Cre reporter strains produced by targeted insertion of EYFP and ECFP into the ROSA26 locus

doi:10.1186/1471-213x-1-4

.2001:1:4.

doi:10.1186/1471-213x-1-4。 Epub 2001年3月27日。

将EYFP和ECFP靶向插入ROSA26位点产生的Cre报告菌株

S斯里尼瓦斯¹, T渡边, C S林, C M威廉, Y塔纳比, T M杰塞尔, F科斯坦蒂尼

附属公司

PMID： 11299042
预防性维修识别码： PMC31338型
DOI（操作界面）： 10.1186/1471-213x-1-4

将EYFP和ECFP靶向插入ROSA26位点产生的Cre报告菌株

S斯里尼瓦斯等。 BMC开发生物. 2001.

.2001:1:4.

doi:10.1186/1471-213x-1-4。 Epub 2001年3月27日。

作者

S斯里尼瓦斯¹, 渡边捷昭, C S林, C M威廉, Y塔纳比, T M杰塞尔, F科斯坦蒂尼

附属

¹美国纽约哥伦比亚大学遗传与发展系。shankar@srinivas.org

PMID： 11299042
预防性维修识别码：下午1338
DOI（操作界面）： 10.1186/1471-213x-1-4

摘要

背景：已经描述了几种Cre报告小鼠菌株，在Cre介导的loxP侧翼转录“停止”序列切除后，表达Cre重组酶的细胞及其子细胞中的lacZ基因被激活。这些小鼠可用于细胞系追踪实验以及监测Cre转基因的表达。绿色荧光蛋白（GFP）和变体（如EYFP和ECFP）作为报告者比lacZ具有优势，因为它们可以很容易地被可视化，而无需依赖于可视化活体组织中β-半乳糖所需的重要底物。

结果：鉴于靶向普遍表达的ROSA26位点的通用性，我们构建了一个通用的ROSA26-靶向载体。然后，我们通过将EYFP或ECFP cDNA插入ROSA26基因座生成了两个报告系小鼠，前面是loxP侧翼的终止序列。通过将这些菌株与普遍表达Cre的转基因菌株（β-actin-Cre）或细胞特异性表达Cre（Isl1-Cre和En1-Cre）杂交，对这些菌株进行测试。由此产生的EYFP或ECFP表达模式表明，报告菌株可作为Cre活性的忠实监测者。

结论：与现有的lacZ报告株系不同，在活组织中不容易检测到lacZ的表达，EYFP和ECFP报告株可用于监测Cre的表达，并追踪这些细胞及其后代在培养的胚胎或器官中的谱系。EYFP和ECFP的非重叠发射光谱使其成为活组织双标记研究的理想选择。

PubMed免责声明

数字

图1
目标*俄罗斯26*基因座。A、自上而下：pBigT，一种含有loxP侧翼带的质粒*PGK-neo公司*可选标记和tpA转录停止序列，其中*EYFP公司*或*ECFP公司*被克隆；pROSA26PA，含基因组*俄罗斯26*同源重组序列和白喉毒素基因(*PGK-DTA公司*)用于ES细胞的阴性选择；野生型*俄罗斯26*轨迹，指示探针位置；靶位点的结构；以及Cre介导的肿瘤切除后靶位点的结构*液氧磷*-侧翼的(*PGK-neo公司*，tpA）盒式磁带。*LoxP公司*站点由实心箭头表示。B、 7个ES细胞系DNA的Southern blot，用EcoRV消化并与A中指示的探针杂交。11 kb带是野生型带，3.8 kb带代表目标等位基因。株系Y25和C4为野生型，其余为杂合的靶等位基因。

图2
EYFP或ECFP在携带*β-肌动蛋白核心*转基因。两个胚胎，一个携带*R26R-EYFP公司*（右）和一个*R26R-ECFP型*（左），均为杂合子*β-肌动蛋白核心*转基因。它们可以通过YFP滤波器组（a）、亮场照明（B）或CFP滤波器组（C）进行可视化。

图3
EYFP在携带*克雷岛1号*.A，E14.5 R26R-EYFP/+的横截面；*克雷岛1号/+*胚胎，显示EYFP在运动神经元和背根神经节中的表达。表面外胚层中的明显表达是一种伪影，正如在非转基因胚胎中所见（数据未显示）。面板B，E12.5的横截面*R26R-lacZ；克雷岛1号*胚胎，表现出类似的β-半乳糖染色模式。

图4
携带R26R-EYFP E8.5胚胎的中后脑交界处EYFPs的特异性表达*英语1*^Cki公司，一个*工程-1 Cre*敲入等位基因。A、暗场照明，显示胚胎前部。B、 YFP在同一胚胎中的表达。胚胎的轮廓由虚线表示。C、 E8.5来自*英语1*^Cki公司和*R26R lacZ公司*等位基因[4]，导致*lacZ公司*在同一中后脑区域表达。

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