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比较研究
.1999年5月21日;274(21):15222-9.
doi:10.1074/jbc.274.21.15222。

自体溶酶体膜相关甜菜碱同型半胱氨酸甲基转移酶。监测自噬的隔离细胞溶质酶的有限降解片段

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自体溶酶体膜相关甜菜碱同型半胱氨酸甲基转移酶。监测自噬的隔离细胞溶质酶的有限降解片段

上野县等。 生物化学杂志. .
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摘要

我们比较了从注射leupeptin的大鼠肝脏中分离的自体溶酶体和溶酶体的膜蛋白。除了这两种膜共有的许多多肽外,还发现自溶体膜在内质网管腔蛋白(蛋白质二硫化物异构酶、钙网蛋白、ER60、BiP)和内体/高尔基体标记物(阳离子非依赖性甘露糖6-磷酸受体、转铁蛋白受体、高尔基58-kDa蛋白)中更为丰富而不是溶酶体膜。自溶体膜蛋白包括三种多肽(44、35和32kDa),其氨基末端序列尚未报道。结合免疫印迹和逆转录聚合酶链反应分析,我们确定44-kDa肽为甜菜碱同型半胱氨酸甲基转移酶的完整亚基,35-和32-kDa-肽为两个蛋白水解片段。自溶体的蛋白酶消化显示,内腔中存在44-kDa和32-kDa-肽,而35-kDa/肽则不存在。在原代肝细胞培养物中,在E64d存在下发生饥饿诱导的32-kDa肽积累,表明32-kDa肽是在自噬过程中由隔离的44-kDa-肽形成的。雷帕霉素可诱导其积累,但沃特曼、3-甲基腺嘌呤和巴非霉素可完全抑制其积累。因此,通过免疫印迹法检测32-kDa肽可以作为监测自噬的简化分析方法。

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