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.2015年10月15日5:5:15403。
doi:10.1038/srep15403。

HIV基质蛋白p17通过调节核受体转录瘤诱导肝脏脂质积聚

芭芭拉·伦加 1, 丹妮拉·弗朗西西 2, 阿德里亚娜·卡里诺 1, 西尔维娅·马奇安诺 1, 萨布丽娜·西普里亚尼 2, 玛丽亚·奇亚拉·蒙蒂 三, 拉切尔·德尔·索尔多 4, Elisabetta Schiaroli女士 2, Eleonora Distrutti公司 5, 弗朗科·巴尔德利 2, 斯特凡诺·菲奥鲁奇 1
附属公司

HIV基质蛋白p17通过调节核受体转录瘤诱导肝脏脂质积聚

芭芭拉·伦加等。 科学代表. .

摘要

肝病是艾滋病毒感染者第二常见的死亡原因。艾滋病毒感染本身如何影响肝病进展尚不清楚。在这里，我们研究了用HIV基质蛋白p17刺激HepG2细胞后49个核激素受体（NRs）和35个转录协同调节因子的mRNA表达。该病毒蛋白调节一些NRs的mRNA表达，其中LXRα及其转录共激活物MED1在mRNA水平高度诱导。对p17下游细胞内途径的解剖表明，p17介导的Jak/STAT信号的激活与LXR的启动子依赖性激活有关。用HIV p17治疗HepG2和原代肝细胞会导致LXR靶基因（SREBP1c和FAS）的转录激活和脂质积聚。这些效应在预先培养的HepG2细胞和预先培养的天然LXR拮抗剂Gymnetrogenin HepG2-细胞中消失，这些细胞是用接种了p17肽的HIV阳性者的血清培养的。这些结果表明，HIV p17影响NRs及其相关信号转导，从而促进HIV感染患者的肝脏疾病进展。

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利益冲突声明

作者声明没有竞争性的经济利益。

数字

图1
图1。HIV p17调节HepG2细胞中的NRs和转录辅助调节因子。
(一)syndecan-2（Syn-2）、CXCR2和Tubulin的免疫印迹。(B类)syn-2和CXCR2的qRT-PCR。数据表示4个实验的平均值。数值相对于GAPDH mRNA进行标准化，并相对于未处理细胞的数值进行表达，这些数值被任意设置为1*P、 0.05与未经处理的细胞。(C、 D类)用p17（10μg/ml）刺激HepG2细胞的核受体和转录协同调节剂的微阵列分析。在检测的84个基因中，有9个基因上调1.5倍或更高（LXRα、MED1、DDX5、TR2、TR3、RARα、ESR1、NCOA1、NRIP1），而6个基因下调1.5倍或更多（PPARγ、KAT5、BRD8、PSMC5、HDAC7、ARNT）。(C类)聚类图和(D类)散点图。(E类)通过RT-PCR验证微阵列结果，显示LXRα、MED1、ESR1、DDX5、PPARγ、BRD8和KAT5的相对mRNA表达。数值相对于GAPDH mRNA进行标准化，并相对于未处理细胞的数值进行表达，这些数值被任意设置为1*P、 0.05与未经处理的细胞。
图2
图2。体外p17处理HepG2细胞中NRs靶基因的药理学评价。
(一)实时PCR分析LXR和LXR靶基因ABCA1、SCD-1、FAS、SREBP1c和CH25H的mRNA表达。(B类)ESR1和ESR1靶基因PDK4、PTGDS和PEPCK的mRNA表达的实时PCR分析。(C类)PPARγ和PPARγ靶基因FABP1 mRNA表达的实时PCR分析。数值相对于GAPDH mRNA进行标准化，并相对于未处理细胞的数值进行表达，这些数值被任意设置为1*P、 0.05与未经处理的细胞。
图3
图3。用p17处理HepG2七天会增加细胞内25-羟基胆固醇的含量并诱导脂质积聚。
25-H-胆固醇的细胞内含量(一)和总胆固醇(B类)在用递增剂量的p17（从2μg/ml到10μg/ml）刺激HepG2细胞7天后测量。(C类)用10μg/ml p17处理HepG2细胞7天，观察其脂质积聚。正常或p17处理细胞的代表性显微照片（40X）。(D类)500 nm处的油红O定量。
图4
图4。HIV基质蛋白p17激活STAT蛋白并将其招募到LXR启动子。
(一)用10μg/ml p17处理HepG2细胞5、15、30和60分钟后STAT1和STAT3磷酸化状态的时间进程。使用Image J软件进行带密度测定。(B类)在未经处理或用10μg/ml p17预处理18小时的HepG2细胞中进行染色质免疫沉淀分析。如材料和方法所述，对LXRα启动子进行实时PCR。
图5
图5。抑制STAT信号阻断p17的成脂作用。
HepG2细胞与STAT1抑制剂Fludarabine（5μM）或STAT3抑制剂5,15DPP（5μM）预孵育2小时，然后用10μg/ml p17刺激18小时。LXRα的qRT-PCR(一)、SREBP1c(B类)和FAS(C类). 数值相对于GAPDH mRNA进行标准化，并相对于未处理细胞的数值进行表达，这些数值被任意设置为1*与未经处理的细胞相比，P<0.05。#与p17刺激细胞相比，P<0.05。
图6
图6。用p17刺激原代肝细胞激活LXR信号通路。
(A–C)用两种剂量的p17（2和10μg/ml）刺激人原代肝细胞。刺激后LXRα的相对mRNA表达(一)，SREBP1c(B类)和FAS(C类)通过RT-PCR进行评估。(D类)人肝细胞p17的免疫组织化学染色显示该病毒蛋白的质膜定位。放大40倍。(E–G公司)用两种剂量的p17（2和10μg/ml）刺激小鼠原代肝细胞。刺激后LXRα的相对mRNA表达(一)、SREBP1c(B类)和FAS(C类)通过RT-PCR进行评估。数值相对于GAPDH mRNA进行标准化，并相对于未处理细胞的数值进行表达，这些数值被任意设置为1*与未经处理的细胞相比，P<0.05。
图7
图7。p17的成脂作用被AT20肽或LXR拮抗剂中和。
(A–C)将血清饥饿的HepG2细胞与接种了重组p17肽（在培养基中稀释为1:100）的HIV患者的血清预先孵育2小时，然后用10μg/ml p17进行额外治疗18小时。LXRα的qRT-PCR(一)、SREBP1c(B类)和FAS(C类). (D–F型)将血清饥饿的HepG2细胞与10μM LXR拮抗剂Gymnestrogen预孵育2小时，然后用10μg/ml p17额外处理18小时。LXRα的qRT-PCR(D类)、SREBP1c(E类)和FAS(F类). 数值相对于GAPDH mRNA进行标准化，并相对于未处理细胞的数值进行表达，这些数值被任意设置为1*与未经处理的细胞相比，P<0.05。#与p17刺激细胞相比，P<0.05。健身房：健身房素。
图8
图8。在感染HIV的NASH患者的肝活检中，LXR和SREBP1c的表达发生改变。
肝脏活检(一)健康捐赠者(B类)HIV感染患者伴轻度脂肪变性和(C类)对HIV感染的中重度肝脂肪变性患者进行连续切片，并用LXRα和SREBP1c抗体进行染色；（放大200倍）。
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