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.2005年10月1日;77(19):6310-9.
doi:10.1021/ac058019d。

傅里叶变换离子回旋共振质谱法分析小泛素样修饰物(SUMO)修饰:鉴定在E3自SUMO化反应中修饰的RanBP2和SUMO中的赖氨酸

附属公司

傅里叶变换离子回旋共振质谱法分析小泛素样修饰物(SUMO)修饰:鉴定在E3自SUMO化反应中修饰的RanBP2和SUMO中的赖氨酸

海伦·J·库珀等。 Ana Chem公司. .

摘要

泛素样蛋白SUMO与靶蛋白的连接涉及许多重要的细胞过程。通常,SUMO修饰发生在一致序列psiKxE/D内的赖氨酸残基上(psi是疏水残基,x是任何残基),尽管在非一致位点也有修饰的例子。在大多数情况下,SUMO修饰位点是通过定点突变和功能分析相结合而推断出来的;然而,这些方法有两个局限性。它们不能直接识别受体赖氨酸,也不足以识别SUMO聚合物中的受体赖氨酸残基。在这里,我们使用傅里叶变换离子回旋共振(FT-ICR)和活化离子电子捕获解离(AI-ECD)或红外多光子解离(IRMPD)质谱技术来克服这些限制。利用这些方法分析了SUMO E3连接酶RanBP2催化的自SUMO酰化反应。在RanBP2中鉴定了六个体外SUMO化位点,以及SUMO-1中的四个支点赖氨酸和SUMO-2中的三个支点。在除一例外的所有病例中,SUMO化均发生在序列KxE或KpsiK内。这些结果证明了FT-ICR和AI-ECD或IRMPD质谱在检测SUMO化和SUMO酸化位点方面的实用性,以及它们作为蛋白质组和功能分析的补充工具的潜在作用,并对传统技术不成功的SUMO连接酶的修饰提供了重要的见解。

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