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.1999年4月；19(4):2515-26.
doi:10.1128/MCB19.4.2515。

Esa1p是细胞周期进展所必需的组蛋白乙酰转移酶

A S克拉克 1, J E Lowell公司, S J雅各布森, L皮卢斯
附属公司

Esa1p是细胞周期进展所必需的组蛋白乙酰转移酶

A S克拉克等。 分子细胞生物学. 1999年4月.

摘要

组蛋白在染色质组装过程中，随着特定转录模式的建立，以及在有丝分裂和发育过程中发生动态变化。修饰包括乙酰化、磷酸化、泛素化、甲基化和ADP-核糖基化，但每一种修饰的生物学意义尚不清楚。例如，不同的乙酰化模式与核小体形成和转录激活或沉默的染色质相关，但编码几种酵母组蛋白乙酰转移酶（HAT）活性的基因突变导致无细胞表型或仅有适度的生长缺陷。在这里，我们报告了ESA1的特征，ESA1是MYST家族的一个重要基因，包括两个酵母沉默基因、与白血病和人类免疫缺陷病毒1型Tat蛋白相关的人类基因，以及果蝇mof，一个男性剂量补偿所必需的基因。Esa1p以不同于其他酵母酶的模式乙酰化组蛋白，温度敏感突变等位基因在体外消除酶活性，并导致组蛋白H4乙酰化亚型在体内部分丢失。携带这些突变的菌株在细胞周期中也被阻断，因此在限制温度下，esa1突变株能够成功复制DNA，但不能正常进行有丝分裂和胞质分裂。最近的研究表明，Esa1p在体外增强转录，从而可能调节对细胞周期控制重要的基因的表达。因此，这些观察结果将重要的HAT活性与细胞周期进展联系起来，可能通过离散的转录调控事件。

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数字

图1
图1
Esa1p与人类Tip60和D.黑腹果蝇财政部。显示了与乙酰转移酶（包括酵母Hat1p和Gcn5p）具有强序列相似性的区域（黑箱）。重点介绍了该地区类似和相同的残留物。Neuwald和Landsman（42）定义的A基序中已知和预测乙酰转移酶中最保守的残基用星号表示。温度敏感位置欧洲航天局1等位基因（见正文）由Esa1p漫画上方的箭头标记；的位置esa1-L327S序列扩展中的箭头也显示了等位基因。中保守的G→E突变财政部（25）在序列下方用箭头标记。在这三个基因中发现了一个N末端的染色结构域（1，25，31，47）SAS公司家庭成员（斜条纹）。每种蛋白质中的氨基酸数量如右图所示。
图2
图2
重组Esa1p乙酰化组蛋白。使用酵母或小牛组蛋白作为底物的HAT分析产物在SDS–18%聚丙烯酰胺凝胶上进行解析，该凝胶用考马斯亮蓝（A）染色并进行荧光照相（B）处理。比较重组Esa1p和重组Gcn5p的活性；而Esa1p优先乙酰化H4，Gcn5p优先乙酰化H3（32）。（C） 将含有等量重组Esa1p、载体对照或重组Esa1-L327Sp的细菌提取物与三H-乙酰辅酶A和小牛组蛋白或BSA。Esa1p乙酰化小牛组素，但不乙酰化BSA。在载体控制或Esa1-L327Sp裂解物或其他两种测试的突变蛋白中未观察到活性（数据未显示）。Esa1p的首选靶点是组蛋白H4（D）的Lys5、组蛋白H3（E）的Lys14以及组蛋白H2A（F）的Lys 4和Lys 7。注意，H4中的赖氨酸8、12和16也被乙酰化。当计算Edman降解循环的重复产率时，每个位点的乙酰化程度都相当，并且显著小于Lys5。
图3
图3
欧洲航天局1突变体对温度敏感。通过电镀野生型观察到温度敏感性欧洲标准协会（LPY3498）和欧洲航天局1突变体(esa1-L254P型[LPY3500]，esa1-L327S[LPY3430]，以及esa1-414型[LPY3291]）菌株在28°C（左）和37°C（右）下五倍连续稀释。这三个等位基因都是隐性突变。
图4
图4
欧洲航天局1突变体显示体内组蛋白H4-Lys5乙酰化水平有条件降低。来自野生型的全细胞裂解物（WT；泳道2、6和10）或欧洲航天局1在28°C（2到5道）或37°C（6到13道）下生长的对温度敏感的菌株（3到5道、7到9道和11至13道）在SDS–18%的聚丙烯酰胺凝胶上分离，然后转移到尼龙上，用针对Ly5-乙酰化H4（A）的抗血清进行探测，或用针对组蛋白的对照抗血清（B；上图显示H4免疫反应带）或用考马斯亮蓝染色（B，下图）。纯化的酵母组蛋白（YH；约6μg；第1道）平行运行。esa1-L254P型（LPY3500；车道3、7和11），esa1-414型（LPY3291；4、8和12车道），以及esa1-L327S（LPY3430；第5、9和13道）菌株在37°C的非许可温度下显示Lys5-乙酰化免疫反应性降低。箭头表示组蛋白H4的迁移。
图5
图5
esa1型G区温度敏感突变体的捕获2/DNA复制后细胞周期的M期。野生型欧洲标准协会（LPY3498）（左）和突变体esa1-L254P型（LPY3500）（右）细胞在28℃和37℃下培养4 h，并通过流式细胞仪分析DNA含量。这个x个和年轴分别代表相对荧光强度和细胞数量。欧洲航天局1与G一起被捕的变种人2/限制温度37°C下DNA复制后的M DNA含量。这种突变表型也被观察到用于esa1-L327S,esa1-414型和其他四个对温度敏感的等位基因进行了测试（数据未显示）。到达被捕的时间有所不同，这取决于欧洲标准协会.
图6
图6
欧洲航天局1突变体表现出不适当的DNA分离。欧洲标准协会（LPY3498），esa1-L254P型（LPY3500），以及esa1-414型（LPY3291）细胞在37°C下孵育4小时esa1-L327S（LPY3430）细胞在37℃孵育8h，固定，并用DAPI染色。欧洲航天局1Nomarski光学观察到的突变细胞主要是大的芽状细胞（左栏和中栏，底部），还有一些三芽细胞（右栏，下部）。DAPI染色表明欧洲航天局1与野生型细胞相比，突变细胞要么不能分离，要么染色质分离异常。棒材，5μm。
图7
图7
esa1型突变体破坏有丝分裂细胞周期的进展。欧洲标准协会（LPY3498）和esa1-L254P型（LPY3500）细胞在37°C下培养4 h，并准备用于间接免疫荧光显微镜。欧洲航天局1在限制温度下，突变体细胞表现出异常的核和短梭形形态。如双标记免疫荧光显微镜所示，针对Kar2p的抗血清检测到核膜，ER和α-微管蛋白检测到微管。与野生型相比，核膜和微管仅部分延伸至芽颈，但与DAPI染色区域一致。棒材代表5μm。
图8
图8
欧洲航天局1突变体具有异常的超微结构形态。野生型欧洲标准协会（LPY3498）（A和B）和esa1-L254P型（LPY3500）（C和D）细胞在37°C下培养4 h，并通过快速冷冻制备用于电子显微镜。在野生型细胞中，核仁电子密度物质位于分裂核（n）（A）的两极，或在非分裂细胞中呈新月形（B，闭合箭头）。然而，在欧洲航天局1突变体（C和D，开放箭头），电子密度物质分散在整个细胞核中。大多数突变的大乳细胞的细胞核位于芽颈的一侧，与野生型细胞相反，野生型细胞的细胞核平均延伸至芽颈。细胞的细胞质欧洲航天局1突变体（C，星号）也比野生型细胞更具囊泡化。每个面板显示不同的单元格，显示的比例尺代表1μm（a和C）和0.5μm（B和D）。v、 液泡。
图9
图9
这个欧洲航天局1突变体G2/M逮捕取决于RAD9系统检查点基因。（A）rad9Δ（LPY3784），（B）esa1-L254P型（LPY3785），（C）rad9Δesa1-L254P（LPY3780），（D）mad3Δesa1-L254P（LPY4223）和（E）mad3（mad3）（LPY4222）突变细胞在37°C下培养，然后通过流式细胞仪分析DNA含量。这个x个和年轴分别代表相对荧光强度和细胞数量。这个esa1-L254P型和mad3Δesa1-L254P突变体在DNA复制后被捕，约80%的细胞含有2C DNA含量，而rad9Δ和mad3（mad3）细胞具有用于分裂细胞的正常DNA含量。这个rad9Δesa1-L254P双突变体同时具有1C和2C峰值，表明esa1-L254P型细胞周期阻滞取决于RAD9系统但不在马达3.
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    Libaris GMN、Jiang Y、Razzaq I、Brandl CJ、Shapiro RS、Lajoie P。 Libaris GMN等人。 G3（贝塞斯达）。2024年2月7日；14（2）：jkad250。doi:10.1093/g3journal/jkad250。 G3（贝塞斯达）。2024 PMID：37889998 免费PMC文章。
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    1. Aasland R，Stewart A F.染色阴影结构域，异染色质结合蛋白HP1中的第二个染色结构域。核酸研究1995；23:3168–3173.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Allen J B，Zhou Z，Siede W，Freiberg E C，Elledge S J。SAD1/RAD53蛋白激酶控制酵母中的多个检查点和DNA损伤诱导的转录。《基因开发》1994；8:652–665.-公共医学
    1. Altschul S F、Gish W、Miller W、Myers E W、Lipman D J.基本局部对齐搜索工具。分子生物学杂志。1990;215:403–410.-公共医学
    1. Bannister A J，Kouzarides T。CBP共激活物是组蛋白乙酰转移酶。自然。1996;384:641–643.-公共医学
    1. Baudin A，Ozier-Kalogeropoulos O，Denouel A，LaCroute F，Cullen C.一种简单有效的酿酒酵母直接基因删除方法。1993年《核酸研究》；14:3329–3330.-项目管理咨询公司-公共医学

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