跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2023年9月18日；28(1):74.
doi:10.1186/s11658-023-00486-1。

S100a9抑制Atg9a转录并参与抑制β诱导的心肌细胞自噬1-肾上腺素受体自身抗体

晓燕志 1, 舒适 1, 杨丽 1, 马明霞 1, 姚林龙 1, 陈丽 1, 海虎浩 2, 刘慧荣 三, 王晓辉 1, 李旺 4
附属公司

S100a9抑制Atg9a转录并参与抑制β诱导的心肌细胞自噬1-肾上腺素受体自身抗体

晓燕志等。 细胞分子生物学实验. .

摘要

背景：自噬抑制引起的心肌细胞死亡是心脏功能障碍的重要原因。深入探讨其机制可能有助于改善心脏功能障碍。在我们之前的研究中，我们发现β1-肾上腺素能受体自身抗体（β1-AAs）诱导心肌自噬减少，导致心肌细胞死亡，从而导致心脏功能障碍。通过基于串联质谱标签（TMT）的定量蛋白质组学，发现主动免疫小鼠心肌组织中与自噬相关的S100a9蛋白显著上调。然而，S100a9在β1-AA通过自噬和具体机制目前尚不清楚。

方法：在本研究中，采用主动免疫法建立了aβ1-采用AA诱导小鼠心功能不全模型，RT-PCR和western blot检测心肌细胞基因和蛋白表达的变化。我们使用siRNA敲低心肌细胞中的S100a9。采用自噬PCR芯片筛选转染S100a9 siRNA和阴性对照siRNA的细胞中差异表达的自噬相关基因，采用细胞质核分离、协同免疫沉淀（co-IP）和免疫荧光检测S100a9-缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的结合。最后，通过尾静脉将AAV9-S100a9-RNAi注射到小鼠体内，以击倒心肌细胞中的S100a9。通过超声检查检测心脏功能。

结果：结果表明1-AAs诱导S100a9表达。PCR阵列显示，S100a9siRNA细胞中的Atg9a发生了显著变化，β1-AAs增加了S100a9和HIF-1α在细胞质中的结合。敲除S100a9可显著改善自噬水平和心脏功能障碍。

结论：我们的研究表明β1-AA增加心肌细胞中S100a9的表达，S100a8与HIF-1α相互作用，阻止HIF-1β正常进入细胞核，从而抑制Atg9a的转录。这导致自噬抑制和心脏功能障碍。

关键词：Atg9a；自噬；HIF-1α；S100a9；β1-AA。

PubMed免责声明

利益冲突声明

提交人声明他们没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
蛋白质组学显示S100a9是心肌自噬流量减少的主要介质。A类本研究中进行的定量蛋白质组学流程图。B类蛋白质组学中蛋白质的主成分分析。C类筛选后数据库中已识别的肽段和蛋白质的数量。D类小鼠心肌组织中蛋白质的火山图。红点表示上调蛋白质，蓝点表示下调蛋白质。E类具有统计学意义的蛋白质和自噬相关蛋白质的文氏图。F类通过western blot分析S100a9的表达水平。G公司用免疫荧光法对小鼠心肌组织切片进行染色，检测S100a9在心肌细胞中的表达。代表性免疫荧光图像显示α-肌动蛋白（红色）、S100a9（绿色）和DAPI（蓝色）。H（H）β1-AA刺激H9c2细胞12、24、36、48小时。我β1-AA刺激H9c2细胞24小时。S100a9用FITC染色（比例尺，50µm）。结果显示为平均值±SEMn个 = 每组6个*第页 < 0.05与对照**第页 < 0.01与对照组。DEPs表示差异表达的蛋白质
图2
图2
S100a9表达上调参与β1-AA诱导的心肌细胞自噬抑制。A类用蛋白质印迹法检测免疫4周的C57BL/6小鼠中LC3和p62蛋白的表达(n个 = 每组6个）。B类β刺激心肌细胞LC3和p62的水平1-免疫印迹法检测AA(n个 = 每组4个）。C类,D类β刺激H9c2细胞S100a9和LC3 mRNA水平1-通过RT-PCR检测S100a9 siRNA或NC siRNA转染后的AA(n个 = 每组6个）。E类β-1-western blot检测转染S100a9 siRNA或NC siRNA后的AAs(n个 = 每组6个）。F类S100a9、LC3和p62的统计图。数据以平均值±SEM表示*第页 < 0.05与对照**第页 < 0.01与对照，#第页 < 0.05与β1-AA组，##第页 < 0.01与β1-AA组
图3
图3
S100a9上调抑制Atg9a转录，从而抑制心肌细胞的自噬。A类心肌细胞中30个自噬相关基因的相对mRNA表达水平。B类转染S100a9 siRNA或NC siRNA后，用RT-PCR检测Atg9a mRNA。C类转染S100a9质粒后用RT-PCR检测Atg9a mRNA。D类western blot检测Atg9a蛋白表达。E类β-1-转染S100a9 siRNA或NC siRNA后的AAs通过RT-PCR检测。F类Western blot分析测定β-1-用S100a9 siRNA或NC siRNA转染后的AA。G公司用RT-PCR检测转染S100a9质粒和Atg9a质粒的心肌细胞中LC3的表达水平。H（H）western blot检测转染S100a9质粒和Atg9a质粒的H9c2细胞中LC3和p62蛋白的表达。β刺激心肌细胞1-24小时AAs。数据以平均值±SEM表示n个 = 每组6个*第页 < 0.05与对照**第页 < 0.01与对照组相比。E类和F类 #第页 < 0.05相对于β1-AA组，##第页 < 0.01与β1-AA组。G公司和H（H） #第页 < 0.05 vs.S100a9过度表达组，##第页 < 0.01 vs.S100a9过表达组
图4
图4
β1-AA诱导的HIF-1α上调并不促进Atg9a的转录。A类JASPAR分析(网址：http://jaspar.genereg.net/)揭示了HIF-1α在Atg9a启动子序列上的识别位点。B类将Atg9a启动子序列质粒和HIF-1α质粒转染H9c2细胞后检测萤光素酶活性。C类采用RT-PCR检测Atg9a mRNA水平。D） western blot检测Atg9a蛋白表达。E类Western blot分析测定β1-全细胞裂解液中的AA处理。F类β-1-采用原子吸收法检测Atg9a启动子的荧光素酶活性。数据以平均值±SEM表示n个 = 每组6个*第页 < 0.05与对照**第页 < 0.01与对照，以及#第页 < 0.05 vs.Luc-Atg9a+HIF-1α组
图5
图5
S100a9和HIF-1α的结合阻止HIF-1β进入细胞核。A类,B类免疫沉淀显示β-1-24小时AAs。C类免疫荧光检测HIF-1α在β1-通过免疫荧光给药24小时。白色箭头表示细胞核中的HIF-1α蛋白。黄色箭头表示HIF-1α蛋白和S100a9的细胞质共同定位。D类β孵育心肌细胞中HIF-1α在细胞质和细胞核中的分布1-检测到24小时的AA。数据以平均值±SEM表示n个 = 每组6个*第页 < 0.05与对照组相比**第页 < 0.01与对照
图6
图6
AAV9-S100a9-RNAi改良β1-AA诱导小鼠心脏功能障碍和心肌自噬流量减少。A类心肌冰冻切片中病毒富集的荧光检测。B类Western blot分析测定AAV9-Vector-RNAi组和AAV9-S100a9-RNAi组心肌组织中S100a9的水平。C类免疫小鼠的M型超声心动图。D类使用小动物超声检测EF%、FS%、LVIDd、LVID、IVSd和IVS(n个 = 每组8个）。E类Western blot分析用于测定S100a9、HIF-1α、Atg9a、LC3和p62的水平(n个 = 每组6个）。F类心肌组织中S100a9、HIF-1α、Atg9a、LC3和p62表达水平的统计图。数据表示为平均值±SEM*第页 < 0.05与对照**第页 < 0.01与对照，以及#第页 < 0.05与β1-AA组，##第页 < 0.01与β1-AA组
图7
图7
显示β的工作模型1-AA增加心肌细胞中S100a9的表达。S100a9和HIF-1α在细胞质中的结合增强导致HIF-1β进入细胞核的数量减少。这抑制了Atg9a的表达，导致心肌自噬流量减少，从而导致心脏功能障碍
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

工具书类

    1. Li Y，Chen B，Yang X，Zhang C，Jiao Y，Li P，等。S100a8/a9信号传导在缺血/再灌注损伤中导致线粒体功能障碍和心肌细胞死亡。循环。2019;140(9):751–764.-公共医学
    1. Savarese G、Stolfo D、Sinagra G、Lund LH。射血分数中等或轻度降低的心力衰竭。Nat Rev Cardiol公司。2022;19(2):100–116.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Corsetti G、Chen-Scarabelly C、Romano C、Pasini E、Dioguardi FS、Onorati F等。心力衰竭患者心肌细胞的自噬和胀亡/坏死增强。2019年医学科学Monit基础研究；25:33–44.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. 陈磊，范芳，吴磊，赵莹。核受体4A家族成员：人类疾病和自噬的介质。细胞分子生物学实验。2020;25(1):48.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. De Meyer GR，De Keulenaer GW，Martinet W.自噬在与衰老相关的心力衰竭中的作用。心脏衰竭修订版2010；15(5):423–430.-公共医学