Specificity of antibodies: unexpected cross-reactivity of antibodies directed against the excitatory amino acid transporter 3 (EAAT3)

doi:10.1016/j.neuroscience.2005.07.022

比较研究

.2005;136(3):649-60.

doi:10.1016/j.neuroscience.2005.07.022。

抗体的特异性：针对兴奋性氨基酸转运体3（EAAT3）的抗体的意外交叉反应

S霍尔姆斯¹, Y Dehnes公司, L P比约尔森, J-L Boulland公司, D N Furness公司, D Bergles公司, N C丹伯尔特

附属公司

PMID： 16344142
内政部： 2016年10月10日/j.neuroscience.2005.07.022

比较研究

抗体的特异性：针对兴奋性氨基酸转运体3（EAAT3）的抗体的意外交叉反应

S Holmseth公司等。神经科学. 2005.

.2005;136（3）：649-60。

doi:10.1016/j.neuroscience.2005.07.022。

作者

S Holmseth公司¹, Y Dehnes公司, L P比约尔森, J-L Boulland公司, D N Furness公司, D Bergles公司, N C丹伯尔特

附属

¹奥斯陆大学基础医学研究所解剖学系，挪威奥斯陆N-0317，布林德恩，邮政信箱1105。

PMID： 16344142
内政部： 2016年10月10日/j.neuroscience.2005.07.022

摘要

特异性抗体是鉴定生物样品中单个蛋白质的重要工具。虽然抗体的产生通常很简单，但抗体特异性的测定并不简单。在这里，我们通过描述兴奋性氨基酸转运蛋白3（EAAT3）抗体的产生和表征来说明这一点。我们合成了13个与EAAT3序列部分相对应的肽，并免疫了6只绵羊和30只兔子。所有血清都是针对相关固定肽进行亲和纯化的。几乎所有病例都获得了对肽的抗体。用野生型和EAAT3基因敲除动物的组织提取物进行的免疫印迹显示，大多数抗体不识别天然EAAT3蛋白，而一些抗体识别其他蛋白。已尝试了几种免疫方案，但EAAT3的强烈反应仅见于C末端肽的抗体。相反，获得了针对EAAT2几个部分的良好抗体。EAAT3仅在神经元中检测到。然而，用对应于479-498残基的EAAT3肽免疫兔子后，产生的抗体会标记其中的轴浆和微管，特别强烈。在印迹上，这些抗体既能识别EAAT3，又能识别一种稍小但更丰富的蛋白质，这种蛋白质后来被证明是微管蛋白。抗体在具有固定化微管蛋白的柱上进行分级。一个组分含有明显针对EAAT3的抗体，而另一个组份含有识别EAAT3和微管蛋白的抗体，尽管这两种蛋白质之间缺乏一级序列一致性。向孵育液中添加游离肽可阻断EAAT3和微管蛋白的免疫染色。

结论：并非所有合成肽抗体都能识别天然蛋白质。肽序列比免疫方案更重要。抗体的特异性很难预测，因为交叉反应可能对无关分子具有特异性。抗原预吸收试验在检测亲和纯化抗体的特异性方面价值不大。

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