跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2007年7月2日；178(1):23-30.
doi:10.1083/jcb.200701120。

p53的缺失促进RhoA-ROCK依赖性细胞在3D基质中的迁移和侵袭

吉尔斯·加迪亚 1, 马里恩·德·托莱多, 克里斯蒂尔·安圭尔, 皮埃尔·罗斯
附属公司

p53缺失促进RhoA-ROCK依赖性细胞在3D基质中迁移和侵袭

吉尔斯·加迪亚等。 J细胞生物学. .

摘要

除了在控制细胞周期进展中的作用外，肿瘤抑制蛋白p53还可以影响其他细胞功能，如细胞迁移。在这项研究中，我们发现在三维基质中培养的小鼠胚胎成纤维细胞中p53缺失导致从细长纺锤形形态转变为与高度动态膜泡相关的显著球形和柔性形态。这些圆形的运动细胞表现出变形虫样的运动，并且具有显著增加的侵袭性。形态转变需要RhoA-ROCK（Rho-associated coil containing protein kinase，RhoE）途径，并被RhoE阻止。在黑色素瘤A375P癌细胞中观察到类似的p53介导的转变。我们的数据表明，肿瘤中p53的基因改变足以促进运动和侵袭，从而促进转移。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
圆形起泡运动是由p53缺乏引起的。（A） MEF和p53的时间推移分析−/−MEF在Matrigel内移动。wt MEF（视频1）和p53附带视频中的静态DIC延时图像−/−MEF（视频2，网址：http://www.jcb.org/cgi/content/full/jcb.200701120/DC1). 将细胞接种到Matrigel的厚层中，并建立血清生长因子的梯度。框架显示了指定时间的细胞迁移。箭头指示单元移动的方向。圆点表示视频开始时单元格的初始状态。（B） Matrigel中不同细胞运动模式的时间推移分析。转染GFP标记质粒的细胞的DIC图像（以便识别以绿色显示的转染细胞）在MEF中表达p53 H273（视频3中的静态图像），在p53中表达p53-wt−/−MEF（视频4中的静止图像），或p53中的p53 H273−/−MEF作为控制（右）。如A.（C）p53调节整合素β1和ezrin在圆形迁移细胞中的亚细胞分布。MEF和p53的代表性整合素β1和ezrin荧光染色−/−MEF转染p53 wt、p53 H273、siRNA p53或质粒EGFP。插图显示F-actin（红色）、GFP（绿色）和ezrin或整合素β1（蓝色）的共视化，如图所示。将细胞接种在Matrigel中，并建立血清生长因子梯度。箭头显示Matrigel中单元格的移动方向。棒材，10μm。
图2。
图2。
p53调节RhoA激活。（A） wt MEF和p53中的GTPase活性−/−MEF公司。在电镀24小时后对细胞进行裂解，并测定GTP-结合RhoA、Rac1和Cdc42的水平。（B） 转染MEF和p53的RhoA活性−/−MEF公司。检测转染p53 wt和p53 H273的细胞的RhoA活性。（A和B）这些值是三个独立实验的平均值±SD（误差条）。wt MEF和p53的（C–F）代表性F-actin和RhoA荧光染色−/−未经处理的MEF（C），用TAT-C3（F）处理的MEFs，或用表达p53 wt（D）或p53 H273（E）的质粒转染的MEF。面板上显示了含类固醇的F-actin（红色）和RhoA标签（绿色）。箭头指向起泡结构。棒材，10μm。
图3。
图3。
p53缺陷导致的圆形气泡形态需要ROCK活性。（A） 视频5中的静态DIC延时图像（请访问http://www.jcb.org/cgi/content/full/jcb.200701120/DC1)p53的表达−/−使用Y27632处理的MEF。框架显示p53的扩散−/−MEF在指定时间。（B） DIC图像显示，wt MEF与GFP共转染，以识别转染细胞（插入物）和ROCK-Δ1（视频6中的静态图像；图S1）或仅以GFP作为对照。（C） wt MEF和p53的代表性F-actin和RhoA荧光染色−/−用Y27632或H1152处理的MEFs。（D） Matrigel中不同细胞运动模式的时间推移分析。用ROCK-Δ1（视频7中的静态DIC图像）或GFP单独转染MEF的静态DIC-图像作为对照。（底部）p53的静态DIC图像−/−用Y27632或H1152处理MEF并转染p53 H273（分别来自视频8和视频9）。用GFP观察表达ROCK-Δ1或p53 H273的转染细胞。如图1所示，在Matrigel内对细胞进行电镀。棒材，10μm。
图4。
图4。
p53通过RhoA–ROCK途径控制细胞侵袭。（A） wt-MEF和p53的基质侵袭−/−MEF公司。用TAT-C3、Y27632、H1152或蛋白酶抑制剂处理细胞，或用编码p53 wt、p53 H273、siRNA p53、ROCK-Δ1或RhoA-V14的质粒转染细胞，如图所示。如材料和方法所述，分析了基质侵入的变化。对每个数据点的GFP阳性细胞进行评分。（B） p53的代表性RhoE和肌动蛋白荧光染色−/−转染GFP-RhoE的MEF。（C） p53的DIC图像−/−转染GFP标记RhoE的MEF（视频10中的静态图像，可在http://www.jcb.org/cgi/content/full/jcb.200701120/DC1). 如图1 A所示，将细胞接种在Matrigel中。（D）p53的Matrigel侵袭性−/−MEF单独转染载体（对照）或转染RhoE。按照A进行定量。（A和D）值是三个独立实验的平均值±SD（误差条）。棒材，10μm。
图5。
图5。
A375黑色素瘤细胞侵袭性受p53活性调节。（A） 单独表达质粒EGFP或p53 H273的A375P细胞的共焦图像。细胞在Matrigel中培养，并建立血清生长因子梯度以观察迁移模式。用GFP观察转染细胞，用荧光WGA（小麦胚芽凝集素；红色）标记质膜。（B） A375P细胞中p21的诱导。A375P细胞未经处理或用足叶乙甙处理。通过SDS-PAGE分析总蛋白裂解物，然后使用p21抗体进行免疫印迹分析。用抗α-微管蛋白抗体进行正常化。（C） 转染A375P的RhoA活性。如图2所示，比较表达GFP标记的p53 H273或质粒EGFP（对照）的细胞的GTP-RhoA水平。该图像代表了三个独立的实验。这些值为平均值±SD（误差线）。（D） 如图所示，用TAT-C3、Y27632或H1152处理的表达p53 wt或p53 H273的A375P的3D基质凝胶基质的侵袭性。结果如图4所示。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Amano，M.、K.Chihara、K.Kimura、Y.Fukata、N.Nakamura、Y.Matsuura和K.Kaibuchi。肌动蛋白应力纤维的形成和Rho激酶增强的局灶性粘连。科学。275:1308–1311.-公共医学
    1. Bernards，R.和R.A.Weinberg，2002年。一个渐进式谜题。自然。418:823.-公共医学
    1. Blagosklonny，M.V.2002年。P53：抗癌药物的普遍靶点。国际癌症杂志。98:161–166.-公共医学
    1. Clark，E.A.、T.R.Golub、E.S.Lander和R.O.Hynes。2000.转移的基因组分析揭示了RhoC的重要作用。自然。406:532–535.-公共医学
    1. 科尔曼、M.L.、E.A.沙海、M.Yeo、M.Bosch、A.Dewar和M.F.奥尔森。细胞凋亡过程中的膜起泡是由半胱氨酸蛋白酶介导的ROCK I.Nat.Cell Biol激活所致。3:339–345.-公共医学

出版物类型

MeSH术语