Yeast Mre11 and Rad1 proteins define a Ku-independent mechanism to repair double-strand breaks lacking overlapping end sequences

doi:10.1128/MCB.23.23.8820-8828.2003

.2003年12月；23(23):8820-8.

doi:10.1128/MCB.23.23.8820-8828.2003。

酵母Mre11和Rad1蛋白定义了Ku依赖性机制，以修复缺乏重叠末端序列的双链断裂

贾林马¹, 金恩美, 詹姆斯·哈伯, 桑恩·李

附属公司

PMID： 14612421
预防性维修识别码：项目经理262689
DOI（操作界面）： 10.1128/MCB.23.23.8820-8828.2003年

酵母Mre11和Rad1蛋白定义了Ku依赖性机制，以修复缺乏重叠末端序列的双链断裂

贾林马等。摩尔细胞生物学. 2003年12月.

.2003年12月；23(23):8820-8.

doi:10.1128/MCB.23.23.8820-8828.2003。

作者

贾林马¹, 金恩美, 詹姆斯·哈伯, 桑恩·李

附属

¹美国德克萨斯州圣安东尼奥市德克萨斯大学健康科学中心生物技术研究所分子医学系，邮编78245。

PMID： 14612421
预防性维修识别码：项目经理262689
DOI（操作界面）： 10.1128/MCB.23.23.8820-8828.2003年

摘要

双链断裂（DSB）的末端连接需要Ku蛋白，并且经常涉及互补末端序列之间的碱基配对。为了确定末端碱基配对在末端连接中的作用，将两个相向相反的HO内切酶切割位点整合到酵母染色体III中，其中HO内切酶的组成性表达创建了两个同时存在的没有互补末端序列的DSB。它们的3'单股悬垂部分缺乏互补序列，这有助于有效的修复事件，这与3'端具有以各种方式配对的4-bp序列基以创建2-3bp插入的情况截然不同。非补体末端的修复导致一组高达302 bp的非随机缺失，通过接合处约8-10 bp的不完全微同源性进行退火。这种微同源介导的末端连接（MMEJ）是Ku独立的，但强烈依赖于Mre11、Rad50和Rad1蛋白，部分依赖于Dnl4蛋白。当Rad52缺失时，MMEJ也会发生，但缺失的程度变得更加有限。与rad52Delta yku70Delta菌株相比，rad1Delta rad52Delta yku70Delta菌株的伽马射线敏感性增加，这表明MMEJ也有助于修复电离辐射诱导的DSBs。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
HO裂解位点材料SLY18和SLY19中第三染色体的位点。HO内切酶诱导后，SLY18产生两个互补性断裂，而SLY19则形成非互补性断裂。用于PCR扩增和幸存者修复连接序列分析的引物的位置如箭头所示。

**图2。**
影响的实证分析*雷达1*,*RAD52型*、和*YKU70型*γ射线超敏反应。采集酵母细胞的对数培养物，并将其重新悬浮在磷酸盐缓冲盐水中，将其置于YEP-葡萄糖培养基上，并用指示剂量的γ射线照射。在生长3至4天后，对存活的菌落进行计数，并通过与模拟处理细胞的菌落数量进行比较来计算存活率。存活率*无线电频率*⁺（实心圆），*放射性1*Δ（开口钻石），*yku70型*Δ（实心钻石），*雷达52*Δ（方形开口），*雷达52*Δ*yku70型*Δ（实心三角形），*放射性1*Δ*雷达52*Δ（开环），*放射性14*Δ*雷达52*Δ*yku70型*Δ（开放三角形），以及*雷达1*Δ*雷达52*Δ*yku70型*Δ（实心正方形）单元格如图所示。每个实验点代表三个独立实验的平均值。

**图3。**
MMEJ模型。所示为SLY19中最频繁的加入活动。假设由两个HO内切酶识别序列的裂解所产生的4-bp 3′非互补悬垂的末端处理将揭示调节退火的微同源性。随后主要依赖于Rad1-Rad10的3′-皮瓣切除将启动Dnl4的填充合成和连接。微同源性以粗体显示。未配对的3′襟翼显示为小写字母。箭头右侧列出了每个步骤中可能起作用的基因产物。

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