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.1999年6月;140(6):2452-62.
doi:10.1210/endo.140.6.6759。

类固醇生成因子-1与人类促性腺激素释放激素受体基因第一外显子内的促性腺素特异性元件相互作用,介导促性腺因子特异性表达

附属公司

促性腺激素因子-1与人类促性腺激素释放激素受体基因第一外显子内的促性腺激素特异性元件相互作用,介导促性腺激素特异性表达

E S Ngan公司等。 内分泌学. 1999年6月.

摘要

GnRH在调节人类生殖功能中起着关键作用。这种下丘脑肽与垂体促性腺激素上的受体(GnRHR)相互作用,触发促性腺素的分泌,进而调节性腺中性类固醇的释放。鉴于GnRHR的重要性,人类GnRHR(hGnRHR)基因转录调控的分子机制成为理解人类生殖的关键问题。在本报告中,研究了甾体生成因子-1(SF-1)作为hGnRHR基因表达的关键细胞特异性调节因子的可能参与。通过瞬时荧光素酶报告基因检测,含有与ATG密码子相关的2.3 kb hGnRHR基因5'-侧翼区域的野生型启动子能够使小鼠αT3-1促性腺激素中荧光素酶活性增加3.6+/-0.2倍(P<0.05)。随后的缺失分析表明,该基因第一外显子内最接近的173 bp,虽然不是启动子本身,但包含对hGnRHR基因基本表达必不可少的关键调控元件。通过定点突变研究了位于-5、-134和-396位的假定促性腺激素特异性元件(GSE;共识5'-CTG(A)/(T)CCTTG-3')的功能作用,发现只有位于-134位的突变显著降低了启动子活性(降低80%;P<0.05)。这种GSE突变体的衰减效果是细胞特异性的,因为它仅限于alphaT3-1细胞,而不限于COS-7和人卵巢腺癌(SKOV-3)细胞。使用αT3-1核提取物或重组SF-1蛋白的竞争迁移率变化分析清楚地表明,SF-1能够与位于-134的GSE元件特异性相互作用。使用在凝胶位移分析中完全消除复合物形成的SF-1抗体,进一步证明了内源性核SF-1的参与。通过使用具有2-bp扫描突变的寡聚引物进行竞争性凝胶位移分析,确定了与SF-1相互作用所必需的序列(5'-TTG(A)/(T)CCCTG-3',下划线序列很重要)。为了研究SF-1的体内功能,用hGnRHR启动子荧光素酶构建物共转染SF-1正、反义信使RNA(mRNA)的载体直接表达到αT3-1、SKOV-3和COS-7细胞中。SF-1 mRNA的过度表达能够增强所有受试细胞的启动子活性。相反,反义SF-1 mRNA的表达仅在alphaT3-1细胞中降低hGnRHR启动子活性,而在COS-7或SKOV-3细胞中没有。总之,本文报道的数据提供了确凿的证据,证明SF-1与hGnRHR基因第一外显子内-134位GSE基序相互作用,以调节其细胞特异性表达。

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