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。2001年4月2日；20(7):1640-50.
doi:10.1093/emboj/20.7.1640。

代谢型谷氨酸I组（mGluRI）和Trk受体激活对神经营养因子分泌的调节是通过磷脂酶C信号通路介导的

M卡诺萨 1, 阿加特纳, G坎帕纳, N稻垣祯一, H Thoenen公司
附属公司

代谢型谷氨酸I组（mGluRI）和Trk受体激活对神经营养因子分泌的调节是通过磷脂酶C信号通路介导的

M卡诺萨等。 欧洲工商管理硕士J。 。

摘要

神经营养素（NTs）在调节活动依赖性神经元可塑性方面发挥着重要作用。在这种情况下，NT分泌的部位和程度至关重要。在这里，我们证明磷酸脂肪酶C（PLC）的激活以及随后细胞内储存的Ca（2+）的动员对于Trk和谷氨酸受体激活启动的NT分泌至关重要。酪氨酸残基在所有Trk受体的细胞质域中高度保守，其突变分析表明，培养的海马神经元和nnr5细胞中PLC-γ的激活是从细胞内贮存物中动员Ca（2+）所必需的，这是调节NT分泌的关键机制。谷氨酸介导的NT分泌也有类似的信号机制，部分依赖于PLC通过代谢性受体激活，通过三磷酸肌醇从内部储存物动员Ca（2+）。因此，PLC介导的信号转导途径是Trk和mGluRI介导的NT分泌的共同机制。

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图1。野生型TrkA和受体突变体在nnr5细胞中的稳定表达。(A类)野生型TrkA受体和选定受体突变体的细胞溶质域示意图。Y794F代表一种TrkA受体，其中PLC-γ结合位点通过用苯丙氨酸取代酪氨酸残基Y794而失活，而在Re794Y中，除Y794外，所有酪氨酸残基都被苯丙氨酸所取代。酪氨酸残基Y679、Y683和Y684对受体的自磷酸化至关重要，并在所有突变体中保持。(B类)野生型（nnr5-TrkA）和突变TrkA受体（nnr5-Y794F和nnr5-Re794Y）的Western blot在nnr5细胞中稳定表达。检测野生型受体和突变体的表达水平。我们选择的克隆，通过检测抗pan-Trk抗体，显示出相当水平的受体蛋白。
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图2。比较稳定转染nnr5细胞和腺病毒转染海马神经元中野生型和突变TrkA受体的受体酪氨酸和PLC-γ磷酸化。(A类)nnr5-TrkA、nnr5-Y794F和nnr5-Re794Y克隆中NGF介导的酪氨酸磷酸化。用100 ng/ml NGF刺激每个克隆0、5或10分钟，并检测受体酪氨酸磷酸化。野生型和突变受体通过抗pan-Trk抗体从细胞裂解液中进行免疫沉淀，样品用SDS-聚丙烯酰胺凝胶分离。用抗磷酸酪氨酸抗体检测蛋白质印迹。给予NGF 5或10分钟，在野生型和受体突变体中产生显著的酪氨酸磷酸化。(B类)nnr5克隆中NGF介导的PLC-γ酪氨酸磷酸化。用100 ng/ml NGF刺激单个克隆0或5分钟。用琼脂糖连接的抗磷酸酪氨酸抗体对细胞裂解物进行免疫沉淀，并用特异性抗PLC-γ抗体进行蛋白质印迹分析。NGF处理5分钟足以诱导nnr5-TrkA和nnr5-Re794Y克隆的PLC-γ磷酸化，而nnr5-Y794F克隆在NGF存在或不存在的情况下均未显示PLC-β磷酸化信号。(C类)用TrkA和Re794Y受体转导的培养海马神经元中NGF介导的酪氨酸磷酸化。用100ng/ml NGF刺激转导的神经元0分钟和5分钟，并测定受体酪氨酸磷酸化。western blot按（A）进行。NGF在野生型受体和突变体中产生显著的酪氨酸磷酸化。(D类)用Re794Y转导的培养海马神经元中NGF-和BDNF-介导的PLC-γ酪氨酸磷酸化。用100 ng/ml NGF或BDNF刺激感染Re794Y腺病毒的培养海马神经元0或5分钟。海马神经元的裂解物通过琼脂糖结合的抗磷酸酪氨酸抗体进行免疫沉淀。如（A）所述，通过western blotting鉴定PLC-γ磷酸化。NGF和BDNF诱导的PLC-γ酪氨酸磷酸化程度相似。
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图3。nnr5-TrkA、nnr5-Y794F和nnr5-Re794Y的高钾和NGF介导的BDNF分泌。以0.1 ml/min的流速灌注细胞。每5分钟收集一次分馏物。收集两个组分后，用50 mM KCl进行第一次刺激，并收集另外四个组分。恢复30分钟后，用100 ng/ml NGF刺激细胞。用双位点ELISA测定BDNF浓度。刺激后立即出现BDNF浓度增加（以pg/ml表示）。峰值浓度出现在以下部分。刺激开始与BDNF分泌峰值之间的5分钟延迟是由于灌注系统的死容量所致。NGF诱导nnr5-TrkA和nnr5-Re794Y细胞分泌BDNF，但不诱导nnr5或nnr5-Y794F细胞分泌。给出的值代表平均值±SE(n个 = 6).
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图4。腺病毒转导的nnr5细胞。(A类)用AdCMV-Re794Y和AdCMV-BDNF双重转导的nnr5细胞分泌BDNF的时间进程。按照图3所示进行灌注。50 mM KCl和100 ng/ml NGF随后的两次刺激通过30分钟的恢复期分开。每5分钟收集一次组分，并通过ELISA测定BDNF浓度。所示值为平均值±SE(n个 = 4). (B类)与AdCMV-BDNF和AdCMV-Re794Y联合转导的nnr5细胞中BDNF及Re794Y突变体的表达。通过杂交瘤上清液（9E10）检测BDNF和Re794Y的表达，该上清液识别添加到BDNF C末端结构域的myc表位，并使用抗pan-Trk抗体检测Re794Y的C末端。通过共焦显微镜分析细胞。这些图片表示沿着给定的x–y平面。BDNFmyc感染的nnr5细胞显示出BDNF在内质网和高尔基体内定位的不连续染色模式特征（绿色）。用抗pan-Trk抗体获得的染色主要定位于质膜（红色）。
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图5。表达TrkA、Y794F和Re794Y受体的培养海马神经元分泌BDNF。(A类)用100 ng/ml NGF在“静态”条件下刺激用AdCMV-TrkA、AdCMV-Y794F和AdCMV-Re794Y转导的海马神经元10分钟。NGF诱导的BDNF分泌只发生在表达野生型TrkA和Re794Y受体的神经元中，而不发生在Y794F或绿色荧光蛋白（GFP）控制病毒感染的神经元中。给出的值为平均值±SE(n个 = 10). (B类)NT4/5通过内源性TrkB或NGF通过转导的Re794Y诱导的BDNF分泌的时间过程。在用100 ng/ml NT4/5刺激之前、期间和之后灌注细胞并收集部分。第二次刺激是通过服用100 ng/ml NGF开始的。NT4/5激活内源性TrkB受体，NGF激活TrkA受体突变体Re794Y。给出的值为平均值±SE(n个 = 6).
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图6。细胞内钙的变化2+表达Re794Y受体的海马神经元中的浓度。(A类)非转导的海马神经元（对照）和Re794Y转导的神经元负载Fura-2/AM。细胞内Ca的变化2+浓度由340和380nm激发波长下的荧光比率确定。在缺乏细胞外钙的情况下2+（BAPTA），表达TrkA受体突变体的海马神经元显示NGF介导的[Ca2+]我这与BDNF通过内源性TrkB受体作用获得的结果无法区分。这是八个独立实验的典型例子。(B类)细胞内钙耗竭的影响2+通过thapsigargine和咖啡因在随后的Ca中存储2+BDNF或NGF发出信号。在缺乏细胞外钙的情况下2+（BAPTA），咖啡因/塔普西格尔津引发了强烈的、持续的钙2+钙耗尽产生的信号2+商店。随后的BDNF和NGF给药没有引起可检测的Ca2+信号，与未经咖啡因和thapsigargine处理的海马神经元形成鲜明对比。这是三个独立实验的典型例子。
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图7。对完整钙的依赖性2+在海马神经元中储存NT介导的NT分泌。(A类)细胞外钙缺乏时海马神经元BDNF的分泌2+（BAPTA）、BAPTA-AM对细胞内钙的螯合作用以及细胞内钙耗尽后2+通过咖啡因和thapsigargine进行储存。如图3所示，对同时感染AdCMV-BDNF和AdCMV-Re794Y的培养海马神经元进行灌注。在正常钙中用100 ng/ml NT4/5刺激5分钟后2+，在Ca中用100 ng/ml NGF进行第二次刺激2+-游离培养基或含有钙的培养基2+螯合剂BAPTA-AM（10µM）。去除细胞外钙2+（BAPTA）不影响NGF诱导BDNF分泌的能力。然而，NGF对BDNF分泌的影响通过用细胞可渗透的BAPTA-AM预处理海马神经元30分钟而被消除2+含有咖啡因（3 mM）和毒精（10µM）的商店可消除NGF介导的BDNF分泌。给出的值代表平均值±SE(n个 = 6). (B类)钙的作用2+来自nnr5-TrkA或nnr5-Re794Y克隆的BDNF分泌中。与海马神经元的作用类似，在缺乏细胞外钙的情况下，NGF诱导nnr5克隆分泌BDNF2+（BAPTA）。相反，螯合细胞内钙2+BAPTA-AM或耗尽细胞内钙2+储存咖啡因/他培加精可阻止NGF介导的BDNF分泌。给出的值代表平均值±SE(n个= 7).
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图8。自然、非转导海马脑片BDNF分泌的时间进程。对急性海马脑片进行灌注，并在连续5分钟内收集部分。BDNF浓度通过ELISA测定。在30分钟的恢复期后，首先用50µM谷氨酸刺激，然后再用100µM t-ACPD、AMPA或NMDA刺激。给出的值为平均值±SE(n个 = 4).
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图9。谷氨酸分泌BDNF的信号转导途径分析。(A类)谷氨酸受体激动剂在培养海马神经元中启动BDNF分泌。海马神经元原代培养物感染AdCMV-BDNF 36–48小时。在60分钟的平衡时间后，在“静态”条件下，在10分钟内收集的培养基中测定分泌的BDNF的基本水平。用谷氨酸（50μM）、AMPA（100μM）或t-ACPD（100µM）刺激神经元10分钟，导致培养液中BDNF浓度增加。NMDA没有影响。(B类)用AMPA和mGluRI受体的特异性拮抗剂CNQX（50μM）和AIDA（500μM）分别预处理海马神经元，测试AMPA和t-ACPD的作用。(C类)钙的影响2+储存于AMPA和t-ACPD介导的BDNF分泌。在海马神经元中，用他必佳（10µM）和咖啡因（3 mM）治疗可启动BDNF的分泌，但可阻断AMPA和t-ACPD诱导的BDNF随后的分泌。给出的值代表平均值±SE(n个 = 6).
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    张峰、陈杰、李毅、叶杰、王C。 张飞等。 国际分子科学杂志。2023年11月30日；24(23):16993. doi:10.3390/ijms242316993。 国际分子科学杂志。2023 PMID：38069318 免费PMC文章。
  • BDNF表达和分泌的控制机制。
    阿雷瓦洛JC，Deogracias R。 Arévalo JC等人。 生物分子。2023年5月2日；13(5):789. doi:10.3390/biom13050789。 生物分子。2023 PMID：37238659 免费PMC文章。 审查。
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    1. Aibel L.、Martinzanca，D.、Perez，P.和Chao，M.V.（1998）海马神经元TrkA受体的功能表达。《神经科学杂志》。研究，54，424–431。-公共医学
    1. Berridge M.J.（1998）《神经钙信号》。神经元，21，13-26。-公共医学
    1. Blöchl A.和Sirrenberg，C.（1996）神经营养素通过Trk和p75Lntr受体刺激大鼠中脑神经元释放多巴胺。生物学杂志。化学。，271, 21100–21107.-公共医学
    1. Blöchl A.和Thoenen，H.（1995）海马神经元释放神经生长因子（NGF）的特征：构成性和非传统钠依赖性调节途径的证据。《欧洲神经科学杂志》。，7, 1220–1228.-公共医学
    1. Blöchl A.和Thoenen，H.（1996）海马神经元原代培养中细胞存储室和神经生长因子（NGF）的组成性和活性依赖性释放位置的定位。分子细胞。神经科学。，7, 173–190.-公共医学

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