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.2000年8月1日;20(15):5587-93.
doi:10.1523/JNEUROSCI.20-15-05587.2000。

慢病毒介导的面神经核内胶质细胞源性神经营养因子表达对受损成年运动神经元的完全和长期拯救

附属公司

慢病毒介导的面神经核内胶质细胞源性神经营养因子表达对受损成年运动神经元的完全和长期拯救

A F加热器等。 神经科学. .

摘要

到目前为止,神经营养因子的递送只能暂时保护被切断的面部运动神经元免受细胞死亡。在本报告中,通过使用慢病毒载体系统在面神经核内持续表达神经营养因子-胶质细胞系衍生神经营养因子(GDNF)来评估这些神经元的长期保护。将病毒载体单侧注射到4个月龄Balb/C小鼠的面神经核内。与其他成年啮齿动物的轴切断术不同,这些动物的面神经损伤会导致运动神经元持续进行性丢失和/或萎缩>50%。因此,该模型为评估神经营养因子对成人型运动神经元疾病(如肌萎缩侧索硬化症)的潜在保护作用提供了一个有吸引力的模型。单侧慢病毒载体注射一个月后,切断面神经,3个月后处死动物。GDNF基因的病毒传递导致GDNF在脑干内的长期表达和广泛扩散。此外,由于尼塞尔染色和胆碱乙酰转移酶免疫反应均显示95%的运动神经元存在,轴切运动神经元可完全防止细胞死亡。此外,尽管缺乏靶细胞再神经化,GDNF可防止损伤诱导的神经元萎缩,并维持近端运动神经元轴突。这是第一个证据表明,在成年小鼠面部细胞核的运动神经元细胞体附近通过病毒介导的GDNF传递可以对损伤诱导的细胞死亡提供完全和长期的保护。

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数字

图1。
图1。
注射LV LacZ后60d,非癫痫小鼠脑干中β-半乳糖苷酶的表达。每20μm切片中β-半乳糖苷酶阳性细胞的数量在3 mm口-直肠距离内每100μm进行一次评估。面部细胞核的中心被确定并用作四只动物的参考点(每个切片的细胞数量±SEM)。
图2。
图2。
现场WHV元件的杂交。A类在面神经核注射LV-GDNF后60天,未受损小鼠。面神经核的区域表示为小点.比例尺,500μm。B类,近距离观察面神经核内的运动神经元(箭头)和其他感染细胞。比例尺,100μm。
图3。
图3。
脑干GDNF的免疫检测。A类在面神经核附近注射LV-GDNF 4个月后,GDNF免疫反应阳性。面神经核的区域表示为小点.注射LV-LacZ的动物(B类)或LV-mGDNF(C类). 比例尺,500μm。
图4。
图4。
注射PBS、LV-LacZ、LV-mGDNF或LV-GDNF 30的小鼠运动神经元数量(A类,C类)和90(B类,D类)面神经切断后d。A类,B类尼塞尔染色。C类,D类,ChAT免疫染色。运动神经元存活率表示为受损侧与非受损侧相比存活细胞的百分比。只有GDNF与PBS、LacZ和mGDNF或未经处理的小鼠有统计学差异***第页< 0.001.
图5。
图5。
注射LV-GDNF损伤动物面神经核横截面的尼塞尔染色(A类,B类)或LV-mGDNF(C类,D类)神经切断后90天(尼塞尔染色)。A类,C类,非损伤侧。B类,D类,病变侧。比例尺,200μm。
图6。
图6。
注射LV-GDNF损伤动物面神经核横截面ChAT免疫染色(A类)和LV-LacZ(B类)神经切断后90天。左侧,非损伤侧。赖特,受损侧。比例尺,500μm。
图7。
图7。
抗神经丝抗体(SMI-32)染色的面部运动神经元中央突起。A类非损伤、非注射侧。B类,损伤侧注射慢突变GDNF。C类,损伤侧注射lent-GDNF。比例尺,40μm。
图8。
图8。
GDNF对损伤后3个月运动神经元大小分布的影响。A–C,非损伤侧面部运动神经元的尺寸分布(单位:平方微米):A类,未经治疗;B类,LacZ;C类、GDNF。D–F型,受损侧Soma大小分布:D类,未感染;E类,LacZ;F类,GDNF感染的动物。

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引用人

工具书类

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