跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2006年7月；8(7):596-606.
doi:10.1593/neo.06244。

转移性黑色素瘤细胞中的肝素酶调节FGF2结合、信号传导和血管生成

简·雷兰德 1, 多蒂·坎普夫, 马杜奇汉达·罗伊, 伊冯·丹金斯, 达里奥·马切蒂
附属公司

转移性黑色素瘤细胞中的肝素酶调节FGF2结合、信号传导和血管生成

简·雷兰德等。 肿瘤形成. 2006年7月.

摘要

乙酰肝素酶（HPSE）和成纤维细胞生长因子-2（FGF2）是黑色素瘤血管生成和转移的关键调节因子。HPSE表达升高与黑色素瘤进展；然而，进一步增加HPSE的存在可以抑制致瘤性。HPSE酶解从蛋白聚糖中分离硫酸乙酰肝素糖胺聚糖链（HS）。HS在高亲和力FGF2受体的形成中既是低亲和力FGF2受体又是协同受体。我们研究了HPSE通过HS重塑调节FGF2活性的能力。人类转移性黑色素瘤细胞（70W）的广泛HPSE降解抑制FGF2结合。出乎意料的是，用低HPSE浓度处理70W细胞会增强FGF2结合。此外，HPSE相关细胞对FGF2没有磷酸化细胞外信号相关激酶（ERK）或黏着斑激酶（FAK）。相反，在HPSE处理的细胞中，FGF2刺激ERK和FAK磷酸化。其次，可溶性HPSE降解HS的存在增强了低HS浓度下FGF2结合和ERK磷酸化。较高浓度的可溶性HS抑制FGF2结合，但通过ERK的FGF2信号仍然增强。无论HPSE处理如何，可溶性HS都无法支持FGF2刺激的FAK磷酸化。最后，细胞暴露于HPSE或HPSE降解的HS调节FGF2诱导的黑色素瘤血管生成。总之，这些作用提示了HPSE调节黑色素瘤生长因子反应性和致瘤性的相关机制。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
细胞表面HS（A–H）的HPSE和Hep III降解。用（A）0 ng/ml HPSE、（B）5 ng/ml HRSE、（C）50 ng/ml HDSE、（D）500 ng/ml Hep或（E）0 ng/ml Hep III、（F）5 ng/ml Hep III、（G）50 ng/ml Hep III和（H）500 ng/ml Hep III处理人70W黑色素瘤细胞。然后固定细胞并对其进行HS免疫染色。使用Axioplan荧光显微镜、Microfire数码相机和Pictureframe成像程序在相同条件下生成所有图像（有关详细信息，请参阅“材料和方法”部分）。图像是两个独立的重复实验的代表。（一） ●●●●。或者，用20µCi/ml对70W细胞进行24小时的代谢标记[35S] 硫酸盐，清洗以去除游离硫酸盐，并用指示浓度的HPSE培养16小时(▪) 或Hep III（▴）。条件培养基和细胞相关[35S] 硫酸盐在液体闪烁计数器中计数，并报告为[35S] 与平均总量相比，释放到介质中的硫酸盐[35S] 硫酸盐（详见材料和方法部分），一式三份测定（±标准偏差）。
图2
图2
HPSE处理或Hep III处理的人类70W黑色素瘤细胞的FGF2结合。用指示浓度的HPSE（A）或Hep III（B）培养细胞16小时，清洗以去除游离HS，并用[125一] FGF2。绑定[125一] FGF2分别从低亲和力（•）和高亲和力释放(▪) 并且使用LKB伽马计数器对放射性进行计数。结合被报告为平均值[125一] FGF2相对于平均值与实验条件绑定[125一] FGF2与未经处理的细胞结合，重复三次测定（±标准偏差）。
图3
图3
HPSE处理的人类70W黑色素瘤细胞中的FGF2信号。用0至5000 ng/ml HPSE处理16小时的细胞进行清洗，用FGF2（10 ng/ml）刺激10分钟，然后进行裂解。然后通过Western blot分析对总细胞裂解物进行总蛋白和磷酸化ERK和FAK蛋白的分析（详见材料和方法部分）。结果代表了三个独立的实验。
图4
图4
HPSE降解HS和肝素。为了评估HPSE产生的片段，HS（1–3道）或肝素（4–6道）在37°C下单独与缓冲液（1道和4道）、10µg/ml HPSE（2道和5道）或100µg/ml Hep III（3道和6道）孵育16小时。然后在4%至20%的TBE凝胶上分离HS和肝素，并使用Alcian蓝色染料显示条带，然后进行银染色（a）。上述凝胶电泳的密度分析使用Versadoc成像系统（B）。迁移被报告为剖面前缘的相对前沿（rf）。根据三份HS曲线确定平均值和标准偏差。通过Student t检验评估了显著差异（*P<.03，**P<.005）。
图5
图5
肝素或HS的HPSE降解产生调节FGF2结合的片段。人类70W黑色素瘤细胞与[125一] FGF2和指示浓度的肝素（A和B）或HS（C和D），后者用HPSE预降解(▪) 或被模拟降级（•）。然后对样品进行分析[125I] FGF2与低亲和力（A和C）或高亲和力（B和D）位点结合。结合被报告为平均值[125一] FGF2与相对于平均值的实验条件绑定[125一] FGF2与未经处理的对照细胞结合，重复三次测定（±标准偏差）。
图6
图6
肝素或HS的HPSE降解产生调控FGF2刺激的Erk而非FAK磷酸化的片段。将细胞与FGF2（10 ng/ml）在指示浓度的HS（用HPSE（A）或模拟降解（B）预降解）存在下培养10分钟。通过Western blot分析对细胞进行裂解，并对总细胞提取物分别进行ERK或FAK的总/磷酸化形式的分析（详见材料和方法部分）。结果代表了三个独立的实验。
图7
图7
黑色素瘤细胞表面HS的HPSE降解调节FGF2诱导的肿瘤血管生成。将70W细胞与指定的HPSE浓度孵育16小时。然后释放细胞，在存在或不存在FGF2的情况下用Matrigel重新悬浮，并皮下注射到裸鼠体内（n=10）。肿瘤生长10天，切除，福尔马林固定，切片用H&E（A）染色。使用每个肿瘤三个独立切片中的九个区域对血管进行量化（B）。原始放大倍数，x40。棒材，25µm。错误报告的置信区间为90%。
图8
图8
HPSE降解的HS调节FGF2对黑色素瘤血管生成的刺激。释放细胞，在存在或不存在FGF2和指示HS的情况下用Matrigel重悬，并皮下注射到无胸腺裸鼠中（n=8）。肿瘤生长10天，切除，福尔马林固定，切片用H&E（A）染色。使用每个肿瘤三个独立切片中的九个区域对血管进行量化（B）。原始放大倍数，x40。棒材，25µm。错误报告的置信区间为90%。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Fjeldstad K，Kolset SO。以硫酸乙酰肝素蛋白多糖为靶点降低癌症转移潜能。当前药物目标。2005;6:665–682.-公共医学
    1. Sanderson RD。硫酸乙酰肝素蛋白多糖在侵袭和转移中的作用。精液细胞开发生物学。2001;12:89–98.-公共医学
    1. Iozzo房车。硫酸乙酰肝素蛋白聚糖：具有有趣功能的复杂分子。临床投资杂志。2001;108:165–167.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Powell AK，Yates EA，Fernig DG，Turnbull JE。肝素/硫酸乙酰肝素与蛋白质的相互作用：结构因素评估和实验方法。糖生物学。2004;14:17R–30R。-公共医学
    1. Herlyn M.转移性黑色素瘤细胞。导言。癌症转移评论2005；24:193–194.-公共医学

出版物类型