概述
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产品名称 -
亲代细胞系 A549型 -
有机体 人类 -
通道编号 <20 -
经测试应用 -
生物安全水平 1 -
常规说明 建议控制: 人野生型A549细胞系( 约275463 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: F-12K+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 三 -1x10个 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为6x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。 不要超过7x10 4 细胞/厘米 2 .
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肺 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 癌 -
性别 男性 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶在双链断裂(DSB)、凋亡和基因毒性应激(如电离紫外线A光(UVA))时激活检查点信号,从而充当DNA损伤传感器。 识别组蛋白变体H2AX/H2AFX双链断裂(DSB)的底物一致序列[ST]-Q。磷酸化酶“Ser-139”,从而调节DNA损伤反应机制。 也在前B细胞等位基因排除中发挥作用,该过程导致单个免疫球蛋白重链等位基因的表达,以增强单个B淋巴细胞上表达的B细胞抗原受体(BCR)的克隆性和单特异性识别。 在一个免疫球蛋白等位基因上的RAG复合体引入DNA断裂后,通过介导第二个等位基因向着丝粒周围异染色质的重新定位,阻止对RAG复合物的接近和第二个等位基因的重组。 还参与信号转导和细胞周期控制。 可能起到抑癌作用。 激活ABL1和SAPK所必需的。 磷酸化物p53/TP53、FANCD2、NFKBIA、BRCA1、CTIP、尼伯林(NBN)、TERF1、RAD9和DCLRE1C。 可能在囊泡和/或蛋白质运输中发挥作用。 可能在T细胞发育、性腺和神经功能中发挥作用。 在复制依赖性组蛋白mRNA降解中发挥作用。 结合DNA末端。 -
美国 发现于胰腺、肾脏、骨骼肌、肝脏、肺、胎盘、大脑、心脏、脾脏、胸腺、睾丸、卵巢、小肠、结肠和白细胞。 -
疾病相关 ATM缺陷是共济失调毛细血管扩张症(AT)的原因[MIM:208900]; 也称为路易斯·巴尔综合征,包括四个互补组:A、C、D和E。这种罕见的隐性疾病的特征是进行性小脑共济失调、结膜和眼球血管扩张、免疫缺陷、生长迟缓和性发育不成熟。 AT患者有很强的癌症倾向; 约30%的患者发生肿瘤,尤其是淋巴瘤和白血病。 受影响个体的细胞对电离辐射的损伤高度敏感,对辐射后DNA合成的抑制具有抵抗力。 注:ATM缺陷导致T细胞急性淋巴细胞白血病(TALL)和T前淋巴细胞白血病(TPLL)。 TPLL的特点是白细胞计数高,以前淋巴细胞为主,脾肿大、淋巴结病、皮肤损伤和浆液性积液明显。 临床病程具有高度侵袭性,对化疗的反应较差,生存时间短。 TPLL在成人和年轻AT患者中均为散发性疾病。 注=ATM缺陷导致B细胞非霍奇金淋巴瘤(BNHL),包括套细胞淋巴瘤(MCL)。 注=ATM缺陷导致B细胞慢性淋巴细胞白血病(BCLL)。 BCLL是老年人最常见的白血病。 其特征是成熟CD5+B淋巴细胞的积聚、淋巴结病、免疫缺陷和骨髓衰竭。 -
序列相似性 属于PI3/PI4-激酶家族。 ATM子家族。 包含1个FAT域。 包含1个FATC域。 包含1个PI3K/PI4K域。 -
结构域 FATC域是与KAT5交互所必需的。 -
翻译后修饰 通过NUAK1/ARK5进行磷酸化。 Ser-367、Ser-1893和Ser-1981的自身磷酸化与DNA损伤介导的激酶激活相关。 DNA损伤时,乙酰化是激活激酶活性、二聚体转化和随后Ser-1981上的自磷酸化所必需的。 KAT5/TIP60体外乙酰化。 -
细胞定位 核心。 细胞质小泡。 主要是核武器。 在与β-适应素相关的内吞小泡中也发现。 -
UniProt提供的信息
应用
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图片
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所有车道: 抗-ATM抗体[EPR20100]-ChIP等级( 2010年2月22日 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: ATM敲除A549细胞裂解物 3号车道: HEK-293细胞裂解物 车道4: U-2 OS细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 350千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗-ATM抗体[EPR20100]-ChIP级染色,稀释度为1/1000,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 2010年2月22日 显示为专门绑定到ATM。 在野生型A549细胞裂解液中观察到350 kDa的条带,而在ATM敲除细胞系ab276095(敲除细胞裂解液 约283834 ). 为了生成此图像,分析了野生型和ATM敲除A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与主要抗体孵育过夜之前,在TBS-0.1%吐温®20(TBS-T)中的5%牛奶中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸收抗体( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
所有车道: 抗-ATM抗体[EPR17059]( ab199726年 )稀释1/2000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: ATM敲除A549细胞裂解物 3号车道: HEK-293细胞裂解物 车道4: U-2 OS细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 350千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:1/2000稀释度下的抗-ATM抗体[EPR17059]染色,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, ab199726年 显示为专门绑定到ATM。 在野生型A549细胞裂解液中观察到350 kDa的条带,而在ATM敲除细胞系ab276095(敲除细胞裂解液 约283834 ). 为了生成此图像,分析了野生型和ATM敲除A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与主要抗体孵育过夜之前,在TBS-0.1%吐温®20(TBS-T)中的5%牛奶中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸收抗体( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
所有车道: 抗-ATM抗体[Y170]( ab32420号 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: ATM敲除A549细胞裂解物 3号车道: HEK-293细胞裂解物 车道4: U-2 OS细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 350千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 蛋白质印迹的假彩色图像:1/1000稀释的抗ATM抗体[Y170]染色,显示为绿色; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, ab32420号 显示为专门绑定到ATM。 在野生型A549细胞裂解液中观察到350 kDa的条带,而在ATM敲除细胞系ab276095(敲除细胞裂解液 约283834 ). 为了生成此图像,分析了野生型和ATM敲除A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与主要抗体孵育过夜之前,在TBS-0.1%吐温®20(TBS-T)中的5%牛奶中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸收抗体( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,纯合子:外显子3中28 bp缺失
数据表及文件
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SDS下载 -
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