Cargo proteins facilitate the formation of transport vesicles in the cytoplasm to vacuole targeting pathway

doi:10.1074/jbc.M404399200

.2004年7月16日；279(29):29889-94.

doi:10.1074/jbc。M404399200。 Epub 2004年5月11日。

货运蛋白促进细胞质到液泡靶向通路中运输小泡的形成

Takahiro Shintani公司¹, 丹尼尔·克林斯基

附属公司

PMID： 15138258
预防性维修识别码：项目经理1712665
内政部： 10.1074/jbc。M404399200型

货运蛋白促进细胞质到液泡靶向通路中运输小泡的形成

Takahiro Shintani公司等。生物化学杂志. 2004.

.2004年7月16日；279(29):29889-94.

doi:10.1074/jbc。M404399200。 Epub 2004年5月11日。

作者

Takahiro Shintani公司¹, 丹尼尔·克林斯基

附属

¹美国密歇根州安阿伯市密歇根大学生命科学研究所及分子、细胞、发育生物学和生物化学系，邮编：48109。

PMID： 15138258
预防性维修识别码：项目经理1712665
内政部： 10.1074/jbc。M404399200型

摘要

选择性地将货物蛋白并入形成的囊泡是通过囊泡运输靶向蛋白质的一个重要方面。根据目前囊泡运输中的货物选择范式，待分类到其他细胞器的蛋白质浓缩在供体细胞器中的囊泡出芽部位，这一过程由货物蛋白和外壳蛋白之间的相互作用介导，构成囊泡形成机制的一部分。细胞质到液泡靶向（Cvt）通路是酵母中一种非常规的囊泡转运途径，它与自噬有着拓扑和力学上的联系。氨肽酶I（Ape1）是Cvt途径的主要转运蛋白。与传统囊泡转运的情况不同，前体Ape1及其受体Atg19/Cvt19被包装成一个巨大的复合物，称为Cvt复合物，与囊泡形成机制无关。随后将Cvt复合物并入形成的Cvt囊泡中。APE1或ATG19的缺失损害了自噬前结构（PAS）的组织，PAS被认为在Cvt囊泡/自噬体形成中起关键作用。PAS的正确组织还需要Atg11/Cvt9，这是一种将货物复合物定位在PAS的蛋白质。因此，APE1、ATG19或ATG11的缺失影响了Cvt囊泡的形成。这些观察表明了一个独特的概念；在Cvt途径中，货运蛋白促进受体募集和囊泡形成，而不是在大多数囊泡转运的情况下，即形成的囊泡集中货运蛋白。

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数字

图1
**Cvt货物受体复合体是高效向液泡输送Atg8所必需的。** A类，从GFP-Atg8产生的游离GFP反映了通过Cvt和自噬途径的递送。野生型，*atg1处*Δ和*第四人民党*表达GFP-Atg8的Δ细胞（分别为YTS187、YTS188和YTS189）在SCD（富培养基；生长条件）中生长至A类₆₀₀=1.0，并在SD（-N）中饥饿3小时。细胞裂解物相当于A类₆₀₀=0.1单位的细胞用抗Ape1抗血清和抗GFP抗体进行免疫印迹分析。B类在缺乏Ape1、Atg19和Atg11的情况下，Atg8向液泡的传递被阻断或广泛延迟。这个*atg1处^ts秒，atg1^ts秒脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1*Δ,*atg1处^ts秒第19天*Δ和*atg1处^ts秒第11天*表达GFP-Atg8的Δ细胞（分别为YTS201、YTS203、YTS202和YTS204）在SCD中生长至A类₆₀₀=1.0，在37°C的非许可温度下。使用或不使用0.2μg/ml雷帕霉素治疗后(说唱)在37°C下培养10分钟，将细胞转移到30°C的允许温度，并培养指定的时间。如图所示，通过免疫印迹分析Ape1和GFP-Atg8A类前体和成熟Ape1的位置(*mApe1型*)以及全长GFP-Atg8和游离GFP。这个星号标记一个非特异性的交叉反应带。

图2
**含有自噬前结构的细胞的定量。**野生型，*脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1*Δ,*第11天*Δ和*第19天*表达GFP-Atg8（YTS187、YTS190、YTS191和YTS192）、GFP-Atg 2（YTS193、YTS 194、YST195和YTS 196A类₆₀₀=1.0，在SD（-N）中饥饿1小时。对于每个菌株，通过荧光显微镜对含有荧光斑点的150-250个细胞进行定量。*误差线*表示三个独立实验的S.D。染色体*视频处理38*在表达Atg20-YFP的细胞中删除该基因，以消除内体的点状定位（详见正文）。在生长条件下，但在饥饿条件下，在不存在Cvt货物受体复合物的情况下，GFP-Atg8、GFP-Atg2、GFP-Atg1和Atg20 YFP对PAS的Puctate定位大大降低。

图3
**在不断增长的条件下，Atg9自行车需要Cvt货物接收器复合体。**这个*atg1处*Δ,*atg1处*Δ*脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1*Δ和*atg1处*Δ*第19天*表达Atg9-YFP的Δ细胞（分别为FRY138、YTS136和YTS135）在SCD（富培养基；生长条件）中生长，然后转移到SD（-N）（饥饿条件）并通过荧光显微镜观察。Atg9通常传输到PAS，并以依赖于Atg1的方式从此站点检索。在缺乏Cvt货物受体复合体的情况下，向PAS的递送是有缺陷的。

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