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.2001年9月21日;276(38):35458-64.
doi:10.1074/jbc。M105482200。 Epub 2001年7月13日。

酿酒酵母Rad50*Mre11复合物中DNA结构特异性核酸酶活性

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酿酒酵母Rad50*Mre11复合物中DNA结构特异性核酸酶活性

K M特鲁希略等。 生物化学杂志. .
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摘要

酿酒酵母RAD50和MRE11基因是DNA双链断裂的核裂解过程所必需的。我们在酵母细胞中过度表达了Rad50和Mre11,并将其纯化至接近同质性。与遗传数据一致,我们表明纯化的Rad50和Mre11蛋白形成稳定的复合物。在Rad50.Mre11复合物中,蛋白质组分以等摩尔量存在。Mre11具有3’至5’的核酸外切酶活性,可导致单核苷酸的释放。添加Rad50不会显著改变Mre11的外核溶解功能。使用基于同聚寡核苷酸的底物,我们发现Mre11和Rad50.Mre11的外切酶活性对于具有双链DNA末端的底物增强。我们已经检查了Mre11在定义的、放射性标记的发夹结构上的内切核溶解功能,这些发夹结构也包含3'和5'单链DNA悬链。Mre11能够切割发夹和3'单链DNA尾部。Rad50可显著增强Mre11的这些核酸内切酶活性,但仅在ATP存在的情况下。基于这些结果,我们推测Mre11核酸酶复合物可能在DNA链分离形成的二级结构处介导5'链的核裂解消化。

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