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.2006年4月;5(4):769-76.
doi:10.1074/mcp。T500022-MCP200。 Epub 2005年12月9日。

蛋白质组学中的微波辅助蛋白质制备和酶消化

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蛋白质组学中的微波辅助蛋白质制备和酶消化

孙伟(音译)等。 分子细胞蛋白质组学. 2006年4月.
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摘要

凝胶电泳或液相色谱与质谱联用是大规模蛋白质鉴定的两种常用方法。然而,这两种方法的吞吐量都受到蛋白质消化过程速度的限制。目前对快速蛋白质酶消化的研究主要集中在已知蛋白质上,尚不清楚这些结果是否可以推断为复杂的蛋白质混合物。本研究利用微波技术开发了一种快速蛋白质制备和蛋白质混合物酶消化方法。制备溶液或凝胶中的蛋白质混合物,并通过微波辅助蛋白质酶消化进行消化,快速产生肽片段。利用毛细管液相色谱和ESI-ion trap-MS或MALDI-TOF-MS进一步分析肽片段。利用牛血清白蛋白优化该技术,然后将其应用于人尿蛋白和酵母裂解物。该方法能够在6或25分钟内分别在溶液(人类尿蛋白)或凝胶(酵母裂解物)中制备和消化蛋白质混合物。与标准过夜消化方法相比,使用微波辅助蛋白质酶消化获得了等效(溶液中)或更好(凝胶中)的消化效率。微波技术在蛋白质混合物制备和酶消化中的新应用将加速蛋白质组学技术在生物学和临床研究中的应用。

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