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使用简单协议和标准实验室设备为3D组织成像设置快速组织清除。
通过增加组织透明度,清除可以使您对较厚的组织切片甚至整个器官进行成像,这最终会从每次实验中产生更多数据。在这里,我们将介绍一些用于组织清除的提示、技术和试剂。
组织清除技术的目的都是使组织或细胞培养物更加透明,以克服其不透明性,从而防止其在显微镜下被可见波长的光穿透。最好是通过几个化学步骤清除组织,而不是通过费力的过程制作组织的薄片,这可能会破坏组织的形态。清除也为3D显微镜提供了选择,可以生成比传统2D方法更能反映生物结构的图像。清洁方法通常依赖于将组织浸泡在不同的溶液中(如有机溶剂或高折射率的水溶液),或可能在用洗涤剂提取组织脂质之前将组织嵌入水凝胶中。不同的方法有一系列的优点和局限性,这取决于您使用的组织类型。
NeuN抗体(ab177487)(绿色)和DAPI(蓝色)组织清除试剂盒(ab243298)清理并染色1毫米厚的冠状切片鼠标大脑。
为什么要清除3D细胞培养
3D细胞培养模型(如类器官、微组织、球体)能够更好地表示体内微环境,因此与传统的2D细胞培养模型相比,具有更好的预测能力。然而,3D细胞培养模型的一个问题是其特性。依赖于三维结构中细胞溶解的分析失去了使这些模型如此有价值的空间特征。尽管3D培养物相对较薄(与整个器官相比),但光在1-3层细胞后仍会减弱,因此大多数成像技术(宽视野、共焦)仅描述这些模型外围的细胞。由于外周细胞接受最高水平的化合物和营养物质,它们并不代表整个模型。与模型中的平均细胞相比,外周细胞对化合物通常表现出非典型反应。虽然光学切片解决了光衰减和散射的问题,但这只提供了关于3D模型的单个平面的信息。使用组织清除方法,可以想象整个3D细胞培养,同时保持结构完整性。
白蛋白抗体(ab207327)(黄色)、CD68抗体(绿色)、波形蛋白抗体(红色)和DAPI(蓝色)与3D细胞培养清除试剂盒(ab243299)清理并染色三维肝细胞培养球体。
组织清洁方法和技巧
有多种清算方法,每种方法都有各自的优点和局限性。要深入了解这些,您可能会发现浏览主要类型的协议和常见问题解答很有用(表1)。
表1。一些主要的组织清除方法及其相关的在线资源。
要进一步了解什么是组织清洁,可用的各种清洁方法,如何最好地利用它,请观看本次网络研讨会,分为四个简短部分(单击播放器上的三行按钮访问不同部分):- 组织清除方法简介-优化组织厚度和抗体浓度- 直接和间接标记、自动荧光和多色标记的注意事项- 清除组织成像
组织清除试剂和试剂盒
最近开发的组织清除方法,如CLARITY、CUBIC、i/3/u/vDISCO等,已被用于生成漂亮的图像,推动了神经科学和发育生物学等领域的边界。为了简化这一过程,我们开发了组织清除试剂盒和试剂,以便您可以快速清除组织或3D细胞培养物。协议简单,使用标准实验室设备,并与免疫染色、荧光蛋白和化学染料兼容。清除是可逆的,因此您可以在3D成像后对组织进行常规H&E或IHC染色。Visikol Inc是数字病理学、3D细胞培养分析和3D组织成像方面的专家,与他们共同开发了组织清除试剂,并开发了维西科尔®HISTO™公司组织清除技术是我们试剂的基础。您可以使用针对必要标记物(如NeuN、GFAP和Iba1)的抗体来验证组织清除试剂盒。我们在1mm小鼠脑切片、神经元球体和肝球体(取决于标记物)上测试这些抗体。-组织清除试剂盒(ab243298)-3D细胞培养清除试剂盒(ab243299)
您还可以访问完整的用于组织清除和标记的Visikol®HISTO™协议,此处.