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.2005年5月27日;280(21):20539-48.
doi:10.1074/jbc。M500577200。 Epub 2005年3月17日。

PICK1中PDZ结构域复合结合特异性的分子决定簇

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PICK1中PDZ结构域复合结合特异性的分子决定簇

肯尼思·马德森等人。 生物化学杂志. .
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摘要

PICK1(与C激酶1相互作用的蛋白质)包含一个已知的PDZ结构域,可介导与几种受体、转运体、离子通道和激酶的C末端的相互作用。与大多数PDZ域相比,PICK1-PDZ域与可分类为I型(终止于(S/T)XPhi;十、 以及II型(PhiXPhi;Phi,任何疏水性残留物)。为了能够直接评估PICK1-PDZ结构域对其结合伙伴的亲和力,我们开发了PICK1纯化方案和基于荧光偏振的新型定量结合分析。我们的结果表明,PICK1 PDZ结构域与人类多巴胺转运体(-WLKV)呈现的II型序列结合,其亲和力分别比蛋白激酶Calpha(-QSAV)和β(2)-肾上腺素能受体(-DSL)呈现的I型序列高约15倍和>100倍。对PDZ结构域αB1位置Lys(83)的突变分析表明,该残基模拟了规则II型PDZ结构区中该位置的疏水残基的功能。此外,还发现PICK1-PDZ结构域更喜欢配体C末端P(0)位置的小疏水残基。分子模型预测了(Val>Ile>Leu)的秩序,实验验证了在P(0)中缬氨酸和亮氨酸之间的结合亲和力相差约16倍。结果通过证实配体αB1位置(Lys(83))和位置P(0)的离散侧链差异的关键作用,确定了PICK1-PDZ结构域异常结合模式的结构基础。

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