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.2005年2月;5(2):522-33.
doi:10.1002/pmic.200400959。

复杂生物体的蛋白质组动力学:使用稳定同位素监测单个蛋白质周转率

附属公司

复杂生物体的蛋白质组动力学:使用稳定同位素监测单个蛋白质周转率

玛丽·多尔蒂等。 蛋白质组学. 2005年2月.

摘要

蛋白质组变化的完整定义需要有关动力学的信息,特别是单个蛋白质在细胞内翻转的速率。虽然这可以在使用稳定同位素前体的单细胞培养中实现,但开发完整动物的方法更具挑战性。在本研究中,我们展示了饮食中摄入稳定同位素标记氨基酸如何获得蛋白质组中单个蛋白质合成和降解相对速率的信息。胰蛋白酶肽中稳定同位素标记的模式可以被解构,以获得前体池同位素丰度的高度可靠测量,而这一参数通常很难获得。我们用喂食含有[(2)H(8)]缬氨酸的半合成饲料的鸡证明了这种方法,计算出的相对同位素丰度(RIA)为0.5。分析凝胶溶解的肌肉蛋白质的标记模式时,细胞内前体同位素丰度为0.35,这与氨基酸前体池中未标记的氨基酸的稀释一致,这些氨基酸是由先前存在的蛋白质降解而来的。然而,RIA在延长的标记窗口内是稳定的,并且允许计算凝胶电泳分离的单个蛋白质的合成和降解速率。第一次,考虑分析完整动物中单个蛋白质的周转是可行的。

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