞浆、线粒体或细胞核。在PKC抑制剂、活化剂和/或磷酸酶抑制剂存在的情况下测量报告者的磷酸化,表明每个区域的活性受磷酸酶活性的差异控制;核活性被磷酸酶完全抑制,而膜相关活性则被磷酸酶抑制最少。UTP刺激COS 7细胞中的内源性P2Y受体揭示了时空差异的PKC反应。对第二信使Ca2+和二酰甘油(DAG)的成像显示,每个位置的PKC活性都是由Ca2+的初始峰值驱动的,随后是特定位置的二酰甘油生成。在对UTP的反应中,GolgiCKAR的磷酸化持续时间最长,这是由DAG的持续性驱动的,而CytoCKAR的磷酸化的持续时间最短,这是由于高磷酸酶活性驱动的。我们的数据表明,PKC信号的大小和持续时间具有位置特异性,并由磷酸酶活性水平和每个位置DAG的持续性控制。

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