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.1992年4月;117(1):169-78.
doi:10.1083/jcb.117.169。

蛋白激酶抑制剂防止低细胞外钙诱导MDCK上皮细胞连接分离

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蛋白激酶抑制剂防止低细胞外钙诱导MDCK上皮细胞连接分离

S花旗. J细胞生物学. 1992年4月.

摘要

当上皮细胞培养物从细胞外钙浓度正常(1-2 mM)的培养基转移到细胞外钙含量低(LC,小于50 microM游离Ca2+)的培养液中时,细胞与细胞之间的接触被破坏,紧密连接依赖的跨上皮电阻下降。在本研究中,我使用MDCK上皮细胞来研究LC对紧密连接蛋白扣带蛋白定位的影响,以及蛋白激酶在LC诱导的事件中的作用。免疫荧光分析表明,在LC中融合单层培养15分钟内,扣带蛋白标记从细胞外周错位,形成环状结构的颗粒阵列。在钙去除后的后期,扣带蛋白标记主要出现在细胞质中,呈弥散粒状,细胞呈圆形且较小。这些事件不受血清缺乏或与10 mM叠氮化钠或6 mg/ml环己酰亚胺预孵育的影响。然而,当用蛋白激酶抑制剂H-7(大于或等于30μM)预处理细胞时,LC诱导的细胞间接触的中断、细胞形状变化以及扣带蛋白和其他连接蛋白的重新分布被抑制。抑制剂H-8和较小程度的staurosporine也有效,而HA-1004和ML-7基本上没有活性,表明不同抑制剂的作用具有特异性。跨上皮电阻的测量表明,能够阻止连接解体的激酶抑制剂也可以减少LC引起的跨上皮电阻下降。剂量-反应曲线表明,H-7是这些抑制剂中最有效的,除钙后1h,细胞的跨上皮阻力为对照的70%。这些结果表明,低细胞外钙通过涉及蛋白激酶的效应系统调节连接完整性和细胞骨架组织。

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