跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2002年8月15日；16(16):2135-46.
doi:10.1101/gad.999002。

CDK-9/cyclin T（P-TEFb）在秀丽隐杆线虫胚胎的两条启动后转录途径中是必需的

Eun Yong Shim先生 1, 艾米·沃克, 杨石, T基思·布莱克威尔
附属公司

CDK-9/cyclin T（P-TEFb）在秀丽隐杆线虫胚胎的两条启动后转录途径中是必需的

Eun Yong Shim先生等。 基因开发. .

摘要

后生动物转录延伸因子P-TEFb（CDK-9/cyclin T）是HIV转录所必需的，并被一些细胞激活剂所招募。P-TEFb通过克服需要SPT-4/SPT-5复合物的停顿来促进体外伸长，但大量证据表明SPT-4/SPT-5促进体内伸长。在这里，我们使用RNA干扰来研究P-TEFb在秀丽隐杆线虫胚胎体内的功能。我们发现P-TEFb对早期胚胎基因的表达具有广泛的必要性。P-TEFb是RNA聚合酶II C-末端结构域（CTD）重复序列的Ser 2磷酸化所必需的，但不是大多数CTD Ser 5磷酸化所需的，支持P-TEFb-在伸长过程中磷酸化CTD Ser2的模型。值得注意的是，尽管热休克基因依赖于cdk-9，但当spt-4和spt-5的表达与cdk-9一起被抑制时，它们可以被激活。该观察结果表明，SPT-4/SPT-5在体内具有抑制功能，P-TEFb和SPT-4/SPT-5相互对立的影响可能结合在一起以促进伸长，或确保mRNA生成的保真度。当cdk-9、spt-4和spt-5同时被抑制时，其他基因不表达，这表明这些基因在另一种机制中需要P-TEFb，并且它们和热休克基因通过不同的P-TEFb-依赖性伸长途径进行调节。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
预测秀丽线虫（ce）CDK-9，细胞周期蛋白T，和SPT-4蛋白。(A类)ceCDK-9，与所示激酶域内的人（h）CDK-9。表达的cDNA序列预测两种CDK-9亚型的存在C末端外显子的选择性剪接（黑色）。(B)与hcyclin T1相比，ceCIT-1.1和ceCIT-1.2表明与hcyclin T1的相似性/同一性。基于的系统发育树序列比较显示在底部面板的。(C)将ceSPT-4和ySPT-4与hSPT-4进行比较，如(A类).
图2
图2
RNAi胚胎的表型分析。(A类)CDK-9和RNA Pol II的表达。代表性野生型和RNAi胚胎（以行表示）用DAPI染色以显示DNA，或带有指示的抗体。CDK-9蛋白在任何cdk-9（RNAi）或cdk-9；标准贯入试验-4；spt-5（RNAi）胚胎。Pol II大亚基AMA-1是用非磷酸化CTD（8WG16）抗体检测。(B)RNAi的终末和早期细胞分裂表型胚胎。由N2（野生型）或pie-1｜gfp母亲接受差异干预（DIC）或荧光显微镜。典型的野生型或RNAi胚胎有以行显示，如左边。在左边柱状图中，将最终捕获的RNAi胚胎与继续发育的野生型胚胎。这个正确的二列显示四细胞WT和RNAipie-1｜gfp胚胎。这些RNAi胚胎与野生型胚胎在每个方面都无法区分PIE-1ŞGFP种系和亚细胞定位方面，包括种系RNA-蛋白P颗粒中PIE-1的存在。前部是到左侧。
图3
图3
需要CDK-9和cyclin TPol II CTD重复序列的Ser 2磷酸化，但大多数Ser 2没有磷酸化5磷酸化。在A类和B，代表正在积极进行细胞分裂的野生型或RNAi胚胎如图所示。胚胎用DAPI染色可视化DNA（柱1)，和α-P-Ser5(A类)或α-P-Ser2(B)抗体（抗体；柱2).(A类)CTD Ser5磷酸化水平未检测到降低当CDK-9被RNAi耗尽时。α-P-Ser5染色与每一阶段100%为野生型cdk-9（RNAi）胚胎，但当转录起始被要素TFIIB的消耗[ttb-1（RNAi）胚胎]。(B)CTD Ser2磷酸化在缺乏P-TEFb的胚胎。在整个开发过程中直至码头逮捕，100%cdk-9（RNAi），cit-1.1；cit-1.2（RNAi）、和cdk-9；spt-4；spt-5（RNAi）胚胎，间期细胞核α-P-Ser2染色在在中看到的背景ama-1（RNAi）胚胎。每个胚胎内set，在有丝分裂细胞中α-P-Ser2也检测到非源于Pol II的交叉反应表位（见正文）。有丝分裂染色体早期和晚期的细胞核示例冷凝分别用星号和箭头表示。野生型生殖系中未检测到核α-P-Ser2染色前驱体，在所示焦平面中不可见。一些α-P-Ser2染色的生殖系细胞核周染色较弱来源于二级抗体与P的交叉反应颗粒（Walker等人，2001年）。白点表示生殖细胞在焦平面内。
图4
图4
P-TEFb是早期胚胎表达所必需的基因。野生型（WT）和RNAi胚胎（按行指定）通过DIC和荧光（FL）显微镜（如上所示）。这些胚胎代表了在每一个多个独立实验，其中超过40个胚胎得分。
图5
图5
P-TEFb的要求在热冲击时解除抑制基因标准贯入试验-4和标准贯入试验-5. (A类)野生型（WT）和RNAihsp-16.2｜gfp胚胎（指定于行）进行分析，如图4所示。HSP-16.2｜GFP表达水平不同的野生型，标准贯入试验-4；spt-5（核糖核酸干扰）,和cdk-9；标准贯入试验-4；spt-5（RNAi）胚胎，但所示内容与WT和RNAi胚胎。(B)α-P-Ser2染色标准贯入试验-4；spt-5（RNAi）胚胎，分析如图3所示。无有丝分裂细胞集中在ama-1（RNAi）（Pol II大亚基）胚胎，显示为指示背景级别。(C)α-P-Ser2热休克时无法检测到染色cdk-9型；标准贯入试验-4；spt-5（RNAi）胚胎，分析如下(B). 热休克WT胚胎的α-P-Ser2染色水平与未受到热冲击的控制装置没有明显不同（未显示数据）。一些交叉反应种系P颗粒染色是在中明显ama-1（RNAi）胚胎。(D类)热休克在cdk-9；标准贯入试验-4；spt-5（RNAi）胚胎，在与图4所示的控制装置平行。
图6
图6
内源性修复热休克蛋白-70转录cdk-9（RNAi）通过耗尽胚胎SPT-4/SPT-5。(A类)特定损耗cdk-9mRNA输入RNAi胚胎。通过以下方法分析所示胚胎组的总RNART-PCR检测cdk-9（车道2,4,6)和一个对照mRNA(rgr-1型；车道3,5,7). 每个PCR引物集跨越一个intron（未显示数据）。在琼脂糖凝胶上分析产品用溴化乙锭染色。DNA大小标记被指定为M。(B)热休克蛋白-70基因，外显子由厚行。用于RT-PCR（灰条）的引物侧翼内含子2。的大小显示了预测的拼接和未拼接产品。(C)内源性热休克蛋白-70表达式。样品分析B通过RT-PCR分析热休克蛋白-70RNA，使用引物如所示A类. The热休克蛋白-70mRNA（315-bp片段）在cdk-9（RNAi）胚胎，但在年得到了显著恢复cdk-9；标准贯入试验-4；spt-5（RNAi）胚胎。lane中377-bp的物种4对应于未分割的热休克蛋白-70顺序。不可能是确定该产品是否来源于未完全加工RNA，因为一些样品含有微量的基因组DNA（数据未显示）。
图7
图7
P-TEFb依赖的延伸机制。详细信息和文中给出了参考文献。(1)TFIIH激酶（CDK-7；Kin28）在启动子上磷酸化CTD Ser 5（橙色星号）间隙，独立于P-TEFb。Pol II很容易受到依赖于DSIF（SPT-4/5）的暂停。这种磷酸化也招募CTD的封盖酶（C.E.）。(2)P-TEFb磷酸化物CTD Ser 2和SPT-5（绿色星号），通过SPT-4/5标准。推测的可能性是SPT-4/5可能因此转化为积极作用的形式。这种机制可以增强通过监测延长或mRNA处理的效率或这些事件所需因素的活动。P-TEFb磷酸酶FCP-1和SPT-5可能仍然与活性连续或间歇延长聚合酶复合物，表明SPT-5可能受P-TEFb相反作用的调节和FCP-1。目前尚不清楚SPT-4是否存在。热休克基因可以独立于cdk-9当SPT-4和SPT-5被RNAi耗尽。(三)在大多数其他基因中，P-TEFb似乎在附加机制中是必需的。这种机制可能包括释放一种独特的，可能与染色质相关的延伸障碍或共转录mRNA增强处理。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

  • Bin3/MePCE甲基转移酶结构域的催化活性对果蝇的7SK snRNP功能是不必要的。
    Palumbo RJ、Yang Y、Feigon J、Hanes SD。 Palumbo RJ等人。 遗传学。2024年1月3日；226（1）:iyad203。doi:10.1093/genetics/iyad203。 遗传学。2024 PMID：37982586
  • 致癌的川东北13突变阻碍了核RNA的监测。
    Insco ML、Abraham BJ、Dubbury SJ、Kaltheuner IH、Dust S、Wu C、Chen KY、Liu D、Bellaousov S、Cox AM、Martin BJE、Zhang T、Ludwig CG、Fabo T、Modhurima R、Esgdaille DE、Henriques T、Brown KM、Chanock SJ、Geyer M、Adelman K、Sharp PA、Young RA、Boutz PL、Zon LI。 Insco ML等人。 科学。2023年4月21日；380（6642）：eabn7625。doi:10.1126/science.abn7625。Epub 2023年4月21日。 科学。2023 PMID：37079685 免费PMC文章。
  • 建立RNA-聚合酶II活性荧光报告子以鉴定休眠细胞。
    Freter R、Falletta P、Omrani O、Rasa M、Herbert K、Annunziata F、Minetti A、Krepelova A、Adam L、Käppel S、Rüdiger T、Wang ZQ、Goding CR、Neri F。 Freter R等人。 国家公社。2021年6月3日；12(1):3318. doi:10.1038/s41467-021-23580-4。 国家公社。2021 PMID：34083536 免费PMC文章。
  • CDK9：其生物学及其作为抗癌药物潜在靶点的作用的综合综述。
    Anshabo AT、Milne R、Wang S、Albrecht H。 Anshabo AT等人。 前Oncol。2021年5月10日；11:678559. doi:10.3389/fonc.2021.678559。eCollection 2021年。 前Oncol。2021 PMID：34041038 免费PMC文章。 审查。
  • 通过RNA聚合酶II抑制对宿主环境进行活性细菌修饰。
    Ambite I、Filenko NA、Zaldastanishvili E、Butler DS、Tran TH、Chaudhuri A、Esmaeili P、Ahmadi S、Paul S、Wullt B、Putze J、Chen SL、Dobrindt U、Svanborg C。 Ambite I等人。 临床投资杂志。2021年2月15日；131（4）：e140333。doi:10.1172/JCI140333。 临床投资杂志。2021 PMID：33320835 免费PMC文章。
查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Akhtar AX、Faye G、Bentley DL。酵母中不同的激活和非激活RNA聚合酶II复合物。EMBO J.1996；15:4654–4664.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Andrulis ED、Guzman E、Doring P、Werner J、Lis JT。果蝇Spt5和Spt6在体内热休克基因的高分辨率定位：在启动子近端暂停和转录延长中的作用。基因与发展2000；14:2635–2649.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Barboric M、Nissen RM、Kanazawa S、Jabrane-Ferrat N、Peterlin BM。NF-kappaB结合P-TEFb，通过RNA聚合酶II刺激转录延伸。分子细胞。2001;8:327–337.-公共医学
    1. Bellier S、Dubois MF、Nishida E、Almouzni G、Bensaude O。非洲爪蟾卵母细胞成熟过程中RNA聚合酶II最大亚基的磷酸化。分子细胞生物学。1997;17:1434–1440.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Bourgeois CF、Kim YK、Churcher MJ、West MJ、Karn J.Spt5通过防止终止序列处RNA过早释放与人类免疫缺陷病毒1型tat合作。分子细胞生物学。2002;22:1079–1093。-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语