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.2002年3月26日;41(12):4137-46.
doi:10.1021/bi015961k。

GST-α-突触核蛋白融合蛋白的应激诱导聚集谱:α-突触核蛋白C末端酸性尾在蛋白质热溶性和稳定性中的作用

附属公司

GST-α-突触核蛋白融合蛋白的应激诱导聚集谱:α-突触核蛋白C末端酸性尾在蛋白质热溶性和稳定性中的作用

桑明园等。 生物化学. .

摘要

Alpha-synuclein是一种众所周知的耐热蛋白,在热处理后不会聚集,而谷胱甘肽S-转移酶(GST)是一种不耐热蛋白,容易因热应激而沉淀。本文报道了α-同核蛋白C末端酸性尾在蛋白质热溶性和稳定性中的作用。利用一系列缺失突变体初步研究了负责耐热性的α-突变体区域,发现C末端酸性尾(残基96-140)对α-突触核蛋白的热溶性至关重要。接下来研究GST-α-同核蛋白融合蛋白的热行为,发现该融合蛋白具有极高的耐热性。利用一系列GST-synuclein缺失突变体,α-synnuclein的C末端酸性尾在赋予融合蛋白耐热性方面起着关键作用。此外,酸性尾似乎可以保护融合蛋白免受pH和金属诱导的蛋白质聚集,这表明酸性尾可以通过保护蛋白免受环境胁迫诱导的聚集来增加蛋白质的虚拟稳定性。有趣的是,酸性尾巴似乎也在很大程度上保护了GST酶免受热失活。然而,对GST-α-同核蛋白融合蛋白热诱导二级结构变化的CD分析表明,该融合蛋白通过略微降低熔融温度(Tm)的热处理发生了不可逆变性。因此,结果表明,在GST中引入酸性尾可以促进融合蛋白的热溶性和虚拟稳定性,尽管这可能不利于其固有稳定性。

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