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.1995年1月;66(1):3-14.

单丹磺酰尸胺(MDC)是自噬空泡的体内特异标记物

附属公司
  • PMID: 7750517

单丹磺酰尸胺(MDC)是自噬空泡的体内特异标记物

比德比克等。 Eur J细胞生物学. 1995年1月.

摘要

我们报告了自体荧光化合物单丹磺酰基尸胺(MDC)在体内标记自噬空泡的应用。当应用于培养的各种细胞类型(PaTu 8902、MDCK I、PC12、AR4-2J、WI-38)时,荧光显微镜观察到球形结构,主要位于核周区域。只有PC12和WI-38细胞在其丝状体中具有这些标记结构。用PaTu 8902进行的剂量反应实验表明,当MDC浓度超过0.1 mM时,体内标记的最佳浓度为0.05至0.1 mM,而细胞则会分离和崩解。与MDC孵育后,PaTu 89 02细胞在蔗糖密度梯度上进行亚细胞分离,在蔗糖浓度为20~26%时,观察到一个窄的荧光峰,其密度约为1.081~1.108g/cm3。对这些组分的超微结构分析显示,自噬液泡在其发育的不同阶段。为了研究内体细胞室是否也被MDC标记,我们将PaTu 8902细胞分别与MDC和液相标记物RITC-右旋糖酐和铁蛋白共培养。亚细胞分馏后的荧光测量以及精细结构分析表明,MDC标记的自噬空泡不含液相标记物,并且在空间上与内胚小室分离。我们进一步证明,在亚细胞分离程序后,MDC标记的细胞器含有溶酶体酶酸性磷酸酶和组织蛋白酶D的成熟形式。粗糙内质网(TRAM和sec61β)和滑面内质网的膜标记物(细胞色素P450)在相同的组分中未检测到。这些结果表明,MDC在体内条件下作为自噬空泡的选择性荧光标记物积累,在早期和晚期内体中不存在。

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