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.2003年8月；34(4):413-20.
doi:10.1038/ng1217。

编码inversin的INVS突变导致2型肾病，将肾囊性疾病与初级纤毛功能和左右轴测定联系起来

埃德加·A·奥托 1, 伯恩哈德·舍尔默, Tomoko Obara先生, 约翰·奥图尔, 卡尔·S·希勒, 阿德海德·穆勒, Rainer G Ruf公司, 朱莉娅·霍费尔, 弗兰克·比克曼, 丹尼尔·兰道, 约翰·W·福尔曼, 朱迪思A Goodship, 汤姆·斯特拉坎, 安德烈亚斯·基斯佩特, 马蒂亚斯·T·沃尔夫, 玛丽·加格纳杜克斯, 休伯特·尼韦, 科琳·安提纳克, 格德·沃尔兹, 伊恩·A·德拉蒙德, 托马斯·本兴, 弗里德海姆·希尔德布兰特
附属公司

编码反转蛋白的INVS基因突变导致2型肾病，将肾囊性疾病与初级纤毛功能和左右轴测定联系起来

埃德加·A·奥托等。 自然基因. 2003年8月.

摘要

肾病（NPHP）是一种常染色体隐性遗传囊性肾病，可导致儿童慢性肾功能衰竭。已鉴定出NPHP1和NPHP4中突变的基因，并绘制了与婴儿肾病（NPHP2）相关的基因位点。NPHP2的肾脏表型结合了NPHP和多囊肾病（PKD）的临床特征。在这里，我们将反转蛋白（inversin，INVS）确定为NPHP2中发生突变的基因，无论是否存在反转位点。我们展示了反转蛋白与肾胱氨酸（NPHP1中突变基因的产物）的分子相互作用，以及肾胱胺酸与初级纤毛的主要成分β-微管蛋白的相互作用。我们发现肾胱氨酸、转化蛋白和β-微管蛋白与肾小管细胞的原发纤毛共定位。此外，我们通过敲低斑马鱼invs表达，产生了PKD样肾囊性表型和心脏循环的随机性。倒置蛋白、肾胱氨酸和β-微管蛋白在纤毛中的相互作用和共定位将NPHP的发病机制与PKD、初级纤毛功能和左右轴的确定联系起来。

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图1
图1
中的突变INVS公司NPHP2患者。(一,d日)中的突变INVS公司（核苷酸交换和氨基酸交换）与突变序列（顶部）和健康对照序列（底部）的序列轨迹一起显示。以上方框中给出了家庭编号。如果只显示一个突变，则它发生在纯合状态，但个体A10除外，在该个体中只检测到杂合状态的一个突变。在个体868中，2742insA突变出现在反向链的翻转版本中。(b条)外显子结构INVS公司。线表示相对位置并与在INVS公司。打开和填充框表示INVS公司相对于比例尺绘制的外显子。显示了核苷酸+1处的起始密码子（ATG）和终止密码子（TGA）的位置。(c)蛋白质模体的表示被绘制成与外显子结构平行的比例。线连接到检测到的点突变，如方框所示(一,d日). 氨基酸残基；Ank，ankyrin/swi6图案；D1、D盒1（Apc2-binding）；D2、D箱2；IQ，钙调素结合域。
图2
图2
肾胱氨酸与HEK293T细胞和小鼠组织中的反转蛋白相关。(一)Myc标记的肾胱氨酸（Myc–NPHP1）与N末端FLAG标记的全长反转蛋白（FLAG–INV）或FLAG标记TRAF2（FLAG-TRAF2）蛋白共表达，作为阴性对照。用抗FLAG抗体免疫沉淀后，用肾胱氨酸特异性抗血清检测共沉淀肾胱胺酸（左表）。我们使用肾胱氨酸抗体（中间面板）或FLAG特异性和肾胱胺酸特异性抗体（右侧面板）通过免疫印迹控制细胞裂解物中的蛋白质表达水平。分子量标记以kDa表示。(b条)将全长肾胱氨酸融合到人IgG1的CH2和CH3结构域，并用蛋白G琼脂糖珠沉淀。如FLAG特异性抗体所示，FLAG标记的逆转蛋白与肾胱氨酸特异性共沉淀，但与对照蛋白（未经肾胱蛋白融合的人类IgG1的CH2和CH3结构域）无特异性共沉淀。(c)作为阴性对照的FLAG标记的肾胱氨酸或FLAG标记TRAF2蛋白与N-末端Myc-tagged全长反转蛋白（Myc–INV）共表达。用抗FLAG抗体免疫沉淀后，用反转蛋白特异性抗血清（左、中面板）检测共沉淀反转蛋白。右图显示用FLAG特异性抗体开发的裂解物对照。(d日)MBP-inversin融合蛋白（小鼠inversin的氨基酸561-716）的兔抗血清可特异识别HEK293T细胞中表达的inversin（氨基酸1–716）（左侧面板），但不包括FLAG标记的控制蛋白podocin（FLAG–podocin）、肾胱氨酸（FLAG-NPHP1）或PACS-1（FLAG-PACS–1，氨基酸85–280；左侧面板）。它还特异性识别重组GST反转蛋白（氨基酸561–716），但不识别其他两种对照GST融合蛋白（下图）。(电子)显示内源性肾胱氨酸转化酶相互作用体内在小鼠肾脏中，一半的小鼠肾脏组织裂解物用血凝素对照抗体免疫沉淀，另一半用抗肾胱氨酸抗血清沉淀。用inversin特异性抗血清（右上面板）检测固定化inversin。通过重制肾胱氨酸印迹（右下面板）确认内源性肾胱胺酸沉淀。左侧面板显示裂解物控制。
图3
图3
肾胱氨酸与β-微管蛋白的分子相互作用。(一)为了鉴定肾胱氨酸相互作用蛋白，用FLAG标记的控制蛋白GFP或FLAG标记肾胱胺酸转染HEK 293T细胞。使用抗微管蛋白抗体的2D凝胶免疫印迹证实了β-微管蛋白与肾胱氨酸的特异性关联。免疫球蛋白轻链。(b条)生成了几个FLAG标记的肾胱氨酸截短片段，以分析肾胱胺酸与β-微管蛋白的相互作用。内源性β-微管蛋白与转染的全长肾胱氨酸沉淀，但与对照蛋白GFP或TRAF2无沉淀（上面板）。中间面板，裂解物中天然β-微管蛋白的表达。下图显示了中图中所示的具有抗FLAG抗体的膜的重拷贝（在62kDa标记物以下仍检测到β-微管蛋白），证实了FLAG标记蛋白的可比表达水平。(c)这种相互作用被映射到涉及氨基酸237–670的肾胱氨酸区域(c，上部面板）。显示了β-微管蛋白的表达水平(c，底部面板）。用抗FLAG抗体重复印迹，以确认裂解物中FLAG标记蛋白的表达(c，下部面板）。(d日)纤毛mCcd-K1细胞中内源性β-微管蛋白与天然肾胱氨酸的共沉淀。mCcd-K1细胞生长7天，直到识别出纤毛（数据未显示）。对细胞裂解物进行广泛预处理，用对照抗体（Ab）或肾胱氨酸特异性抗血清进行免疫沉淀，并用10%SDS-PAGE分离。我们使用β-微管蛋白特异性抗体在含有肾胱氨酸的沉淀物中检测到内源性β-微管蛋白，这表明肾胱胺酸-β-微管制蛋白相互作用发生体内.
图4
图4
肾胱氨酸和反转蛋白定位于肾小管上皮细胞的初级纤毛。(一)MDCK细胞初级纤毛中肾胱氨酸和β-微管蛋白-4的结肠化。上下面板显示了纤毛的两个示例。野生型MDCK细胞（克隆II）在盖玻片上100%融合生长，并在实验前培养7天，以实现完全极化和纤毛形成。使用肾胱氨酸特异性抗体和在顶膜水平捕获的共焦图像通过免疫荧光测定肾胱胺酸的定位。细胞与兔抗肾胱氨酸抗体（左面板）和小鼠抗β-微管蛋白-4抗体（中面板）共染色，然后是相应的二级抗体。(b条)通过阻断重组肾胱氨酸蛋白，证实了肾胱蛋白在原发纤毛中的特异性定位。(c)反转蛋白定位于MDCK细胞的初级纤毛。内源性反转蛋白的定位通过使用反转蛋白特异性抗体的免疫荧光测定，共聚焦图像在顶膜水平捕获。用小鼠抗β-微管蛋白-4抗体和兔抗转化蛋白抗体对细胞进行联合培养，然后是各自的二级抗体（下图）。在其他染色中，省略了β-微管蛋白-4抗体，以减少反转蛋白和β-微管蛋白-4信号之间的潜在光谱重叠（上面板）。(d日)初级纤毛中肾胱氨酸和反转蛋白的部分共定位。使用肾胱氨酸特异性抗体和在顶膜水平捕获的共焦图像通过免疫荧光测定肾胱胺酸的定位。细胞与山羊抗逆转蛋白抗体（左图）和兔抗肾胱氨酸抗体（中图）共染色，然后分别与二级抗体共染色。右侧面板显示了部分同位化。
图5
图5
斑马鱼的破坏投资功能导致肾囊肿形成。(一)注射对照非特异性寡核苷酸的胚胎具有正常形态。(b条)注射atgMO和spMO的胚胎（未显示）在3 d.p.f.时具有显著的腹轴弯曲（atgMO和spMO的总总数：479个注射胚胎中的432个；90%）。(c)100 pg小鼠的联合注射卫生监督所带有spMO的mRNA完全修复了轴弯曲缺陷（atgMO和spMO总计：381 mRNA+MO注射胚胎中的363个得到修复；95%）。(d日)2.5-d.p.f.对照胚胎原肾的组织切片，显示中线肾小球（Gl）、原肾小管（Pt）和原肾管（Pd）。(电子)atgMO注射的3-dp.f.胚胎显示前肾小管囊性扩张，肾小球（用星号表示）内衬鳞状上皮。(（f）)spMO同样会导致前肾小管囊性发育不良（标有星号）。(克–我)吗啉靶向性的分子分析投资拼接缺陷：RT-PCR分析投资24-h.p.f.对照注射胚胎中的表达产生746-bp投资编码C末端结构域的片段(克; 通道C，GenBank AF465261的核苷酸2233–2979；车道M，ΦX174标记）。spMO注射胚胎(克; 车道spMO；24、48和72 h.p.f.）用相同的RT-PCR引物分析产生189-bp RT-PCR产物，代表C末端投资缺失等位基因。在72小时p.f时观察到野生型（WT）mRNA的一些恢复(小时)RT–PCRACTB公司与中相同的RNA样本上的mRNA克吗啉注射液在任何时间点均无影响。(我)spMO对投资mRNA处理。阻止IQ2域中的正常剪接在上游招募一个隐秘剪接供体投资编码序列；由此产生的帧外融合产生一个C端截断投资mRNA位于氨基酸696处，21个氨基酸C末端发生改变。(j个)用spMO和小鼠共投挽救正常形态卫生监督所mRNA显示正常的前肾管结构（Pt）。单独注射时，小鼠卫生监督所mRNA无影响。
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中的注释

  • 从纤毛到囊肿。
    Watnick T、Germino G。 Watnick T等人。 自然遗传学。2003年8月；34(4):355-6. doi:10.1038/ng0803-355。 自然遗传学。2003. PMID：12923538 没有可用的摘要。

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    1. Smith C，Graham J.先天性肾髓质囊肿伴严重难治性贫血。Am J Dis儿童。1945;69:369–377.
    1. Fanconi G、Hanhart E、Albertini A、Die familiäre青少年肾病。赫尔儿科学报。1951;6:1–49.-公共医学
    1. Hildebrandt F.青少年肾病。收件人：Barratt TM、Avner ED、Harmon WE，编辑。儿科肾病学。Williams&Wilkins；巴尔的摩：1999年。
    1. Hildebrandt F等。一种编码SH3结构域蛋白的新基因在1型肾病中发生突变。自然遗传学。1997;17:149–153.-公共医学
    1. Saunier S等人。一个编码具有推测src同源性3结构域的蛋白质的新基因是家族性青少年肾病的候选基因。人类分子遗传学。1997;6:2317–2323.-公共医学

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