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2001年6月1日;276(22):19580-7.
doi:10.1074/jbc。M010089200。 Epub 2001年3月14日。

蛋白激酶CδC1b结构域疏水残基在配体和磷脂相互作用中的作用

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蛋白激酶CδC1b结构域疏水残基在配体和磷脂相互作用中的作用

Q J王等。 生物化学杂志
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摘要

传统和新型蛋白激酶C(PKC)亚型的C1结构域以高亲和力结合二酰甘油和佛波酯。对PKC-delta第二富含半胱氨酸结构域(PKC-deltaC1b)结合间隙边缘或附近高度保守的疏水残基进行突变,以探讨其在配体识别和脂质相互作用中的作用。[(3)H]在存在和不存在磷脂的情况下进行12,12-二丁酸Phorbol(PDBu)结合,以确定脂质缔合对配体亲和力的贡献。脂质依赖性被确定为脂质浓度和组成的函数。将亲油性类似于PDBu的高亲和力支链二酰基甘油与PDBu相比较,以确定对配体选择性重要的残基。正如预期的那样,Leu-20和Leu-24强烈影响结合。用天冬氨酸替代任一种都会在磷脂酰丝氨酸存在或不存在的情况下消除结合。Leu-20突变为Arg或Leu-24突变为Lys导致PDBu结合在脂质存在下显著降低(分别为340倍和250倍),但在不含脂质的情况下仅观察到PDBu较弱结合的适度降低,表明主要影响是C1结构域-磷脂相互作用。Leu-20突变为Lys或Trp-22突变为Ly具有适度(3倍)效应,而Phe-13突变为Tyr或Lys则没有效应。与PDBu相比,支链二酰甘油的结合对磷脂的依赖性较小,对Trp-22突变为Tyr或Lys的反应更为敏感,尤其是在存在磷脂的情况下。就特定PKC亚型而言,我们的结果表明,PKC-zeta中Arg-20的存在可能导致其缺乏佛波酯结合活性。更一般地说,结果强调了三元结合络合物中C1结构域、配体和磷脂之间的相互作用。

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