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2005年12月;35(1):27-39.
doi:10.1007/s00249-005-0002-1。 Epub 2005年7月15日。

膜模拟系统中的单跨膜蛋白插入:芳香残基的作用和定位

附属公司

膜模拟系统中的单跨膜蛋白插入:芳香残基的作用和定位

Yves-Marie公司等。 欧洲生物物理杂志 2005年12月

摘要

脂质双层中的膜蛋白插入决定其活性,并受各种因素控制,例如特定序列基序或关键氨基酸。PMP1是一种小的(38个残基)单膜跨度蛋白,可调节酵母中的质膜H(+)-ATPase,并与磷脂酰丝氨酸特异性相互作用。这种相互作用可以稳定已证明含有H(+)-ATP酶的筏结构域。以往对各种碎片的核磁共振研究集中于界面残基在PMP1结构和分子间相互作用中的关键作用。C末端结构域包含一个末端Phe(F38)、一个单一Trp(W28)和一个单一Tyr(Y25),它们可以一起作用以将蛋白质锚定在膜中。为了描述W28的位置和动力学以及Y25对膜内蛋白质插入的影响,我们对合成的G13-F38片段及其无轮胎突变体Y25L在各种膜模拟系统中进行了详细的稳态和时间分辨荧光研究。为此,可以方便地使用洗涤剂胶束。我们使用十二烷基磷酸胆碱(DPC)来比较和补充先前的核磁共振结果。此外,还使用了十二烷基麦芽糖苷(DM),以便我们可以通过DM的两种溴化类似物应用我们最近描述的新淬火方法(de Foresta等人,2002年,《欧洲生物物理杂志》31:185-97)。在这两种体系中,以及在Y25存在和不存在的情况下,W28被显示位于极性头基区域下方但靠近极性头基区域,如其最大发射波长(λ(max))、DM的溴化类似物对Trp的猝灭曲线和丙烯酰胺对Trp的猝灭双分子常数(k(q))所示。通过与用荧光模型肽获得的校准数据进行比较,对结果进行了解释。时间分辨各向异性测量与多肽清除剂复合物中PMP1片段的固定相一致。根据最近提出的模型环状肽的生命周期-转子体相关性,我们初步将两个主要的Trp生命周期分配给Trp(chi(1)=60度和180度)转子体(Pan和Barkley 2004,Biophys J 86:3828-35)。我们还通过比较不同长度片段(包括合成的全长蛋白质)的胶束结合,分析了疏水锚的作用,并检测到蛋白质与DM或DPC极性头基相互作用的特殊差异。

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    1. 生物化学科学趋势。2000年9月;25(9):429-34-公共医学
    1. 生物化学。1982年8月17日;21(17):4144-51-公共医学
    1. 生物物理杂志,1998年9月;75(3):1365-71-公共医学
    1. 生物化学。1997年6月17日;36(24):7339-52-公共医学
    1. 生物化学。1998年5月至6月;80(5-6):451-9-公共医学

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