(A类)使用Tg（SAGFF234A；UAS:GFP）在7 dpf的条件下，用GFP（绿色）标记ENS谱系，我们观察到这些细胞中的大多数是HuC/D⁺神经元（青色）（n=9）。(B类)A中方框的高倍视图，箭头表示GFP⁺户口C/D⁺ENS神经元和箭头指示GFP⁺户口C/D^-非神经元ENS细胞。(C类)本研究中使用的各种转基因报告系标记HuC/D能力的效率比较⁺7 dpf幼虫内的ENS神经元。Tg（SAGFF234A；UAS:GFP）HuC/D标签87.8%±2.8⁺ENS神经元，Tg（sox10Cre；Cherry）标记HuC/D的47.1%±19.9⁺ENS神经元和Tg（sox10:Cre；ef1a:loxP-GFP-loxP-DsRed2）标记HuC/D的80.8%±7.8⁺ENS神经元。数据以平均值±SD表示，n=9个生物重复。(D类)HuC/D比例比较⁺ENS神经元（蓝色）与HuC/D^-非神经元ENS细胞（红色）由7dpf ENS谱系内的各种转基因报告细胞系标记。大多数由Tg（sox10Cre；Cherry）或Tg（sox10:Cre；ef1a:loxP-GFP-loxP-DsRed2）谱系报告系标记的细胞是神经元，每个标记约85%HuC/D⁺细胞和15%HuC/D^-细胞（分别为84.8%±7.7%和15.2%±7.7%vs.86.8%±6.4和13.2±6.4%），无显著差异（p=0.78）。Tg（SAGFF234A；无人机系统：GFP）HuC/D标签93.7%±3.0⁺神经元和HuC/D的6.2%±3.0^-细胞，与sox10预驱动谱系报告者相比，比例细胞类型标记效率存在显著差异（分别为p=0.0078和p=0.09）。数据以平均值±SD表示，n=9个生物重复。(E–J公司). 斑马鱼幼体ENS未标记BFABP和GFAP抗体。(E类)BFABP（绿色）无法标记7dpf肠道中的EGC，尽管HuC/D神经元（红色）很容易检测到（n=20）。(F类)哺乳动物GFAP抗体（mGFAP，绿色）不能检测到7dpf肠道中的细胞，尽管可以检测到HuC/D阳性神经元（红色）（n=26）。相反，mGFAP纤维向肠道下降，但没有进入肠道（箭头）。(G–H（G–H）)一种针对斑马鱼GFAP（zGFAP）的抗体可以检测到位于HuC/D附近的7 dpf肠道（红色，箭头）中丰富的环形纤维⁺ENS神经元（蓝色）。然而，在含有ENS神经元（G，n=6）和转塔^{hu2846/hu2846}由于Ret受体酪氨酸激酶突变和ENS祖细胞未能在肠道定植（H，n=6）（HuC/D⁺仅存在于G、蓝色中的神经元）。(I–J型)7 dpf的免疫染色Tg（SAGFF234A；UAS:GFP）带有另一种针对斑马鱼GFAP（zrf-1）的GFAP抗体的幼虫也显示出丰富的环状纤维（红色，箭头），在含有ENS神经元（绿色）（I，n=10）和ret（雷特）^{hu2846/hu2846}缺乏ENS神经元的幼虫（绿色，J，n=10），表明这些纤维与ENS谱系无关。(K–O型)上述实验中检测ENS胶质细胞的抗体能够成功标记7dpf脊髓中的CNS胶质细胞：S100b（K，n=30）、BFABP（L，n=20）、mGFAP（M n=26）、zrf-1（n，n=20,zGFAP（O，n=12）。(P（P）)GFP的预期模式⁺在7dpf的脊髓内检测到细胞Tg（gfap:GFP）幼虫（n=50）。(问-答)使用各种抗体和转基因工具对成人肠道组织进行分析，以识别CNS胶质细胞。(问)尽管HuC/D（红色）识别HuC/D，但在成人肠道中未检测到BFABP⁺肠神经元（n=9）。(R（右）)虽然使用zGFAP抗体（绿色）在成人肠道中检测到信号，但在细胞体中未发现条纹信号，也未与HuC/D神经元（红色）明确相关，染色模式令人想起7dpf（n=12）时看到的非ENS相关染色。(S公司)GFP公司⁺成人未观察到细胞Tg（−3.6巢蛋白：绿色荧光蛋白）肠道组织，尽管已检测到HuC/D⁺神经元（红色）（n=4）。所有共焦图像都是短共焦叠加的最大投影。合并面板中的50µm标尺(A、 E–J、Q–S)或单色图像(K–P（K–P）).

(A类)使用Tg（SAGFF234A；UAS:GFP）用GFP（绿色）标记ENS谱系，我们观察到这些细胞中的大多数是HuC/D⁺神经元（青色）（n=9）。(B类)A框的高放大率视图，箭头表示绿色荧光蛋白⁺户口C/D⁺ENS神经元和箭头指示GFP⁺HuC/D公司^-非神经元ENS细胞。(C类)本研究中使用的各种转基因报告系标记HuC/D能力的效率比较⁺7 dpf幼虫内的ENS神经元。Tg（SAGFF234A；UAS:GFP）HuC/D标签87.8%±2.8⁺ENS神经元，Tg（sox10Cre；Cherry）标记HuC/D的47.1%±19.9⁺ENS神经元和Tg（sox10:Cre；ef1a:loxP-GFP-loxP-DsRed2）标记HuC/D的80.8%±7.8⁺ENS神经元。数据以平均值±SD表示，n=9个生物重复。(D类)HuC/D比例比较⁺ENS神经元（蓝色）与HuC/D^-非神经元ENS细胞（红色）由7dpf ENS谱系内的各种转基因报告细胞系标记。大多数由Tg（sox10Cre；Cherry）或Tg（sox10:Cre；ef1a:loxP-GFP-loxP-DsRed2）谱系报告系标记的细胞是神经元，每个标记约85%HuC/D⁺细胞和15%HuC/D^-细胞（分别为84.8%±7.7%和15.2%±7.7%vs.86.8%±6.4和13.2±6.4%），无显著差异（p=0.78）。Tg（SAGFF234A；UAS:GFP）HuC/D标签93.7%±3.0⁺神经元和HuC/D的6.2%±3.0^-细胞，与sox10预驱动谱系报告者相比，比例细胞类型标记效率存在显著差异（分别为p=0.0078和p=0.09）。数据以平均值±SD表示，n=9个生物重复。(E–J). 斑马鱼幼体ENS未标记BFABP和GFAP抗体。(E类)BFABP（绿色）无法标记7dpf肠道中的EGC，尽管HuC/D神经元（红色）很容易检测到（n=20）。(F类)哺乳动物GFAP抗体（mGFAP，绿色）不能检测到7dpf肠道中的细胞，尽管可以检测到HuC/D阳性神经元（红色）（n=26）。相反，mGFAP纤维向肠道下降，但没有进入肠道（箭头）。(G–H（G–H）)一种针对斑马鱼GFAP（zGFAP）的抗体可以检测到位于HuC/D附近的7 dpf肠道（红色，箭头）中丰富的环形纤维⁺ENS神经元（蓝色）。然而，在含有ENS神经元（G，n=6）和ret（雷特）^{hu2846/hu2846}由于Ret受体酪氨酸激酶突变和ENS祖细胞未能在肠道定植（H，n=6）（HuC/D⁺神经元仅出现在G，蓝色）。(I–J型)7 dpf免疫染色Tg（SAGFF234A；UAS:GFP）带有另一种针对斑马鱼GFAP（zrf-1）的GFAP抗体的幼虫也显示出丰富的环状纤维（红色，箭头），在含有ENS神经元（绿色）（I，n=10）和转塔^{hu2846/hu2846}缺乏ENS神经元的幼虫（绿色，J，n=10），表明这些纤维与ENS谱系无关。(K–O型)上述实验中检测ENS胶质细胞的抗体能够成功标记7dpf脊髓中的CNS胶质细胞：S100b（K，n=30）、BFABP（L，n=20）、mGFAP（M n=26）、zrf-1（n，n=20,zGFAP（O，n=12）。(P（P）)GFP的预期模式⁺在7dpf的脊髓内检测到细胞Tg（gfap:GFP）幼虫（n=50）。(问-答)使用各种抗体和转基因工具对成人肠道组织进行分析，以识别CNS胶质细胞。(问)尽管HuC/D（红色）识别HuC/D，但在成人肠道中未检测到BFABP⁺肠神经元（n=9）。(R（右）)虽然使用zGFAP抗体（绿色）在成人肠道中检测到信号，但在细胞体中未发现条纹信号，也未与HuC/D神经元（红色）明确相关，染色模式令人想起7dpf（n=12）时看到的非ENS相关染色。(S公司)GFP公司⁺成人未观察到细胞Tg（−3.6nestin:GFP）肠道组织，尽管已检测到HuC/D⁺神经元（红色）（n=4）。所有共焦图像都是短共焦叠加的最大投影。合并面板中的50µm标尺(A、 E–J，Q–S)或单色图像(K–P（K–P）).

(A类)显示成人外肌层细胞核的典型FACS图Tg（sox10:Cre；樱桃）斑马鱼内脏在单个完整的DAPI上⁺核。m樱桃色⁺收集到的细胞核不到初始种群的1%。等效数量的mCherry^-同时收集细胞核。(B类)成人肠道转录组的主成分分析揭示了Cherry对样本的分离⁺vs.樱桃^-表达（PC1中解释的变异性的30%，PC2中解释的变异性的13%）。每种条件的五个生物复制。(C–H型)成肠樱桃的分析⁺vs樱桃^-转录组数据与先前公布的数据和公开可用的参考数据进行比较。成年肠道樱桃⁺vs樱桃^-转录组数据(补充文件1)筛选出对数折叠变化>0的基因（在樱桃中⁺vs樱桃^-)p值<0.05。结果集丰富了具有统计学意义的斑马鱼ENS相关基因。(C类)基因集富集分析表明，GO生物过程在樱桃中富集⁺人群包括神经系统相关术语。(D–E型)代表性基因集的富集图(D类)突触信号和(E类)樱桃中神经元细胞间黏附丰富⁺样品。(F类)聚类热图显示了斑马鱼幼体ENS神经元中丰富的基因列表的表达（来自Roy-Carson等人，2017年)这在我们的成年斑马鱼肠道转录组数据中进行了分析。我们观察到，超过750个神经表达基因在樱桃中富集⁺相对于Cherry的样本^-样品(补充文件2)这些是候选的成年ENS神经元相关基因。这些包括phox2bb公司，phox2a型，ret（雷特），弹性体3，弹性4，贵宾、和国家计量单位. (G公司)聚类热图显示哺乳动物Plp1中富集的前25个基因⁺胶质细胞(Rao等人，2015年)具有斑马鱼直系同源物，并且在Cherry中上调⁺vs樱桃^-样本，揭示了九个候选斑马鱼ENS胶质细胞相关基因。跨物种比较（斑马鱼与小鼠）利用公开可用的同源性分配资源（见方法）。(H（H）)聚类热图显示去除与斑马鱼ENS神经元相关的基因后，成年斑马鱼的ENS转录组中的基因表达（见上文C部分）。鉴定出600多个独特基因(补充文件6)，是候选的成年ENS非神经元或ENS胶质细胞相关基因。这些包括sox10型，狐狸d3，tfap2a公司，sox2，col28a1b类，plp1b，ptprz1a型和ptprz1b型。

(A类)显示成人外肌层细胞核的典型FACS图Tg（sox10:Cre；樱桃）斑马鱼内脏在单个完整的DAPI上⁺核。m樱桃色⁺收集细胞核，占起始群体的不到1%。等效数量的mCherry^-同时收集细胞核。(B类)成人肠道转录组的主成分分析揭示了Cherry对样本的分离⁺vs.樱桃^-表达（30%的变异性在PC1中解释，13%在PC2中解释）。每种条件的五个生物复制。(C–H型)樱桃成虫肠道分析⁺vs樱桃^-转录组数据与先前公布的数据和公开可用的参考数据进行比较。成年肠道樱桃⁺vs樱桃^-转录组数据(补充文件1)筛选出对数折叠变化>0的基因（在樱桃中⁺vs樱桃^-)p值<0.05。结果集丰富了具有统计学意义的斑马鱼ENS相关基因。(C类)基因集富集分析表明，GO生物过程在樱桃中富集⁺人群包括神经系统相关术语。(D–E型)代表性基因集的富集图(D类)突触信号和(E类)樱桃中神经元细胞间黏附丰富⁺样品。(F类)聚类热图显示了斑马鱼幼体ENS神经元中丰富的基因列表的表达（来自Roy-Carson等人，2017年)这在我们的成年斑马鱼肠道转录组数据中进行了分析。我们观察到，超过750个神经表达基因在樱桃中富集⁺与樱桃相关的样品^-样品(补充文件2)这些是候选的成年ENS神经元相关基因。这些包括phox2bb公司，phox2a型，ret（雷特），弹性体3，elavl4型，贵宾、和国家计量单位. (G公司)聚类热图显示哺乳动物Plp1中富集的前25个基因⁺胶质细胞(Rao等人，2015年)具有斑马鱼同源基因且在樱桃中上调的⁺vs樱桃^-样本，揭示了九个候选斑马鱼ENS胶质细胞相关基因。跨谱比较（斑马鱼到老鼠）利用公开可用的同源性分配资源（参见方法）。(H（H）)聚类热图显示去除与斑马鱼ENS神经元相关的基因后，成年斑马鱼的ENS转录组中的基因表达（见上文C部分）。鉴定出600多个独特基因(补充文件6)，是候选的成年ENS非神经元或ENS胶质细胞相关基因。这些包括索10，狐狸d3，tfap2a公司，索2，col28a1b类，plp1b，ptprz1a型和ptprz1b型。

(A类)显示樱桃差异表达基因对数2倍变化的散点图⁺和樱桃^-本文中提出的成年斑马鱼体转录组研究中的样本（X轴），以及Zeisel及其同事发布的已发表单细胞数据集中小鼠ENS神经元和ENS胶质细胞差异表达基因的对数倍变化(Zeisel等人，2018年)（Y轴）。中的完整数据补充文件3（另请参见方法和图2——补充图3). 在右下象限中可以找到Cherry+中的基因和小鼠神经元中的基因，示例基因以红色突出显示。在右上象限中，可以找到Cherly+中和小鼠胶质细胞中的基因。示例基因以绿色突出显示。(B类)聚类热图显示了在本研究的成年斑马鱼肠道转录组数据中分析的小鼠ENS神经元中富集的366个基因列表（logFC>0.2小鼠神经元vs.胶质细胞），其斑马鱼同源基因在樱桃+种群中富集（logFC>0，p值≤0.05）。选择显示的基因（完整的基因列表和相应的数据显示在补充文件4). (C类)聚类热图显示了在本研究的成年斑马鱼肠道转录组数据中分析的富含小鼠ENS胶质细胞的63个基因列表（logFC>0.2小鼠胶质细胞vs.神经元），其斑马鱼同源基因在樱桃+种群中富集（logFC>0，p值≤0.05）（完整的基因列表和相应数据显示在补充文件5).

使用小鼠单细胞转录组数据Zeisel等人，2018年，从Linnarsson实验室网站下载(https://storage.googleapis.com/linnarsson-lab-loom/l1_enterinc.lowen)，数据按照方法一节中的描述进行处理，以确定主要是神经元和胶质细胞簇之间的差异基因表达。UMAP中显示的集群(A类)被标记为神经或胶质(B类)基于已知神经表达基因Elavl3、Elavl4、Prph的表达(C类)或已知胶质细胞表达基因Sox10、S100b和Gfap(D类). (E类)对增殖特征基因的检查（此处以Top2A和Ki67为例）表明簇5富含增殖性ENS胶质细胞。(F类)第五组包含约300个细胞，占数据集分析中约15000个胶质细胞的1.9%。这对应于原始细胞中鉴定的增殖性ENS神经胶质簇ENTG1Zeisel等人，2018年出版物，占ENS胶质细胞的1.6%。

成人肠道的免疫组织化学Tg（her4.3:EGFP）允许表征GFP的细胞形态⁺细胞及其与哺乳动物EGC亚型的比较(Boesmans等人，2015年). (A类)GFP表达细胞（绿色）与神经元密切相关，神经元在细胞体中表达HuC/D，在细胞过程中表达AcTu（红色）（n=70）。插图显示框状区域的高倍视图，标记神经元（星号）、GFP表达（箭头）和高度分支的GFP表达细胞过程（箭头）。(B–E类)在Tg（her4.3:EGFP）⁺单元格：(B类)GFP公司⁺肌层（箭头）中的细胞，其突起似乎包裹在HuC/D周围⁺细胞体（红色，星号），类似于I型哺乳动物EGC（插图）(C类)GFP公司⁺肌间层（箭头）中的细胞具有沿着AcTu延伸的细长突起（箭头）⁺神经元突起（红色），类似于II型哺乳动物EGC（插图）(D类)GFP公司⁺靠近粘膜层（箭头）的细胞，如粘膜上皮（ep，DAPI突出显示的细胞核为灰色），类似于哺乳动物III型EGC（插图），以及(E类)双极GFP⁺肌肉层内的细胞（箭头），与AcTu相关⁺神经元纤维（红色，箭头），类似于IV型哺乳动物EGC（插图）。插图改编自Boesmans等人，2015年所有共焦图像都是短共焦叠加的最大投影。合并面板中的比例尺：50µm(A类)和10µm(B–E类).

成人肠道的免疫组织化学Tg（her4.3:EGFP）允许表征GFP的细胞形态⁺细胞及其与哺乳动物EGC亚型的比较(Boesmans等人，2015年). (A类)GFP表达细胞（绿色）与神经元密切相关，神经元在细胞体中表达HuC/D，在细胞过程中表达AcTu（红色）（n=70）。插图显示框状区域的高倍视图，标记神经元（星号）、GFP表达（箭头）和高度分支的GFP表达细胞过程（箭头）。(B–E)在Tg（her4.3:EGFP）⁺单元格：(B类)GFP公司⁺肌层（箭头）中的细胞，其突起似乎包裹在HuC/D周围⁺细胞体（红色，星号），类似于I型哺乳动物EGC（插图）(C类)GFP公司⁺肌间层（箭头）中的细胞具有沿着AcTu延伸的细长突起（箭头）⁺神经元突起（红色），类似于II型哺乳动物EGC（插图）(D类)GFP公司⁺靠近粘膜层（箭头）的细胞，如粘膜上皮（ep，DAPI突出显示的细胞核为灰色），类似于哺乳动物III型EGC（插图），以及(E类)双极GFP⁺肌肉层（箭头）内的细胞，与AcTu相关⁺神经元纤维（红色，箭头），类似于IV型哺乳动物EGC（插图）。插图改编自Boesmans等人，2015年所有共焦图像都是短共焦叠加的最大投影。合并面板中的比例尺：50µm(A类)和10µm(B–E类).

(A类)在成年斑马鱼中，HuC/D的一个亚群⁺ENS神经元（绿色）突出显示为Tg（SAGFF217；UAS:mm樱桃色）樱桃表达（红色，箭头）充满了细胞体和丰富的表达细胞过程（红色）。HuC/D上的剩余比例⁺单元格（绿色）不表示樱桃（箭头）（n=12）。共焦图像是短共焦叠加的最大投影。(B类)成人切片的电子显微镜图像Tg（her4.3:EGFP；SAGFF217；UAS:mmCherry）显示有组织层的肠道，假彩色以描绘GFP的位置⁺如插图所示的超分辨率图像中显示的单元格。注意这部分的神经元和轴突不是樱桃⁺神经元。图像描述了单个z平面。(C类)方框区域的高倍放大图，显示了分离轴突束的锯齿状细胞核（箭头）和径向延伸（黄色箭头，星号表示轴突束），以及许多与神经元细胞体接触的神经元细胞体（用N表示的神经元细胞体）。EGFP⁺细胞体大小为79.1µm^三最长投影长度为9µm。两名成年人扫描的六个感兴趣区域的代表性图像。比例尺：10µm(A、 B类)和1µm(C类).

(A类)在成年斑马鱼中，HuC/D的一个亚群⁺ENS神经元（绿色）突出显示为Tg（SAGFF217；UAS:mm樱桃色）樱桃表达（红色，箭头）充满了细胞体和丰富的表达细胞过程（红色）。HuC/D上的剩余比例⁺单元格（绿色）不表示樱桃（箭头）（n=12）。共焦图像是短共焦叠加的最大投影。(B类)成人切片的电子显微镜图像Tg（her4.3:EGFP；SAGFF217；UAS:mmCherry）显示有组织层的肠道，假彩色以描绘GFP的位置⁺如插图所示的超分辨率图像中显示的单元格。注意这部分的神经元和轴突不是樱桃⁺神经元。图像描述了单个z平面。(C类)框状区域的高倍视图，显示了分离轴突束的锯齿状核（箭头）和放射状延伸（黄色箭头，星号表示轴突束），以及许多与神经元细胞体接触的神经元细胞体（用N表示神经元细胞体）。EGFP⁺细胞的胞体大小为79.1µm^三最长投影长度为9µm。两名成年人扫描的六个感兴趣区域的代表性图像。比例尺：10µm(A、 B类)和1µm(C类).

(A–C)分析使用Tg（her4.3:EGFP；SAGFF234A；UAS:mmCherry）允许her4.3:EGFP（EGFP）⁺与樱桃相关的待检查细胞⁺在发育过程中定居于肠道的迁移性NC细胞群。 (A类)54 hpf时，无GFP⁺细胞（绿色）存在于肠道中，在迁移的NC细胞群中未检测到任何细胞（红色），尽管NC细胞衍生的HuC/D⁺此时存在ENS神经元（蓝色）。装箱区域（n=30）的高倍视图中显示的单通道。(B类)在60 hpf时，在肠道定植的NC细胞流中可以看到少量弱GFP表达细胞（绿色，箭头）（红色）。GFP公司⁺在HuC/D附近可以看到细胞⁺单元格（蓝色）。注意，可以检测到强烈表达GFP的细胞，但这些细胞不构成NC细胞迁移流的一部分（红色），位于肠道外（灰色箭头），很可能是黑素细胞（n=30）。单通道显示在方框区域的高倍视图中。(C类)在4 dpf时，在迁移的NC细胞流（红色）中发现GFP强表达细胞和弱表达细胞（绿色，箭头）数量增加。装箱区域（n=20）的高倍视图中显示的单通道。(D类)7 dpf时Tg（her4.3:EGFP）幼虫表达GFP的细胞（绿色、箭头）与HuC/D密切相关，但有别于HuC/D⁺阳性神经元（红色）（n=45）。偶尔可见HuC/D与表达低水平GFP（开放箭头）的细胞重叠。所有共焦图像都是短共焦叠加的最大投影。合并面板中的比例尺：50µm。

(A–C)分析使用Tg（her4.3:EGFP；SAGFF234A；UAS:mmCherry）允许her4.3:EGFP（EGFP）⁺与樱桃相关的待检查细胞⁺在发育过程中定居于肠道的迁移性NC细胞群。 (A类)54 hpf时，无GFP⁺细胞（绿色）存在于肠道中，在迁移的NC细胞群中未检测到任何细胞（红色），尽管NC细胞衍生的HuC/D⁺此时出现ENS神经元（蓝色）。装箱区域（n=30）的高倍视图中显示的单通道。(B类)在60 hpf时，在肠道定植的NC细胞流中可以看到少量弱GFP表达细胞（绿色，箭头）（红色）。GFP公司⁺细胞靠近HuC/D⁺单元格（蓝色）。注意，可以检测到强烈表达GFP的细胞，但这些细胞不构成NC细胞迁移流的一部分（红色），位于肠道外（灰色箭头），很可能是黑素细胞（n=30）。单通道显示在方框区域的高倍视图中。(C类)在4 dpf时，在迁移的NC细胞流（红色）中发现GFP强表达细胞和弱表达细胞（绿色，箭头）数量增加。装箱区域（n=20）的高倍视图中显示的单通道。(D类)7 dpf时Tg（her4.3:EGFP）幼虫表达GFP的细胞（绿色、箭头）与HuC/D密切相关，但有别于HuC/D⁺阳性神经元（红色）（n=45）。偶尔可见HuC/D与表达低水平GFP（开放箭头）的细胞重叠。所有共焦图像都是短共焦叠加的最大投影。合并面板中的比例尺：50µm。

(A类)成人Tg（her4.3:EGFP）斑马鱼扁平肠道免疫染色GFP（绿色）和细胞周期标记物MCM5（红色）。活跃增殖的GFP⁺MCM5型⁺在整个肠道内观察到细胞（箭头所示）。大多数GFP⁺人口保持静止（箭头）。共焦图像是短共焦叠加的最大投影。比例尺：合并面板中的10µm。(B类)GFP百分比的量化⁺MCM5型⁺细胞超过总GFP⁺种群（n=3）。数据以平均值±SD表示。

(A类)成人Tg（her4.3:EGFP）斑马鱼扁平肠的GFP（绿色）和细胞周期标记物MCM5（红色）免疫染色。活跃增殖的GFP⁺MCM5型⁺在整个肠道内观察到细胞（箭头所示）。大多数GFP⁺人口保持静止（箭头）。共焦图像是短共焦叠加的最大投影。比例尺：合并面板中的10µm。(B类)GFP百分比的量化⁺MCM5型⁺细胞超过总GFP⁺种群（n=3）。数据以平均值±SD表示。

(A类)实验设计示意图：浸泡3个月大的成人Tg（her4.3:EGFP）在1mM EdU脉冲中的斑马鱼持续三天之后，恢复到正常的斑马鱼水。然后在0天（t0）、4天（t4）或11天（t11）的追逐期后将动物剔除，并分析EdU掺入情况（t0 n=6，t4 n=5，t11 n=5）。(B–D类)在0天追踪中，大多数EdU标记为GFP⁺（黄色）细胞位于双倍体中（两个贴有标签的细胞靠近）。这些单元格是：(B类)两者都表达高水平的GFP（绿色，箭头）(C类)出现一个高GFP表达细胞（箭头所示）和一个低GFP表达的细胞（箭头）(D类)在较大的分组中，EdU标记与GFP表达水平较低的细胞相关（箭头），而在GFP高表达细胞中未观察到（箭头）。共焦图像是短共焦叠加的最大投影。合并面板中的比例尺：10µm(B–D类).

鉴于两者之间的相似性Tg（her4.3:EGFP）⁺EGC和Tg（her4.3:EGFP）⁺RGC，我们建议，与RGC一样，EGC可能以两种形式存在：Tg（her4.3:EGFP）⁺静态EGC（qEGC）和Tg（her4.3:EGFP）⁺激活的EGC（aEGC），后者具有增殖性，在我们的实验中可以吸收EdU（用蓝色表示）。我们认为aEGCs是一个自我更新的群体，它也可能恢复到静止状态。增殖的aEGC群体可以产生肠神经前体细胞（eNP；致力于神经原谱系的细胞），这些细胞可以保留EdU，但Tg（her4.3:EGFP）^-并且还不能表达HuC/D。这些细胞与樱桃细胞相对应⁺GFP公司^-户口C/D^-教育部⁺细胞定量图6I在我们的实验的EdU标记期间增加。最后，神经祖细胞经历了完全的神经元分化（eN），可以用HuC/D检测，也可以用EdU检测⁺在我们的实验中。这些细胞与樱桃细胞相对应⁺GFP公司^-户口C/D⁺教育部⁺在中量化图6H，在我们的EdU标记实验过程中也有所增加。

(A类)经过7天的DMSO处理Tg（her4.3:EGFP）转基因（绿色）和HuC/D在成年ENS中清晰可见⁺神经元（红色）（另见高倍插图）。(B类)使用γ-分泌酶抑制剂LY411575治疗7天后Tg（her4.3:EGFP）观察到表达（另见高倍放大插图）。图像是短共焦叠加的最大投影。B合并面板中的左侧插图显示了B中图像的单个z平面，并表明GFP染色突出了多个相互连接的GFP⁺细胞，具有几个不同的Dapi⁺GFP公司⁺显示了原子核（箭头）。n=4个生物复制/条件。合并面板中的比例尺：50µm。

(A类)经过7天的DMSO处理Tg（her4.3:EGFP）转基因（绿色）和HuC/D在成年ENS中清晰可见⁺神经元（红色）（另见高倍插图）。(B类)使用γ-分泌酶抑制剂LY411575治疗7天后Tg（her4.3:EGFP）观察到表达（另见高倍放大插图）。图像是短共焦堆叠的最大投影。B合并面板中的左侧插图显示了B中图像的单个z平面，并表明GFP染色突出了多个相互连接的GFP⁺细胞，具有几个不同的Dapi⁺GFP公司⁺显示了原子核（箭头）。n=4个生物复制/条件。合并面板中的比例尺：50µm。