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.2005年10月21日;336(2):692-701.
doi:10.1016/j.bbrc.2005.08.150。

S-亚硝化对转录因子阴阳1活性的抑制作用

附属公司

S-亚硝化抑制转录因子阴阳1活性

福米亚·洪奥等。 生物化学-生物物理研究委员会. .

摘要

用一氧化氮(NO)供体DETA/NONOate上调Fas表达,并使CaP细胞对Fas配体CH-11激动剂单克隆抗体诱导的凋亡敏感。先前的研究结果表明,受NO抑制的转录抑制因子阴阳1(YY1)负调控Fas转录[H.J.Garban,B。Bonavida,一氧化氮抑制Fas启动子沉默区的转录抑制因子阴阳1结合活性:一氧化氮在人类肿瘤细胞Fas基因表达上调中的关键作用,免疫学杂志。167 (2001) 75-81]. YY1是一种锌指蛋白,因此,我们假设NO通过Zn2+协调的关键半胱氨酸残基的S-亚硝化抑制YY1活性。用DETA/NONOate处理PC-3细胞可抑制EMSA评估的YY1的构成性DNA结合活性。此外,用DETA/NONOate处理后,通过两种不同的方法检测到YY1的S-亚硝化。基于DAN的方法检测用抗YY1特异性抗体免疫沉淀的NO-处理的肿瘤衍生细胞裂解物,并通过荧光法定量测定释放的NO。第二种方法是用抗SNO半胱氨酸抗体对肿瘤细胞裂解物进行免疫沉淀,并用抗YY1抗体对免疫沉淀进行免疫印迹。两种方法均显示,与对照未经处理的细胞相比,DETA/NONOate处理的YY1发生了显著的S-亚硝化。免疫组织化学双色免疫荧光法进一步证实了YY1的S-亚硝化作用。用siRNA YY1转染细胞,证明了YY1在Fas表达负调控中的直接作用。在未经DETA/NONOate处理的情况下,转染剂表现出Fas表达上调,并对CH-11诱导的凋亡敏感。总之,这些发现表明NO通过S-亚硝化抑制YY1 DNA结合活性,从而导致Fas表达上调和肿瘤细胞对Fas诱导的凋亡的敏感性。

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