主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔单克隆[EPR3894]到MLH1 适用于:流式细胞周期(内部)、WB、ICC/IF、IHC-P 敲除已验证 反应:小鼠、大鼠、人类
相关共轭物和制剂
概述
-
产品名称 -
描述 兔单克隆抗体 [EPR3894]至MLH1 -
宿主 兔子 -
特异性 小鼠和大鼠的推荐基于WB结果。 我们不保证小鼠和大鼠的IHC-P。 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 老鼠、老鼠、人 -
免疫原 合成肽。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 -
阳性对照 WB:293、HeLa、Jurkat、A431和SW480细胞裂解物; 人类睾丸、大鼠睾丸和小鼠胸腺组织裂解物。 IHC-P:人类结肠腺癌和扁桃体组织。 ICC/IF:HeLa和SW480细胞。 流式细胞周期(内部):HeLa细胞,Hap1细胞。
-
常规说明
性能
-
形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 长期储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储溶液 pH值:7.20 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:40%甘油、59%PBS、0.05%BSA -
浓度信息加载。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆 单克隆 -
克隆编号 EPR3894型 -
同种型 IgG抗体 -
研究领域
相关产品
-
替代版本 -
兼容的辅助设备 -
同位素控制 -
KO细胞系 -
KO细胞裂解物 -
重组蛋白
应用
靶标
-
功能 与PMS2异二聚体形成MutLα,这是复制后DNA错配修复系统(MMR)的组成部分。 DNA修复由MutSα(MSH2-MSH6)或MutSβ(MSH2/MSH6)与dsDNA错配结合启动,然后MutLα被招募到异源双链。 在RFC和PCNA存在下组装MutL-MutS异源双链三元复合物足以激活PMS2的核酸内切酶活性。 它在失配附近引入单链断裂,从而为核酸外切酶EXO1生成新的进入点,以降解包含失配的链。 DNA甲基化将阻止卵裂,从而确保只有新突变的DNA链才能得到纠正。 MutLα(MLH1-PMS2)与DNA聚合酶III的钳载亚单位发生物理相互作用,这表明它可能在将DNA聚合物III招募到MMR位点中发挥作用。 也与DNA损伤信号有关,这是一个诱导细胞周期停滞的过程,在主要DNA损伤的情况下可能导致细胞凋亡。 与MLH3异二聚体形成MutLγ,在减数分裂中起作用。 -
组织特异性 结肠、淋巴细胞、乳房、肺、脾、睾丸、前列腺、甲状腺、胆囊和心脏。 -
疾病相关 MLH1缺陷是遗传性非息肉病2型结直肠癌(HNPCC2)的病因[MIM:609310]。 多个基因位点的突变可能单独或联合参与HNPCC表型的产生(也称为Lynch综合征)。 大多数临床上公认的HNPCC家族都有MLH1或MSH2基因突变。 HNPCC是一种常染色体显性遗传疾病,与癌症易感性显著增加相关。 其特点是易患早发性结直肠癌(CRC)和胃肠道、泌尿系和女性生殖道的结肠外癌。 据报道,HNPCC是西方世界最常见的遗传性结直肠癌,占所有结肠癌的15%。 HNPCC中的癌起源于称为腺瘤的良性肿瘤性息肉。 临床上,HNPCC通常分为两个亚组。 I型:结肠直肠癌的遗传易感性,发病年龄小,近端结肠癌。 II型:患者患某些组织癌症的风险增加,如子宫、卵巢、乳房、胃、小肠、皮肤和喉部以及结肠。 经典HNPCC的诊断基于阿姆斯特丹标准:3名或3名以上受结直肠癌影响的亲属,其中一人是其他两人的一级亲属; 2代或2代以上受影响; 一个或多个结直肠癌在50岁之前出现; 排除遗传性息肉病综合征。 术语“疑似HNPCC”或“不完整HNPCC“可用于描述不符合或仅部分符合阿姆斯特丹标准,但强烈怀疑结肠癌遗传基础的家庭。 MLH1缺陷是错配修复癌综合征(MMRCS)的原因[MIM:276300]; 也称为Turcot综合征或脑肿瘤-息肉病综合征1(BTPS1)。 MMRCS是一种常染色体显性遗传病,其特征是脑部恶性肿瘤与多发性大肠腺瘤相关。 皮肤特征包括皮脂腺囊肿、色素沉着和咖啡色斑点。 MLH1缺陷是Muir-Torre综合征(MuToS)的病因[MIM:158320]; MuToS是一种罕见的常染色体显性疾病,以皮脂腺肿瘤和内脏恶性肿瘤为特征。 注:MLH1缺陷可能导致小叶原位癌(LCIS),这是一种非侵袭性乳腺肿瘤性疾病。 MLH1缺陷是子宫内膜癌(ENDMC)易感性的一个原因[MIM:608089]。 注:一些表观遗传变化可以通过生殖系原封不动地传递(称为“表观遗传”)。 MLH1基因的1个等位基因在整个体细胞内表观遗传沉默的个体的鉴定提供了这种机制在人类中发生的证据(暗示生殖系事件)。 这些个体受到HNPCC的影响,但MLH1没有可识别的突变,即使它被沉默,这表明表观突变可以表现为遗传病。 -
序列相似性 属于DNA错配修复mutL/hexB家族。 -
细胞定位 核心。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 Entrez基因: 4292 人类 Entrez基因: 17350 鼠标 Entrez基因: 81685 老鼠 Omim公司: 120436 人类 瑞士保护银行: 第40692页 人类 瑞士保护银行: Q9JK91型 鼠标 瑞士保护银行: 第97679页 老鼠 尤尼金: 195364 人类
查看所有内容 -
别名 COCA 2抗体 COCA2抗体 DNA错配修复蛋白Mlh1抗体
查看所有内容
图片
-
流式细胞术重叠直方图显示野生型Hap1(绿线)和MLH1敲除Hap1用ab92312染色(红线)。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。然后将细胞培养在含有10%正常山羊血清的1x PBS中,以阻止非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后再接种抗体(ab92312)(1x 10 6 在22°C下,以0.2μg/ml(1/9835)的浓度在100μl中放置30分钟。 将二级抗体山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®647)预吸附液在1/4000的温度下于22°C孵育30分钟 同位素对照抗体重组兔IgG,单克隆[EPR25A]-同位素对照在与一级抗体相同的浓度和条件下使用(野生型Hap1-黑线,MLH1敲除Hap1-灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 -
所有车道: 1/2000稀释度的抗-MLH1抗体[EPR3894](ab92312) 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: MLH1 CRISPR-Cas9编辑的A549细胞裂解物 3号车道: Jurkat细胞裂解物 车道4: HCT 116细胞裂解物 每条泳道20µg的裂解物/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 84千帕 观察到的波段大小: 85千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:1/2000稀释的抗-MLH1抗体[EPR3894]染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负载控制染色,以红色显示。在Western blot中,ab92312显示与MLH1特异结合。 在野生型A549细胞裂解液中观察到85 kDa的条带,在MLH1 CRISPR-Cas9编辑的细胞系中未观察到该大小的信号 约276105 (CRISPR-Cas9编辑的细胞裂解物 约283566 ). 在CRISPR-Cas9编辑的低于85 kDa的裂解液通道中观察到的条带可能代表MLH1的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成该图像,分析野生型和MLH1 CRISPR-Cas9编辑的A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )以1/2000稀释。 -
通过免疫组织化学、石蜡包埋组织对人类结肠腺癌中未纯化的ab92312进行1/100稀释染色MLH1。 二级抗体建议使用HRP/AP聚合抗体。 在开始IHC染色方案之前,通过压力锅法进行热介导抗原检索。 -
所有车道: 1/10000稀释的抗MH1抗体[EPR3894](ab92312) 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: MLH1敲除HeLa细胞裂解物 3号车道: Jurkat细胞裂解物 车道4: HCT116细胞裂解物 每条泳道20µg的裂解物/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 84千帕 观察到的波段大小: 85千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在90 kDa下观察到ab92312。 红色-加载控制 约8245 在37 kDa时观察到。 ab92312抗-MLH1抗体[EPR3894]显示与野生型HeLa细胞中的MLH1特异性反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 约267223 (敲除细胞裂解物 ab257172号 )已使用。 对野生型和MLH1基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 ab92312和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷对照分别在4°C下以1比10000和1比20000稀释培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗-MLH1抗体[EPR3894](ab92312) 车道1: 野生型HAP1细胞裂解物 车道2: MLH1敲除HAP1细胞裂解物 3号车道: HCT116细胞裂解物 车道4: 293T细胞裂解物 每条泳道20µg的裂解物/蛋白质。 预测的带宽大小: 84千帕 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在88 kDa下观察到ab92312。 红色-装载控制, 约8245 ,在37 kDa下观察到。 未纯化的ab92312被证明在野生型HAP1细胞中识别MLH1以及额外的交叉反应带。 检测MLH1敲除样品时未观察到条带。 对野生型和MLH1基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 ab92312和 约8245 (GAPDH的负荷控制)均稀释1/1000并在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )在成像前在室温下以1/10000稀释1小时的二次抗体。 -
用1:250稀释度(2.9µg/ml)纯化ab92312标记MLH1的人结肠组织切片的免疫组织化学(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)分析。 使用柠檬酸盐(pH 6.0)进行热介导抗原检索,免疫组织探针一步HRP聚合物(即用型)用作二级抗体。 阴性对照:PBS代替一抗。 苏木精用作复染剂 -
SW480(人大肠腺癌上皮细胞)细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析,以1:500稀释度(1.6µg/ml)的纯化ab92312标记MLH1。 细胞固定在4%的多聚甲醛中,并用0.1%的tritonX-100渗透。 用Ab195889抗α-管蛋白抗体[DM1A]-微管标记物(Alexa Fluor®594)1:200(2.5µg/ml)对细胞进行复染。 山羊抗兔IgG(Alexa Fluor®488, 约150077 )以1:1000(2µg/ml)稀释度作为二级抗体。 DAPI核复染。 用PBS代替一级抗体作为二级抗体对照。 -
所有车道: 0.4µg/ml时的抗-MLH1抗体[EPR3894](ab92312)(纯化) 车道1: HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)全细胞裂解物 车道2: HCT116(人结直肠癌上皮细胞)全细胞裂解物,阴性对照 3号车道: 人睾丸裂解物 车道4: 大鼠睾丸裂解物 车道5: 小鼠胸腺裂解物 车道6: 大鼠胸腺裂解物 每条泳道20µg的裂解物/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释1/20000 预测的带宽大小: 84千帕 封闭和稀释缓冲液:5%NFDM/TBST。 根据PMID:23653048,HCT116是MLH1阴性细胞系。 -
重叠直方图显示HeLa细胞被未净化92312染色(红线)。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Tween渗透20分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中孵育细胞,以阻断非特异性蛋白质相互作用,然后在22°C下用抗体(ab92312,1/100稀释)孵育30分钟。 使用的二级抗体是DyLight®488山羊抗兔IgG(H+L)( 约96899 )在22°C下,1/500稀释30分钟。 同型对照抗体(黑线)为兔IgG(单克隆)(1µg/1x10 6 电池)在相同条件下使用。 采集了超过5000个事件。 -
所有车道: 1/10000稀释度下的抗-MLH1抗体[EPR3894](ab92312)(未净化) 车道1: 293细胞裂解物 车道2: HeLa细胞裂解物 3号车道: A431细胞裂解物 车道4: SW480细胞裂解液 每车道10µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 羊抗兔HRP 1/2000稀释 预测的带宽大小: 84千帕 -
通过免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡包埋切片)在人类结肠直肠(顶部)和胃组织(底部)中对MLH1进行未纯化的ab92312染色。 在开始IHC染色方案之前,通过压力锅方法进行热介导抗原检索。 -
通过免疫组织化学、石蜡包埋组织对人类扁桃体中未纯化的ab92312进行1/100稀释染色MLH1。 推荐使用HRP/AP聚合的抗体作为第二抗体。 在开始IHC染色方案之前,通过压力锅法进行热介导抗原检索。 -
HeLa(人宫颈腺癌)的免疫细胞化学/免疫荧光分析用纯化的ab92312标记1/1000的MLH1。 细胞用4%PFA固定,并用0.1%Triton X-100渗透。 Alexa Fluor公司 ® 用488-结合羊抗兔IgG(1/1000)作为二级抗体(Ab150077)。 细胞核用DAPI(蓝色)复染。 对照:仅限PBS -
HeLa细胞中未纯化的ab92312(1/200)染色MLH1(绿色)。 细胞固定在多聚甲醛中,用0.5%Triton X100/PBS渗透,用DAPI复染,以突出细胞核(红色)。 有关更多实验细节,请参阅abreview。 -
在免疫组织化学分析中,使用“ab92312”对组织微阵列进行“抗-MLH1抗体[EPR3894]”染色。该表详细概述了每种测试样本类型的阳性(勾号)和阴性(交叉标记)染色。使用热介导抗原检索对切片进行预处理,使用 约93678 (柠檬酸缓冲液,pH 6.0)。 切片在+4°C下与ab92312孵育过夜。 免疫组织探针一步法HRP聚合物(即用型)用作二级抗体。
数据表及文件
-
SDS下载 -
数据表下载
文献 (83)
吴杰 等。 中国上尿路上皮癌患者的遗传突变。 细胞代表医学 4:100883 (2023). 公共医学:36630951 郝Q 等。 免疫球蛋白基因多样化期间促进插入-缺失事件的DNA修复机制。 科学免疫学 8:eade1167(2023)。 公共医学:36961908 阿莫迪奥V 等。 DNA错配修复异质性肿瘤的遗传和药理调节促进免疫监测。 癌细胞 41:196-209.e5(2023)。 公共医学:36584674 Vornholz L公司 等。 肿瘤细胞中STING信号的合成增强为检查点抑制剂治疗提供了免疫微环境。 科技进步 9:eadd8564(2023年)。 公共医学:36921054 韦斯科特PMK 等。 错配修复缺陷不足以引起肿瘤免疫原性。 自然基因 55:1686-1695 (2023). 公共医学:37709863