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.1999年7月15日;9(14):728-37.
doi:10.1016/s0960-9822(99)80332-7。

传统蛋白激酶C的疏水性磷酸化基序由自身磷酸化调节

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传统蛋白激酶C的疏水性磷酸化基序由自身磷酸化调节

贝恩·克拉帕等。 当前生物. .
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摘要

背景:现在已知越来越多的激酶由两个磷酸化开关控制,一个位于活性位点入口附近的环上,另一个位于羧基末端。对于蛋白激酶C(PKC)家族的酶,激活环的磷酸化由另一个激酶介导,但羧基末端磷酸化的机制尚不清楚。后一个开关包含两个磷酸化位点——一个位于“转”基序上,另一个位于保守的疏水磷酸化基序上——它们分别或同时存在于许多其他激酶中。

结果:在这里,我们研究了传统PKC的羧基末端磷酸化位点是由自身磷酸化还是由另一种激酶控制。首先,动力学分析表明,PKCβ-自身磷酸化激酶结构域的纯化构建以明显的浓度依赖性方式作用于疏水磷酸化基序的Ser660残基上。其次,PKC的激酶激活突变体在COS-7细胞中表达时,其羧基末端位点Thr641或Ser660均未包含磷酸盐。不能在疏水位点上结合磷酸盐与其他关键磷酸化位点的磷酸化状态无关:在Thr641和/或激活-停止位置带负电荷的激酶激活突变体在体内也没有磷酸化。

结论:PKCβ-自身磷酸化通过明显的分子内机制在其保守的羧基末端疏水磷酸化位点进行。对激酶活性突变体的表达研究表明,这种机制是体内唯一负责磷酸化该基序的机制。因此,传统的PKC在活化环开关处被另一激酶磷酸化后自动调节羧基末端磷酸化开关。

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