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.1992年7月7日;31(26):6111-8.
doi:10.1021/bi00141a022。

体外高尔基体蛋白质转运中的囊泡融合不涉及长寿命的预融合中间产物。对糖基化测定的转运动力学的重新评估

附属公司

体外高尔基体蛋白质转运中的囊泡融合不涉及长寿命的预融合中间产物。对糖基化测定的转运动力学的重新评估

R R Hiebsch先生等。 生物化学. .

摘要

特征良好的无细胞分析测量高尔基体各室之间的蛋白质转运[Balch,W.E.,Dunphy,W.G.,Braell,W.A.,&Rothman,J.E.(1984)cell 39,405-416]利用糖蛋白的糖基化标记该蛋白质从一个高尔基体室到下一个高尔基体室的运动。糖基化被认为是在囊泡携带糖蛋白与其转运靶点融合后立即发生的。因此,我们采用糖基化动力学来反映囊泡融合的动力学。我们之前分离并制备了一种蛋白(预融合操作蛋白,POP)的单克隆抗体,该蛋白是在囊泡明显形成并与靶膜相互作用后,但在糖基化发生之前很久的一个步骤中检测所需的。因此,推测这是一种涉及靶向但未融合囊泡的反应。在这里,我们报告了POP与尿苷单磷酸激酶相同,正如分子克隆所揭示的那样。我们表明,POP本身在转运中并不活跃,而是增强了用于标记转运的糖基化作用。这表明,与先前的假设相反,糖基化可能明显滞后于囊泡融合。我们直接证明了这一点。这改变了对几个早期研究的解释。特别是,可以看出,先前报告的存在一种晚期预融合中间体,即“抗NEM中间体”,是由于对糖基化的影响,而不是真正的融合事件。

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