c-Abl kinase regulates cell proliferation and ionizing radiation-induced G2/M arrest via phosphorylation of FHL2

doi:10.1002/2211-5463.13177

.2021年6月；11(6):1731-1738.

doi:10.1002/2211-5463.13177。 Epub 2021年5月19日。

c-Abl激酶通过FHL2磷酸化调节细胞增殖和电离辐射诱导的G2/M阻滞

王广飞¹, 下羊牛², 海南刘¹, 秦财洞¹, 姚叶宝¹, 狄王², 刘璇¹, 程曹¹

附属公司

PMID： 33932144
预防性维修识别码： PMC8167852号
内政部： 10.1002/2211-5463.13177

c-Abl激酶通过FHL2磷酸化调节细胞增殖和电离辐射诱导的G2/M阻滞

王广飞等。 FEBS开放式生物. 2021年6月.

.2021年6月；11(6):1731-1738.

doi:10.1002/2211-5463.13177。 Epub 2021年5月19日。

作者

王广飞¹, 夏阳牛², 刘海南¹, 秦财洞¹, 姚叶宝¹, 狄王², 刘璇¹, 程曹¹

附属公司

¹中国北京生物技术研究所。
²安徽大学，合肥，中国。

PMID： 33932144
预防性维修识别码： PMC8167852号
内政部： 10.1002/2211-5463.13177

摘要

非受体酪氨酸激酶c-Abl通过磷酸化转录因子或辅因子参与多种细胞过程。c-Abl结合并磷酸化四个半LIM-only蛋白2（FHL2），但磷酸化位点的身份及其对细胞周期调节的贡献尚不清楚。在本研究中，我们通过质谱和酪氨酸对苯丙氨酸（Y→F）突变分析证明c-Abl在Y97、Y176、Y217和Y236高度磷酸化FHL2。表达野生型（WT）FHL2的细胞增殖受到抑制，但不表达磷酸化缺陷突变型FHL2（4YF）的细胞增殖受抑制。此外，FHL2有助于电离辐射诱导的G2/M细胞周期阻滞。FHL2 WT而非FHL2（4YF）通过引起IR诱导的G2/M阻滞，挽救了FHL2缺失细胞中的FHL2功能。这些结果表明，c-Abl通过磷酸化FHL2调节细胞周期进程。

关键词：FHL2；G2/M期阻滞；c-Abl；细胞增殖；磷酸化。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
鉴定c-Abl介导的FHL2上的磷酸化位点。（A）将从Flag‐FHL2或Flag载体转染的HEK293T细胞制备的免疫沉淀物与活性c-Abl蛋白在30°c下孵育30分钟。反应产物通过SDS/PAGE进行解析并进行免疫印迹。（B）将HEK293T细胞与Flag‐FHL2和Myc‐c‐Abl共转染，并通过SDS/PAGE分离抗Flag免疫沉淀物。凝胶用考马斯亮蓝（CBB）染色，切除含有Flag‐FHL2的条带，胰蛋白酶消化，并进行LC-MS/MS分析。HC：重链；LC：轻链。*：未知蛋白质。C–G类。具有磷酸化酪氨酸残基Y（p）的肽的质谱。肽序列显示在面板顶部，离子得分和期望值显示在面板中。

图2
c-Abl磷酸化FHL2。（A） HEK293T细胞与表达Myc‐Abl和Flag‐FHL2或FlagFHL突变体的质粒共转染。使用抗pTyr或抗Flag抗体通过免疫印迹法分析抗Flug免疫沉淀物（左）。对Flag‐FHL2和突变体的相对pTyr水平进行量化和绘制（右）。数值表示为平均值±SD。（B）用表达Myc‐Abl WT/（K290R）和Flag‐FHL2 WT/（4YF）的质粒共同转染HEK293T细胞。使用抗pTyr、抗Flag和抗Myc抗体进行免疫印迹分析，以分析抗标志免疫沉淀物。

图3
细胞增殖受c-Abl介导的FHL2磷酸化调节。（A）使用CRISPR‐Cas9策略建立的FHL2‐敲除MCF‐7细胞克隆通过使用抗FHL2抗体的免疫印迹进行确认。（B）用所示质粒转染MCF‐7 KO细胞，并通过免疫印迹检测其表达。（C）将转染有所示质粒的MCF‐7 KO细胞与EdU孵育12 h或不孵育，然后通过流式细胞仪分析EdU掺入率。每个面板的两个峰值表示非EdU并入和EdU并入细胞（R1峰值表示非EdU并入细胞数量；R2峰值表示EdU并入的细胞数量），每个面板显示EdU并入比率。图的顶部显示了包含或不包含EdU的细胞的代表性图像。BF：亮场。试验重复三次。（D）显示了三个独立实验中EdU掺入的平均比率。数值表示为平均值±SD。使用Student’st吨‐测试*第页 < 0.05, **第页 < 0.01.

图4
c‐Abl介导的FHL2磷酸化调节FHL2参与的G2/M阻滞，以应对辐射。（A）用10 Gyγ射线照射MCF‐7 WT或FHL2 KO细胞，并用流式细胞仪分析细胞周期。一式三份实验中G2/M期细胞百分比的平均值显示在每个面板的顶部。（B）免疫印迹法检测转染或未转染Flag-FHL2或Flag-FHL2（4YF）质粒的WT MCF-7和KO细胞中的FHL2。（C）用Flag-FHL2或Flag-FHL2（4YF）质粒转染MCF‐7 KO细胞，然后按照A.D.中的描述进行处理和分析。IR后24 h A和C的G2/M期细胞比率显示为平均值±SD。使用Student’st吨‐测试*第页 < 0.05.

请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

四个半LIM结构域蛋白2（FHL2）的缺乏会加重小鼠的肝纤维化。
Huss S、Stellmacher C、Goltz D、Khlistunova I、Adam AC、Trebicka J、Kirfel J、Büttner R、Weikirchen R。 Huss S等人。 BMC胃肠道。2013年1月14日；13:8. doi:10.1186/1471-230X-13-8。 BMC胃肠道。2013 PMID：23311569 免费PMC文章。
四-半乳LIM-结构域蛋白2（FHL2）缺乏加重了胆汁淤积性肝损伤。
Sommer J、Dorn C、Gäbele E、Bataille F、Freese K、Seitz T、Thasler WE、Büttner R、Weikirchen R、Bosserhoff A、Hellerbrand C。 Sommer J等人。细胞。2020年1月19日；9(1):248. doi:10.3390/cells9010248。细胞。2020 PMID：31963815 免费PMC文章。
四个半LIM结构域2（FHL2）通过控制AKT1转录调节卵巢颗粒细胞肿瘤的进展。
Hua G、He C、Lv X、Fan L、Wang C、Remmenga SW、Rodabaugh KJ、Yang L、Lele SM、Yang P、Karpf AR、Davis JS、Wang C。 Hua G等人。细胞死亡疾病。2016年7月14日；7（7）：e2297。doi:10.1038/cddis.2016.207。细胞死亡疾病。2016 PMID：27415427 免费PMC文章。
LIM-only蛋白FHL2的蛋白质-蛋白质相互作用和心血管疾病相关相互作用的功能意义。
Tran MK、Kurakula K、Koenis DS、de Vries CJ。 Tran MK等人。 Biochim生物物理学报。2016年2月；1863(2):219-28. doi:10.1016/j.bbamcr.2015.11.002。Epub 2015年11月6日。 Biochim生物物理学报。2016 PMID：26548523 审查。
FHL2：一种致癌、瘤-瘤相互作用和治疗反应的支架蛋白。
Verset L、Feys L、Trépant AL、De Wever O、Demetter P。 Verset L等人。组织病理学。2016年5月；31(5):469-78. doi:10.14670/HH-11-709。Epub 2015年12月17日。组织病理学。2016 PMID：26676939 审查。

查看所有类似文章

引用人

FHL2基因对山羊皮下和肌内脂肪细胞发育的影响。
李安，王毅，王毅，熊毅，李毅，刘伟，朱军，林毅。 Li A等人。 BMC基因组学。2024年9月11日；25(1):850. doi:10.1186/s12864-024-10755-8。 BMC基因组学。2024 PMID：39261767 免费PMC文章。
FHL2作为机械环境中细胞功能的机械传感器的作用。
Fujimoto Y，Nakazawa N。 Fujimoto Y等人。前细胞发育生物学。2024年7月26日；12:1431690. doi:10.3389/fcell.2024.1431690。eCollection 2024年。前细胞发育生物学。2024 PMID：39129787 免费PMC文章。审查。

工具书类

1. Ben‐Neriah Y、Daley GQ、Mes‐Masson AM、Witte ON和Baltimore D（1986）慢性粒细胞白血病特异性P210蛋白是bcr/abl杂交基因的产物。《科学》233212-214。-公共医学
1. Sawyers CL、McLaughlin J、Goga A、Havlik M和Witte O（1994）。核酪氨酸激酶c‐Abl负调控细胞生长。单元格77，121–131。-公共医学
1. Mattoni T、Jackson PK、Bchini‐Hooft van Huijsduijnen O和Picard D（1995）酪氨酸激酶Abl引起的细胞周期阻滞涉及到早期有丝分裂反应的改变。癌基因10，1325–1333。-公共医学
1. Yuan ZM，Huang Y，Wang Y，Sawyers C，Weichselbaum R，Kharbanda S和Kufe D（1996）C-Abl酪氨酸激酶在DNA损伤生长抑制反应中的作用。《自然》382，272–274。-公共医学
1. Kharbanda S、Yuan ZM、Weichselbaum R和Kufe D（1998），DNA损伤反应中通过c-Abl活化确定细胞命运。癌基因17，3309–3318。-公共医学

出版物类型

行动

MeSH术语

行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动

物质

行动
行动
行动
行动
行动

LinkOut-更多资源

[1] Ben‐Neriah Y、Daley GQ、Mes‐Masson AM、Witte ON和Baltimore D（1986）慢性粒细胞白血病特异性P210蛋白是bcr/abl杂交基因的产物。《科学》233212-214。-公共医学

[2] Ben‐Neriah Y、Daley GQ、Mes‐Masson AM、Witte ON和Baltimore D（1986）慢性粒细胞白血病特异性P210蛋白是bcr/abl杂交基因的产物。《科学》233212-214。-公共医学

[3] Sawyers CL、McLaughlin J、Goga A、Havlik M和Witte O（1994）。核酪氨酸激酶c‐Abl负调控细胞生长。单元格77，121–131。-公共医学

[4] Sawyers CL、McLaughlin J、Goga A、Havlik M和Witte O（1994）。核酪氨酸激酶c‐Abl负调控细胞生长。单元格77，121–131。-公共医学

[5] Mattoni T、Jackson PK、Bchini‐Hooft van Huijsduijnen O和Picard D（1995）酪氨酸激酶Abl引起的细胞周期阻滞涉及到早期有丝分裂反应的改变。癌基因10，1325–1333。-公共医学

[6] Mattoni T、Jackson PK、Bchini‐Hooft van Huijsduijnen O和Picard D（1995）酪氨酸激酶Abl引起的细胞周期阻滞涉及到早期有丝分裂反应的改变。癌基因10，1325–1333。-公共医学

[7] Yuan ZM，Huang Y，Wang Y，Sawyers C，Weichselbaum R，Kharbanda S和Kufe D（1996）C-Abl酪氨酸激酶在DNA损伤生长抑制反应中的作用。《自然》382，272–274。-公共医学

[8] Yuan ZM，Huang Y，Wang Y，Sawyers C，Weichselbaum R，Kharbanda S和Kufe D（1996）C-Abl酪氨酸激酶在DNA损伤生长抑制反应中的作用。《自然》382，272–274。-公共医学

[9] Kharbanda S、Yuan ZM、Weichselbaum R和Kufe D（1998），DNA损伤反应中通过c-Abl活化确定细胞命运。癌基因17，3309–3318。-公共医学

[10] Kharbanda S、Yuan ZM、Weichselbaum R和Kufe D（1998），DNA损伤反应中通过c-Abl活化确定细胞命运。癌基因17，3309–3318。-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

您的RSS源

c-Abl激酶通过FHL2磷酸化调节细胞增殖和电离辐射诱导的G2/M阻滞

附属公司

c-Abl激酶通过FHL2磷酸化调节细胞增殖和电离辐射诱导的G2/M阻滞

作者

附属公司

摘要

利益冲突声明

数字

类似文章

引用人

工具书类

出版物类型

MeSH术语

物质

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

分子生物学数据库

研究材料

其他

摘要

利益冲突声明

数字

类似文章

引用人

工具书类

出版物类型

MeSH术语

物质

相关信息

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

分子生物学数据库

研究材料

其他