A potential oncogenic activity of platelet-derived growth factor d in prostate cancer progression

doi:10.1158/0008-5472.can-03-3047

.2004年3月1日；64(5):1722-9.

doi:10.1158/0008-5472.can-03-3047。

血小板衍生生长因子d在前列腺癌进展中的潜在致癌活性

卡罗琳·乌斯塔奇¹, 马库斯·陶布, 小牛顿·J·赫斯特, 苏尼塔·巴加特, R丹尼尔·邦菲尔, 迈克尔·L·切尔, 露西娅·舒格, Hyeong-Rhe Choi Kim先生

附属公司

PMID： 14996732
预防性维修识别码：下午4点171134分
内政部： 10.1158/0008-5472.can-03-3047

血小板衍生生长因子d在前列腺癌进展中的潜在致癌活性

卡罗琳·乌斯塔奇等。癌症研究. 2004.

.2004年3月1日；64(5):1722-9.

doi:10.1158/0008-5472.can-03-3047。

作者

卡罗琳·乌斯塔奇¹, 马库斯·陶布, 小牛顿·J·赫斯特, 苏尼塔·巴加特, R丹尼尔·邦菲尔, 迈克尔·L·切尔, 露西娅·舒格, Hyeong-Rhe Choi Kim先生

附属

¹美国密歇根州底特律市医学院韦恩州立大学芭芭拉·安·卡马诺斯癌症研究所病理学系，邮编：48201。

PMID： 14996732
预防性维修识别码：项目经理4171134
内政部： 10.1158/0008-54472.can-03-3047

摘要

血小板衍生生长因子（PDGF）蛋白是细胞增殖/转化的有力刺激物，在细胞间通讯中起着重要作用。二十多年来，PDGFs被认为是作为三种二聚体多肽存在的（同型二聚体AA和BB以及异二聚体AB）。然而，最近在表达序列标签数据库的BLAST搜索中发现了PDGF C和D链。PDGF CC和DD二聚体具有独特的双域结构，具有NH（2）末端CUB（互补子成分C1r/C1s、Uegf和Bmp1）域和COOH末端PDGF/血管内皮生长因子域。尽管分泌的PDGF AA、BB和AB很容易激活它们的细胞表面受体，但有人认为，PDGF CC和DD的PDGF/血管内皮生长因子结构域需要细胞外蛋白水解去除CUB结构域来激活PDGF受体。在本研究中，我们检测了潜在PDGF D转化为其活性形式的过程以及PDGF D-表达对前列腺癌进展的影响。我们发现LNCaP细胞自动激活潜伏的PDGF DD进入活性PDGF结构域，这可以诱导β-PDGF受体磷酸化，并以自分泌方式刺激LNCaP细胞增殖。此外，LNCaP-PDGF D条件培养基诱导前列腺成纤维细胞系1532-FTX迁移，表明LNCaP处理的PDGF DD也以旁分泌方式激活。在严重联合免疫缺陷小鼠模型中，PDGF DD的表达加快了前列腺肿瘤生长的早期开始，并显著增强了前列腺癌细胞与周围基质细胞的相互作用。这表明PDGF DD在前列腺癌的发展和/或进展中具有潜在致癌活性。

PubMed免责声明

数字

图1
血小板衍生生长因子（PDGF）D在LNCaP中的过度表达和处理。*A、，*亲代LNCaP中PDGF D的RNA水平(*车道1*)，LNCaP-neo(*2号车道*)和LNCaP-PDGF D(*3号车道*)使用扩增内源性和外源性PDGF D的引物（见“材料和方法”）通过逆转录-PCR对细胞进行检测。包括无模板的阴性对照(*车道4*).B、，LNCaP-neo和LNCaP-PDGF D细胞在完全培养基中生长至100%融合，用PBS洗涤一次，然后在无血清培养基中培养48h。收集所得条件培养基，并在还原条件下使用SDS-PAGE分解蛋白质。用抗PDGF D/GD抗体免疫印迹法检测条件培养液中的PDGF D。*FL-M、，*全长PDGF D原蛋白单体；*GD-M、，*PDGF D生长因子域单体。

图2
血小板衍生生长因子（PDGF）D在细胞表面/附近进行处理。*A、，*用痘苗病毒vTF7-3和质粒pTF7-PDGF D:HIS共同感染/转染BS-C-1细胞。共感染/转染后，细胞在无血清培养基或胎牛含血清培养基（如图所示）中生长48小时。从感染细胞中收集条件培养基（CM），并在还原或非还原条件下使用SDS-PAGE进行溶解，如图所述。为了获得条带的最佳分辨率，无血清CM在10%SDS-PAGE凝胶上运行，含胎牛血清CM在14%SDS-PACE凝胶上运行。*B、，*重组PDGF D(*rPDGF D型*)与缺乏血清的LNCaP-neo细胞孵育(*左侧面板*)或用从血清饥饿的LNCaP-neo细胞收集的条件培养基培养48小时(*右侧面板*)在37°C下持续4或24小时。在缺乏rPDGF D的情况下进行对照实验(*车道1*在两个面板中）。所有样品在还原条件下在SDS-PAGE凝胶上解析，并使用抗PDGF D/GD抗体通过免疫印迹进行分析。*C、，*在缺乏或存在rPDGF D的情况下培养血清饥饿的LNCaP-neo和LNCaP-PDGF D细胞4小时，然后从细胞中收集培养基并在还原条件下在SDS-PAGE凝胶上溶解，并使用抗PDGF D/GD抗体分析免疫印迹。**，加工rPDGF D的中间形式。*FL-D、，*全长PDGF D原蛋白二聚体；*FL-M、，*全长PDGF D原蛋白单体；*GD-D、，*PDGF D生长因子结构域二聚体；*GD-M、，*PDGF D生长域单体。

图3
LNCaP处理的血小板衍生生长因子（PDGF）D具有生物活性。*A、，*用来自LNCaP-PDGF D的5 ml条件培养基（CM）刺激血清饥饿的NIH3T3细胞(*车道3*和6)或LNCaP-neo(*车道4*和7)用5 ml无血清培养基（补充25 ng/ml PDGF BB）刺激缺乏血清的NIH3T3细胞10或60分钟，作为阳性对照(*车道1*)和无血清培养基刺激的细胞(*旧金山*)作为阴性对照(*车道2*和5).β-PDGF受体从250μg裂解物，如“材料和方法”所述。通过还原SDS-PAGE分解产生的免疫沉淀物，并用指示的抗体（Abs）进行免疫印迹分析。然后去除污渍并用抗-β-PDGF受体抗体测定免疫沉淀效率。*B、，*50μ用25 ng/ml PDGF BB处理NIH3T3细胞的裂解液g(*车道1*)，无血清培养基(*2号车道*)、LNCaP-PDGF D CM(*3号车道*)，或LNCaP-neo CM(*车道4*)通过还原SDS-PAGE进行解析，并使用对活性细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）1/2特异的抗体进行免疫印迹分析(*pERK1/2型*). 为了确定ERK1/2的基本水平，将相同的印迹剥离，并用识别ERK1/2活性和非活性形式的抗体进行免疫印迹。

图4
血小板衍生生长因子D以自分泌方式促进细胞生长。将细胞（6000个细胞/孔）置于96 well板中，LNCaP-PDGF D（■）和LNCaP-neo的相对细胞数()使用{4-[3-（4-碘苯基）-2-（4-硝基苯基）-2测定*H（H）*-在指定的时间点进行5-tetrazolio]-1-3苯二磺酸}（WST）检测（德国曼海姆罗氏诊断有限公司）。

公式图像 — 图4
血小板衍生生长因子D以自分泌方式促进细胞生长。将细胞（6000个细胞/孔）置于96 well板中，LNCaP-PDGF D（■）和LNCaP-neo的相对细胞数()使用{4-[3-（4-碘苯基）-2-（4-硝基苯基）-2测定*H（H）*-在指定的时间点进行5-tetrazolio]-1-3苯二磺酸}（WST）检测（德国曼海姆罗氏诊断有限公司）。

图5
与LNCaP-neo肿瘤相比，LNCaP-PDGF D肿瘤的发生加速。*A、，*1 × 10⁶将细胞注射于雄性重症联合免疫缺陷小鼠的侧腹，检测肿瘤发生率。为了确定2周的发病点，每只小鼠注射一次，每组共5只小鼠（共5次注射/细胞系）。由于在2周时无法触及肿瘤，因此将小鼠处死，并解剖皮肤以观察小结节的外观。为了确定5周内的肿瘤发病率，第二组小鼠每只小鼠注射2次，每组6只小鼠（总计12次/细胞系）。在第4周和第5周检查可触及的肿瘤。*B、，*肿瘤生长以平均肿瘤体积表示。*误差线*代表±SE。

图6
与LNCap-neo肿瘤相比，LNCap-PDGF D肿瘤中观察到的肿瘤-基质相互作用增加。注射后5周取出肿瘤，固定、切片并用H&E染色。*A、，*LNCaP-新肿瘤；*B、，*LNCaP-PDGF D肿瘤。星号表明肿瘤与基质的相互作用。

图7
血小板衍生生长因子（PDGF）D以旁分泌方式诱导人前列腺成纤维细胞的细胞运动。*A、，*伤口愈合试验。TFX-1532细胞生长到100%融合，然后用丝裂霉素C预处理30分钟以防止细胞增殖。制作损伤细胞系，在LNCaP-neo条件培养基或LNCaP-PDGF D条件培养基中培养细胞。照片是在指定的时间点拍摄的。*B、，*1532-FTX细胞迁移分析使用Transwell。在培养12小时后对迁移细胞进行计数。数据点表示迁移到过滤器底部的单元格的平均总数；实验一式三份，*P（P）*<0.05，由学生确定吨测试。

图8
血小板衍生生长因子D在人前列腺成纤维细胞存在时以次级旁分泌方式诱导LNCaP细胞运动。将LNCaP-neo或LNCaP-PDGF D细胞置于Transwell室过滤器顶部，在无血清培养基中无1532-FTX成纤维细胞或有1532-FTX成纤维细胞的情况下培养48小时。数据点表示迁移到过滤器底部的单元格的平均总数；实验一式三份，*P（P）*<0.05，由学生确定吨测试。

请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

前列腺癌细胞中的尿激酶纤溶酶原激活剂激活血小板衍生生长因子D。
Ustach简历，Kim HR。 Ustach CV等人。分子细胞生物学。2005年7月；25(14):6279-88. doi:10.1128/MCB.25.14.6279-6288.2005。分子细胞生物学。2005 PMID：15988036 免费PMC文章。
钙三醇抑制人前列腺细胞对血小板衍生生长因子-BB的生长反应。
Nazarova N、Golovko O、Bläuer M、Tuohimaa P。 Nazarova N等人。类固醇生物化学分子生物学杂志。2005年2月；94（1-3）：189-96。doi:10.1016/j.jsbmb.2005.01.17。Epub 2005年2月23日。类固醇生物化学分子生物学杂志。2005 PMID：15862965
丝氨酸蛋白酶激活血小板衍生生长因子-C（PDGF-C）：与乳腺癌进展的关系。
Hurst NJ Jr、Najy AJ、Ustach CV、Movilla L、Kim HR。 Hurst NJ Jr等人。《生物化学杂志》2012年2月1日；441(3):909-18. doi:10.1042/BJ20111020。《生物化学杂志》，2012年。 PMID：22035541 免费PMC文章。
小分子血小板衍生生长因子受体（PDGFR）抑制剂在肿瘤性疾病治疗中的作用。
罗斯科斯基R Jr。罗斯科斯基R Jr。《药理学研究》，2018年3月；129:65-83. doi:10.1016/j.phrs.2018.01.021。Epub 2018年2月3日。 2018年药理学研究。 PMID：29408302 审查。
PDGF家族：四种基因产物形成五种二聚体亚型。
Fredriksson L、Li H、Eriksson U。 Fredriksson L等人。细胞因子生长因子修订版，2004年8月；15(4):197-204. doi:10.1016/j.cytogfr.2004.03.007。细胞因子生长因子2004年版。 PMID：15207811 审查。

查看所有类似文章

引用人

通过单细胞测序分析探讨PDGFD在骨肉瘤转移中的影响。
黄Y，曹D，张M，杨Y，牛G，唐L，沈Z，张Z，白Y，敏D，何A。黄毅等。 Cell Oncol（多德）。2024年4月23日。doi:10.1007/s13402-024-00949-3。打印前在线。 Cell Oncol（多德）。2024 PMID：38652223
癌症相关成纤维细胞的异质性、激活和功能：前列腺癌的意义。
Owen JS、Clayton A、Pearson HB。 Owen JS等人。生物分子。2022年12月29日；13(1):67. doi:10.3390/biom13010067。生物分子。2022 PMID：36671452 免费PMC文章。审查。
使用第二代改良痘苗-安卡拉病毒系统生产重组血小板衍生生长因子D。
Naji AJ、Pham T、Pradeau Aubreton K、Drilien R、Kim HC。 Najy AJ等人。蛋白质科学。2022年11月；31（11）：e4468。doi:10.1002/pro.4468。蛋白质科学。2022 PMID：36214056 免费PMC文章。
E3连接酶HUWE1通过影响β-PDGFR的多泛素化，促进PDGF D介导的间充质干细胞成骨分化。
Pham T、Najy AJ、Kim HC。 Pham T等人。生物化学杂志。2022年6月；298(6):101981. doi:10.1016/j.jbc.2022.101981。Epub 2022年4月25日。生物化学杂志。2022 PMID：35472332 免费PMC文章。
糖尿病相关T细胞衰老在上皮性卵巢癌卵巢转移中的潜在作用。
百老汇R、Patel NM、Hillier LE、El-Briri A、Korneva YS、Zinovkin DA、Pranjol MZI。百老汇R等人。人寿保险（巴塞尔）。2021年8月4日；11(8):788. doi:10.3390/life11080788。人寿保险（巴塞尔）。2021 PMID：34440532 免费PMC文章。审查。

查看所有“被引用”文章

参考文献

1. Sakr WA、Grignon DJ、Crissman JD、Heilbrun LK、Cassin BJ、Pontes JJ、Haas GP。20-69岁之间的高级前列腺上皮内瘤变（HGPIN）和前列腺腺癌：249例尸检研究。在体内。1994;8:439–443。-公共医学
1. 小EJ，Reese DM，新泽西州Vogelzang。激素抵抗型前列腺癌：一种不断发展的护理标准。塞明·昂科尔。1999;26（补充17）：61–67。-公共医学
1. Hugosson J，Aus G.局限性前列腺癌的自然病程：个人观点和已发表论文综述。1997年抗癌研究；17:1441–1448.-公共医学
1. Rosenkranz S，Kazlauskas A.PDGF受体α和β亚型诱导的不同信号特性和生物反应的证据。生长因子。1999;16:201–216.-公共医学
1. Yu J，Ustach C，Kim HR。血小板衍生生长因子信号转导与人类癌症。生物化学与分子生物学杂志。2003;36:49–59.-公共医学

出版物类型

行动

MeSH术语

行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动

物质

行动
行动
行动
行动

赠款和资金

LinkOut-更多资源

[1] Sakr WA、Grignon DJ、Crissman JD、Heilbrun LK、Cassin BJ、Pontes JJ、Haas GP。20-69岁之间的高级前列腺上皮内瘤变（HGPIN）和前列腺腺癌：249例尸检研究。在体内。1994;8:439–443。-公共医学

[2] Sakr WA、Grignon DJ、Crissman JD、Heilbrun LK、Cassin BJ、Pontes JJ、Haas GP。20-69岁之间的高级前列腺上皮内瘤变（HGPIN）和前列腺腺癌：249例尸检研究。在体内。1994;8:439–443。-公共医学

[3] 小EJ，Reese DM，新泽西州Vogelzang。激素抵抗型前列腺癌：一种不断发展的护理标准。塞明·昂科尔。1999;26（补充17）：61–67。-公共医学

[4] 小EJ，Reese DM，新泽西州Vogelzang。激素抵抗型前列腺癌：一种不断发展的护理标准。塞明·昂科尔。1999;26（补充17）：61–67。-公共医学

[5] Hugosson J，Aus G.局限性前列腺癌的自然病程：个人观点和已发表论文综述。1997年抗癌研究；17:1441–1448.-公共医学

[6] Hugosson J，Aus G.局限性前列腺癌的自然病程：个人观点和已发表论文综述。1997年抗癌研究；17:1441–1448.-公共医学

[7] Rosenkranz S，Kazlauskas A.PDGF受体α和β亚型诱导的不同信号特性和生物反应的证据。生长因子。1999;16:201–216.-公共医学

[8] Rosenkranz S，Kazlauskas A.PDGF受体α和β亚型诱导的不同信号特性和生物反应的证据。生长因子。1999;16:201–216.-公共医学

[9] Yu J，Ustach C，Kim HR。血小板衍生生长因子信号转导与人类癌症。生物化学与分子生物学杂志。2003;36:49–59.-公共医学

[10] Yu J，Ustach C，Kim HR。血小板衍生生长因子信号转导与人类癌症。生物化学与分子生物学杂志。2003;36:49–59.-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

您的RSS源

血小板衍生生长因子d在前列腺癌进展中的潜在致癌活性

附属

血小板衍生生长因子d在前列腺癌进展中的潜在致癌活性

作者

附属

摘要

数字

类似文章

引用人

参考文献

出版物类型

MeSH术语

物质

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

医疗

研究材料

其他

摘要

数字

类似文章

引用人

参考文献

出版物类型

MeSH术语

物质

相关信息

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

医疗

研究材料

其他