Laser capture microdissection analysis of gene expression in macrophages from atherosclerotic lesions of apolipoprotein E-deficient mice

doi:10.1073/pnas.042683999

.2002年2月19日；99(4):2234-9.

doi:10.1073/pnas.042683999。 Epub 2002年2月12日。

载脂蛋白E缺陷小鼠动脉粥样硬化病变巨噬细胞基因表达的激光捕获显微切割分析

尤金·特罗根¹, 罗宾·乔杜里, 海耶斯·M·丹斯基, 詹姆斯·X·荣, 简·L·布雷斯洛, 爱德华·A·费舍尔

附属机构

PMID： 11842210
预防性维修识别码： PMC122348项目
内政部： 10.1073/pnas.042683999

载脂蛋白E缺陷小鼠动脉粥样硬化病变巨噬细胞基因表达的激光捕获显微切割分析

尤金·特罗根等。美国国家科学院程序. 2002.

.2002年2月19日；99(4):2234-9.

doi:10.1073/pnas.042683999。 Epub 2002年2月12日。

作者

尤金·特罗根¹, 罗宾·乔杜里, 海耶斯·M·丹斯基, 詹姆斯·X·荣, 简·L·布雷斯洛, 爱德华·A·费舍尔

附属

¹美国纽约州纽约市西奈山医学院医学系、泽纳医学院和迈克尔·A·维纳心血管研究所（Michael A.Wiener Cardiovascular Institute）。

PMID： 11842210
预防性维修识别码： PMC122348项目
内政部： 10.1073/pnas.042683999

摘要

巨噬细胞泡沫细胞在动脉粥样硬化病变的发展中不可或缺。病变巨噬细胞泡沫细胞的基因表达分析因动脉粥样硬化斑块的细胞异质性和不同程度病变的存在而变得复杂。为了克服这些局限性，我们测试了激光捕获显微切割（LCM）和实时定量逆转录PCR选择性分析载脂蛋白E（apoE）缺陷小鼠受损巨噬细胞RNA的能力。通过快速（大约15分钟）方案，对主动脉近端组织切片进行巨噬细胞特异性CD68/巨唾液酸的免疫染色。每只动物的交替切片用于从整个切片（类似于从整个组织中分离）或通过LCM选择CD68阳性细胞来分离RNA。我们测量了巨噬细胞特异性标记CD68、平滑肌细胞标记alpha-actin和对照基因亲环素a的mRNA水平。与整个切片相比，激光捕获的病变巨噬细胞中CD68 mRNA水平显著增加（33.6倍）。与整个切片相比，LCM-衍生RNA检测不到α-凝集素水平。为了说明这种方法测量病变巨噬细胞基因表达变化的能力，我们向apoE缺陷小鼠腹腔注射100微克脂多糖，并在激光捕获的病变巨噬细胞中检测到血管细胞粘附分子-1、细胞间细胞粘附分子-1、，单核细胞趋化蛋白-1（分别为11.9倍、32.5倍和31.0倍）。LCM通过选择性富集泡沫细胞RNA，为研究动脉粥样硬化相关基因的原位表达和调控提供了一种强有力的方法。这种方法将允许研究巨噬细胞基因在斑块形成、消退以及对遗传和环境扰动的反应的各种条件下的表达。

PubMed免责声明

数字

图1
载脂蛋白E缺乏小鼠动脉粥样硬化病变巨噬细胞泡沫细胞的LCM。通过免疫组织化学检测巨噬细胞特异性标记物CD68/moserialin（红色染色）指导激光捕获细胞的选择。(A类)激光捕获前显示主动脉近端病变（200×；插入: 30×). CD68阳性染色细胞以15μm激光直径进行激光捕获。箭头在插入表示LCM分离出CD68阳性细胞的典型病变。(B类)去除热塑性薄膜后，在剩余的异质组织中可以看到激光捕获后留下的穿孔。(C类)在处理RNA提取之前，在显微镜下观察确认捕获材料的均匀性。五十、流明。

图2
通过实时定量RT-PCR测量RNA转录物。(A类)CD68（▴）和α-actin（■）实时定量RT-PCR的代表性标准曲线。循环阈值与对数的关系图₁₀RNA输入起始质量的百分比与起始RNA的五个数量级呈线性关系（CD68和α-actin的相关系数的平方分别为0.99和0.98）。显示了来自重复标准的每个RNA质量的平均值（未描述SD条，因为它们小于数字符号）。(B类)定量RT-PCR产品的电泳分析。CD68的产品(上部)和α-肌动蛋白(下部)验证适当大小的扩增子（分别为67和66bp）的特异性扩增。系列稀释标准品（10 ng至1 pg；1–5道）的半定量关系（即溴化乙锭染色带的分级强度）与A类.用水空白代替RNA作为阴性对照（第6道）。

图3
通过测量细胞特异性标记物的mRNA转录水平评估，LCM选择性地富集病变巨噬细胞RNA。(A类)在LCM-衍生的病变泡沫细胞RNA（100 pg）中评估巨噬细胞特异性标记物CD68（相对于亲环素A）的平均水平，并与从交替的整个切片中提取的标记物进行比较。与全切RNA样品（范围：0.00096–0.0014）相比，LCM样品中的CD68水平显著增加（范围：0.035–0.037）。LCM采集的样本中CD68水平增加了33.6倍，证明巨噬细胞衍生RNA的富集(B类)通过SMCα-肌动蛋白mRNA含量评估LCM的选择性。将LCM衍生泡沫细胞中的α-肌动蛋白水平[平均值（范围）：0.0022（0.0019–0.0025）；归一化为亲环素A]与全切RNA中的水平进行比较，LCM泡沫细胞衍生的RNA中没有检测到α-肌动蛋白的扩增（星号表示数据条应该在哪里）。

请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

补充技术：激光捕获显微切割——提高癌症标本基因表达谱的特异性。
埃斯波西托·G。埃斯波西托G。高级实验医学生物。2007;593:54-65. doi:10.1007/978-0-387-39978-26。高级实验医学生物。2007 PMID：17265716 审查。
激光捕获显微切割分析动脉粥样硬化病变巨噬细胞基因表达。
Trogan E，Fisher EA。 Trogan E等人。方法分子生物学。2005;293:221-31. doi:10.1385/1-59259-853-6:221。方法分子生物学。2005 PMID：16028422 审查。
单核细胞衍生细胞和炎症在狒狒动脉导管重塑中的作用。
Waleh N、Seidner S、McCurnin D、Yoder B、Liu BM、Roman C、Mauray F、Clyman RI。 Waleh N等人。《儿科研究》，2005年2月；57(2):254-62. doi:10.1203/01.PDR.0000148278.64777.EF。Epub 2004年12月20日。《儿科研究》，2005年。 PMID：15611359
载脂蛋白E缺乏小鼠尿毒症动脉粥样硬化中粘附分子表达增加。
Bro S、Moeller F、Andersen CB、Olgaard K、Nielsen LB。 Bro S等人。《美国肾脏病杂志》。2004年6月；15(6):1495-503. doi:10.1097/01.asn.000128371.33195.7b。《美国肾脏病杂志》。2004 PMID：15153560
胆固醇负荷后小鼠主动脉平滑肌细胞向巨噬细胞样状态的转分化。
Rong JX、Shapiro M、Trogan E、Fisher EA。荣JX等。美国国家科学院院刊，2003年11月11日；100(23):13531-6. doi:10.1073/pnas.1735526100。Epub 2003年10月27日。美国国家科学院院刊，2003年。 PMID：14581613 免费PMC文章。

查看所有类似文章

引用人

动脉粥样硬化斑块形成多阶段模型中的巨噬细胞抗炎症行为。
Ahmed IU，Byrne HM，Myerscough先生。 Ahmed IU等人。公牛数学生物学。2023年3月29日；85(5):37. doi:10.1007/11538-023-01142-7。公牛数学生物学。2023 PMID：36991234 免费PMC文章。
体内动脉粥样硬化研究方法综述。
Ramji DP、Chan YH、Alahmadi A、Alotibi R、Alshehri N。 Ramji DP等人。方法分子生物学。2022;2419:57-72. doi:10.1007/978-1-0716-1924-7_4。方法分子生物学。2022 PMID：35237958
炎症消退：动脉粥样硬化的意义。
多兰空调。多兰空调。 Circ Res.2022年1月7日；130(1):130-148. doi:10.1161/CIRCRESAHA.121.319822。Epub 2022年1月7日。循环决议2022。 PMID：34995137 免费PMC文章。审查。
外显子介导的炎症反应性递送伊尔-10mRNA用于控制动脉粥样硬化治疗。
Bu T，Li Z，Hou Y，Sun W，Zhang R，Zhao L，Wei M，Yang G，Yuan L。 Bu T等人。热学。2021年10月25日；11(20):9988-10000. doi:10.7150/thno.64229。eCollection 2021年。热学。2021 PMID：34815799 免费PMC文章。
高血糖诱导巨噬细胞及其前体的训练免疫并促进动脉粥样硬化。
Edgar L、Akbar N、Braithwaite AT、Krausgruber T、Gallart-Ayala H、Bailey J、Corbin AL、Khoyratty TE、Chai JT、Alkhalil M、Rendeiro AF、Ziberna K、Arya R、Cahill TJ、Bock C、Laurencikiene J、Crabtree MJ、Lemieux ME、Riksen NP、Netea MG、Wheelock CE、Channon KM、RydéN M、Udalova IA、Carnicer R、Choudhury RP。 Edgar L等人。循环。2021年9月21日；144(12):961-982. doi:10.1161/CIRCULATIONAHA.120.046464。Epub 2021年7月13日。循环。2021 PMID：34255973 免费PMC文章。

查看所有“被引用”文章

工具书类

1. Smith J D、Trogan E、Ginsberg M、Grigaux C、Tian J、Miyata M.美国国家科学院院刊1995；92:8264–8268.-项目管理咨询公司-公共医学
1. Lusis A J.Nature（伦敦）2000；407:233–241.-项目管理咨询公司-公共医学
1. Ross R.N Engl J Med.1999；340:115–126.-公共医学
1. Hansson G K，Holm J，Jonasson L.《病理学杂志》。1989;135:169–175.-项目管理咨询公司-公共医学
1. Stein O，Stein Y.Curr Opin Lipidol。1995;6:269–274.-公共医学

出版物类型

行动

MeSH术语

行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动

赠款和资金

LinkOut-更多资源

[1] Smith J D、Trogan E、Ginsberg M、Grigaux C、Tian J、Miyata M.美国国家科学院院刊1995；92:8264–8268.-项目管理咨询公司-公共医学

[2] Smith J D、Trogan E、Ginsberg M、Grigaux C、Tian J、Miyata M.美国国家科学院院刊1995；92:8264–8268.-项目管理咨询公司-公共医学

[3] Lusis A J.Nature（伦敦）2000；407:233–241.-项目管理咨询公司-公共医学

[4] Lusis A J.Nature（伦敦）2000；407:233–241.-项目管理咨询公司-公共医学

[5] Ross R.N Engl J Med.1999；340:115–126.-公共医学

[6] Ross R.N Engl J Med.1999；340:115–126.-公共医学

[7] Hansson G K，Holm J，Jonasson L.《病理学杂志》。1989;135:169–175.-项目管理咨询公司-公共医学

[8] Hansson G K，Holm J，Jonasson L.《病理学杂志》。1989;135:169–175.-项目管理咨询公司-公共医学

[9] Stein O，Stein Y.Curr Opin Lipidol。1995;6:269–274.-公共医学

[10] Stein O，Stein Y.Curr Opin Lipidol。1995;6:269–274.-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

您的RSS源

载脂蛋白E缺陷小鼠动脉粥样硬化病变巨噬细胞基因表达的激光捕获显微切割分析

附属

载脂蛋白E缺陷小鼠动脉粥样硬化病变巨噬细胞基因表达的激光捕获显微切割分析

作者

附属

摘要

数字

类似文章

引用人

工具书类

出版物类型

MeSH术语

物质

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

研究材料

其他

摘要

数字

类似文章

引用人

工具书类

出版物类型

MeSH术语

物质

相关信息

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

研究材料

其他