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.2006年5月16日；103(20):7765-70.
doi:10.1073/pnas.0510484103。 Epub 2006年5月8日。

人类进化过程中T淋巴细胞Siglec表达缺失

Dzung H Nguyen公司 1, 南希·赫塔多·齐奥拉, 帕斯卡·加格纽克斯, 阿吉特·瓦尔基
附属公司

人类进化过程中T淋巴细胞Siglec表达缺失

Dzung H Nguyen公司等。 美国国家科学院程序. .

摘要

我们在这里报道，人类T细胞通过T细胞受体（TCR）对特异性激活产生的增殖反应比我们进化上最亲缘的黑猩猩更强。使用植物血凝素的非特异性激活在黑猩猩T细胞中表现强劲，这表明TCR模拟的反应低得多，并不是因为对激活刺激没有任何内在的反应能力。CD33相关Siglecs是大多数免疫细胞上表达的抑制性信号分子，被认为通过胞浆免疫受体酪氨酸基抑制基序下调细胞激活途径。在人类免疫细胞中，T淋巴细胞是一个显著的例外，几乎不表达这些分子。与此形成鲜明对比的是，我们发现黑猩猩以及其他密切相关的“大猩猩”（倭黑猩猩、大猩猩和猩猩）的T淋巴细胞在其表面表达了几个CD33相关的Siglecs。因此，人类特有的T细胞Siglec表达缺失发生在我们与大猩猩的最后一个共同祖先之后，这可能导致抑制信号的进化差异。我们通过研究Siglec-5证实了这一点，Siglec-5在黑猩猩淋巴细胞（包括CD4 T细胞）上显著表达。抗体介导的Siglec-5从黑猩猩T细胞中清除增强了TCR介导的激活。相反，转染Siglec-5的原代人类T细胞和Jurkat细胞的反应性降低；也就是说，它们的行为更像黑猩猩的T细胞。这种与T细胞多动相关的人特异性T细胞Siglec表达缺失可能有助于解释人类和黑猩猩之间T细胞介导疾病（如艾滋病和慢性活动性肝炎）的发病率和严重程度截然不同的原因。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突声明：未声明冲突。

数字

图1。
图1。
PHA和抗CD3/抗CD28激活人类和黑猩猩T细胞的差异。用10μg/ml可溶性PHA刺激人类和黑猩猩T淋巴细胞(A类)或使用固定化抗CD3（2.5μg/ml涂层浓度）加上0.1μg/ml可溶性抗CD28(B类). 在指定的日子里，收集细胞并在FACSCalibur上以60μl/min的速度计数30秒年轴以适应所看到的值范围。用抗CD3或抗CD28标记人和黑猩猩淋巴细胞，并用PE山羊抗小鼠IgG检测(C类). 对照直方图显示仅存在次级抗体的人类淋巴细胞数量。以下是一对具有代表性的三人与黑猩猩的比较A类。相同的供体对显示在B类作为实体符号，以及另一对人类和黑猩猩样本（填充符号）。
图2。
图2。
CD33rSiglecs在人和大猩猩淋巴细胞上的表达。(A类)显示了16只黑猩猩、5只倭黑猩猩和3只大猩猩的每个Siglec Ab阳性淋巴细胞的百分比（染色于阴性对照组之上），以及8名人类的数据（后者经过一次或多次测试）。人类流式细胞术直方图示例(B类)和黑猩猩(C类)使用识别Siglec-3、Siglec-5、Siglec-7和Siglec-9的抗体的淋巴细胞(年轴：标准化的单元数，表示为检测到的最大单元数的百分比）。在后来检查的样本中，在类人猿和人类的淋巴细胞上偶尔检测到低水平的Siglec-11染色（<5%阳性）（数据未显示）。
图3。
图3。
抗-Siglec-5抗体对黑猩猩T细胞和B细胞进行染色。用抗Siglec-5和PE-包被抗鼠IgG以及APC-anti-CD3或APC-anti-CD19对黑猩猩淋巴细胞进行双重标记(A类)或配合FITC-抗CD4和PE-Cy5-抗CD8(B类). CD3和CD19的结果代表7个人，CD4和CD8的结果代表2个人。
图4。
图4。
抗Siglec-5抗体治疗后，黑猩猩T细胞对抗CD3的反应增强。用固定化抗CD3加可溶性抗CD28刺激人和黑猩猩T淋巴细胞。对于所示样品，将5μg/ml的抗Siglec-5抗体添加到溶液中的黑猩猩淋巴细胞中。刺激3天后用流式细胞仪分析细胞。前向散射和侧向散射的增加分别表明单元大小和内部复杂性/粒度的增加。分析中排除了死细胞。结果代表了一只黑猩猩的四个不同样本。
图5。
图5。
人T细胞Siglec-5表达抑制对可溶性抗CD3/抗CD28和PHA的反应。无DNA模拟转染未刺激的单核细胞耗竭的PBMC(A类)或转染2或3μg pSig5(B类和C类)使用Nucleofector仪器。24小时后，用非特异性小鼠IgG（红色填充直方图）或抗Siglec-5（蓝色开放直方图”）标记细胞。MFI，Siglec-5表达的平均荧光强度。根据Siglec-5的表达水平，将产生的细胞群命名为control（Ctrl）、Sig-5（lo）和Sig-5（hi）。(D类)用指定浓度的可溶性抗CD3和可溶性抗CD28刺激转染细胞3天。绘制放大细胞的百分比，不减去刺激背景对照。在不同的PBMC供体中也观察到类似的结果。(电子)用10μg/ml PHA刺激转染细胞3天，然后分析CD25的表达。CD25染色的直方图如图所示。
图6。
图6。
人T细胞中Siglec-5的表达抑制对抗CD3/抗CD28珠的反应。(A类)使用Nucleofector设备，在无DNA的情况下模拟转染未经刺激的单核细胞缺失PBMC，或转染1、2或3μg pSig5。24小时后，用抗Siglec-5和山羊抗鼠IgG Alexa Fluor 488标记细胞。MFI，Siglec-5表达的平均荧光强度。用抗CD3/抗CD28承载珠刺激转染细胞(B类–D类). 刺激3天后，分析细胞大小和细胞内复杂性/粒度的扩增(B类)CD25表达增加(C类和D类). 通过前向散射门控和FL3的正自体荧光将珠状细胞和珠状细胞排除在分析之外。
图7。
图7。
Jurkat T细胞上Siglec-5的表达抑制抗CD3诱导的细胞内钙动员。Jurkat细胞无DNA模拟转染或每2×10转染2μg pSig56使用Nucleofector设备的单元格。24小时后，以非特异性小鼠IgG为背景，用抗Siglec-5和山羊抗鼠IgG Alexa Fluor 488流式细胞术分析Siglec-4的表达(A类). 显示Siglec-5阳性细胞的百分比。用钙敏感染料Fluo-4和Fura Red负载转基因细胞，然后通过实时流式细胞术分析对可溶性抗CD3的反应(B类). 60秒处的箭头表示添加单克隆抗体的时间。用不同的转染Jurkat细胞重复两次实验，结果相似。
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