Selection of reference genes for quantitative real-time PCR in bovine preimplantation embryos

doi:10.1186/1471-213X-5-27

.2005年12月3日5:27。

doi:10.1186/1471-213X-5-27。

牛植入前胚胎实时定量PCR参考基因的筛选

卡伦·古森¹, 马里奥·范·普克, 安·范索姆, Jo Vandesompele公司, 亚历克斯·范·泽弗伦, 吕克·杰·皮尔曼

附属公司

PMID： 16324220
预防性维修识别码：项目编号：1315359
内政部： 10.1186/1471-213X-5-27

牛植入前胚胎实时定量PCR参考基因的筛选

卡伦·古森等。 BMC开发生物. 2005.

.2005年12月3日5:27。

doi:10.1186/1471-213X-5-27。

作者

卡伦·古森¹, 马里奥·范·普克, 安·范索姆, Jo Vandesompele公司, 亚历克斯·范·泽弗伦, 吕克·杰·皮尔曼

附属

¹根特大学兽医学院动物营养、遗传、育种和行为学系，比利时梅勒贝克B-9820，海德斯特拉特19号。卡伦·古森@UGent.be

PMID： 16324220
预防性维修识别码：项目编号：1315359
内政部： 10.1186/1471-213X-5-27

摘要

背景：实时定量PCR是检测植入前胚胎基因转录模式的一种敏感而有效的技术，目的是获取胚胎发育信息并优化辅助生殖技术。实时PCR成功应用的关键是仔细的分析设计、反应优化和验证，以最大限度地提高灵敏度和准确性。在大多数发表于GAPD的研究中，ACTB或18S rRNA被用作单个参考基因，而没有事先验证其表达稳定性。使用不稳定控制对数据进行规范化可能会导致错误的结论，尤其是当只使用一个参考基因时。

结果：本研究测定了8个常用参考基因（ACTB、GAPD、组蛋白H2A、TBP、HPRT1、SDHA、YWHAZ和18S rRNA）在不同植入前阶段（2细胞、8细胞、胚泡和孵化胚泡）的转录水平为了选择最稳定的基因，对不同植入前胚胎阶段的定量数据进行标准化。

结论：使用geNorm应用程序，YWHAZ、GAPD和SDHA被发现是整个检查胚胎阶段最稳定的基因，而常用的ACTB被证明是高度调节的。我们建议使用这3个参考基因的几何平均值作为准确的标准化因子，从而可以可靠地测量微小的表达差异。

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数字

图1
**（A-B）：geNorm程序分析的候选参考基因的基因表达稳定性**（A）三次分析中控制基因的平均表达稳定性值（M），从最不稳定（左）到最稳定（右）绘制。（B）归一化因子NF之间3次分析的成对变化分析_n个和NF_n+1，以确定归一化的最佳控制基因数。更高的V_4/5和V_7/8这些值是由于包含了相对不稳定的基因，并且符合平均表达稳定性M。

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