一种新型双过氧化物酶体——单胞菌素的长期疗效增殖激活受体γ/核因子-红细胞生成素2相关因子-2实验性脑出血中的激动剂

动物

本研究中的所有程序均经动物利用和管理部门批准山西医科大学委员会，并遵守国家研究院《实验动物护理和使用卫生指南》。雄性SD大鼠（12周龄，体重275g±25g，山西医学院动物实验中心大学）免费获得食物和水。

非物质文化遗产模型

立体定向注射细菌胶原酶诱导脑出血的方法（0.5 U IV型溶于2μl生理盐水，Sigma-Aldrich，St.Louis，MO，USA）基底神经节按我们之前的出版物所述进行。²仅对假手术大鼠进行针刺。生命体征在整个手术和恢复期进行监测。神经功能测试在ICH诱导后的预选时间点进行（7、14和28天）。神经功能测试后，动物被安乐死，大脑收集组织以测量血肿体积、血红蛋白水平、，铁染色、铁含量、左右半球重量，以及脑萎缩。

实验设计

共使用72只雄性SD大鼠进行实验。添加动物的条件是他们在研究结束前去世。在以下方面没有显著差异不同实验组之间的死亡率。72只大鼠平均分为三组：假手术组、ICH+溶媒（无菌生理盐水）组、，和ICH+单胞菌素（10 mg/kg）。每组大鼠进一步分组根据评估的不同时间点平均分为三个亚组然后安乐死（7、14或28天）。Monascin每天服用两次ICH后6小时灌胃14天。长期神经功能试验（改良Garcia量表、T迷宫和转子杆试验）在ICH后14天和28天；莫里斯水迷宫测试在23ICH诱导后28天。血红蛋白水平、铁含量和体重分别于术后7、14和28天测量左右大脑半球的脑出血。

神经行为测试

使用改良的Garcia对动物进行神经功能评估天平、T迷宫测试和转子杆测试。神经行为测试由以下人员进行评估：一名独立研究人员对治疗分配一无所知。改良加西亚鳞片和莫里斯水迷宫已在前面描述过。^2,17重复进行每个测试三次，取平均分。

T迷宫测试

将大鼠放置在T迷宫的启动盒中，如图所示图1和允许最后从一个小盘中消耗2.5毫升25%w/v蔗糖溶液选择的小巷。每次试验开始时，将大鼠置于头部首先通过启动箱的入口门，以便它可以自由进入要么选择小巷。选择准确性和持续时间由以下人员记录老鼠进入了一个选择舱。无论选择无论是正确的还是不正确的，老鼠都被移走并放在家里适当延迟间隔的cage。¹⁸每只大鼠重复试验六次。

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图1。

T型迷宫由两侧的灰色木制启动盒组成在一个木制的选择室旁边。左边的隔间漆成了白色右边是黑色的。透明塑料制成的单向门允许进入选择室并阻止回溯。所有房间的盖子都是由透明塑料和地板制成的五金布。

水迷宫试验

进行Morris水迷宫测试以评估治疗效果ICH后的空间记忆和学习能力。本试验是作为如前所述。¹⁷在连续两天适应后，大鼠从25到ICH后28天。

血红蛋白测定

按照上述步骤执行。¹⁷将Drabkin试剂添加到0.1 ml上清液等分液中，并允许室温下休息15分钟，避光。这种反应将血红蛋白转化为氰甲基血红蛋白，其吸收峰位于540 nm，然后可以通过测量光学溶液在≈550nm波长下的密度（OD）。测量并记录外径用分光光度计在540nm处。这些程序产生了线性灌注脑中血红蛋白浓度测量值之间的关系标准吸光度曲线上的组织和加血体积。为了更好显示与假手术相比的血红蛋白水平（血肿为零），数据显示为比率（假手术的预设值为1）。¹⁷

铁染色和铁含量

如前所述，对铁染色和铁含量进行评估。^2,17大脑切片用蒸馏水冲洗并浸入Perls的溶液中20分钟。用蒸馏水冲洗所有载玻片，然后用核固红染料5分钟。如前所述测定铁含量根据铁含量测定方案的说明执行。¹⁷使用Bio-Rad iMarkTM微孔板吸光度计算铁值读者。样品的总铁含量是从标准中获得的曲线。

大脑重量分析

脑切片用苏木精-伊红染色试剂盒染色。这些老鼠实施安乐死，然后切除大脑。小脑切除后脑干，大脑沿着中线被分成两半记录左右半球。The difference in weight between the计算左右半球。

PPAR-γ/Nrf2激动剂monascin改善长期神经功能缺损遵循ICH

ICH+载体动物在在每个时间点进行神经功能测试，T迷宫测试除外持续时间(第页 < 0.05,补充图A–G). 与车辆相比，PPAR-γ/Nrf2激动剂monascin显著改善了神经功能缺损14岁时采用改良Garcia量表、T迷宫测试和转子杆测试进行评估ICH后28天(第页 < 0.05,补充图A–G).

Morris水迷宫测试结果表明，单胞菌素改善了空间ICH后记忆(第页 < 0.05,图2a–d日). Monascin治疗的ICH大鼠显示与机动动物相比，行程更短(图2a). 在的第一天测试表明，所有大鼠到达平台的潜伏期相似。后续测试表明，单胞菌素治疗的ICH动物逃逸的潜伏期较短平台第三天和第四天的水迷宫实验比较与载具动物(图2亿). Monascin处理的大鼠游泳距离更短在测试的第二天和第四天逃到隐藏的平台上之前(图2c). 在在试验的第六天，单核甘酸处理的大鼠进行了探针试验与载具动物相比，在目标象限内的数量明显更多(图2d). 此外，假手术组与假手术组的神经测试得分无显著差异和单胞菌素治疗的ICH大鼠，但28天后改良的Garcia鳞片除外外科手术(补充图A–G和图2).

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图2。

各组于术后25～28天进行Morris水迷宫试验非物质文化遗产(n个 = 6/组）。（a） 游泳的可视化轨迹和热图。（b） 逃逸到平台的平均延迟。（c）逃上平台前的平均游泳距离。和（d）平均值目标象限内的平台搜索时间。*第页 < 0.05与伪装，#第页 < 0.05与ICH+车辆，双向方差分析，平均值±标准偏差，通过重复测量方差分析。

方差分析；颅内出血；SD、，标准偏差。

PPAR-γ/Nrf2激动剂monascin降低ICH后血肿体积

Monascin-处理的ICH大鼠的血红蛋白水平下降术后7天同侧大脑半球与对照组比较外科手术(第页 < 0.05,图3). 与假手术组相比，在第7天和第14天ICH+载体组，而在术后第7天，红曲霉素治疗的ICH大鼠(第页 < 0.05,图3a,​，b），b条)，没有显著差异在术后14天和28天，假手术组和莫纳西林治疗组之间的ICH；术后28天，三个研究组之间没有发现差异(图3).

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图3。

第7、14和28天的出血切片（a）和血红蛋白水平（b）ICH之后。为了更好地说明血红蛋白水平与假手术（血肿为零），数据显示为比率（预设值假手术值为1）。单向方差分析和Tukey检验已使用*第页 < 0.05与伪装，#第页 < 0.05与ICH+车辆。

方差分析；颅内出血。

脑出血后PPAR-γ/Nrf2激动剂monascin减少铁沉积

Monascin治疗的ICH大鼠同侧大脑铁含量较低术后7天和14天大脑半球与载具组比较(第页 < 0.05,图4). 车辆组展示了与假手术组相比，第7天的铁含量显著增加手术后14天(第页 < 0.05,图4). 没有显著的假手术组和单胞菌素治疗组ICH之间的差异，无差异术后28天在所有组中发现(第页 > 0.05,图4). 结果表明，铁积累已被清除ICH后4周。

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图4。

（a） 第7、14和28天的铁染色和（b）铁含量分析ICH诱导后*第页 < 0.05与沙姆#第页 < 0.05与ICH+车辆，n个 = 6/组，单向方差分析，Tukey多重比较检验，平均值±标准差。

方差分析；颅内出血；SD、，标准偏差。