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.2023年1月；27(1):17.
doi:10.3892/mmr.2022.12904。 Epub 2022年12月1日。

雷公藤内酯醇通过抑制Nrf2克服白血病细胞对阿霉素的耐药性促进铁下垂

夏武 1, 陈尚青 2, 黄可初 三, 龚平林 4
附属公司

雷公藤内酯醇通过抑制Nrf2克服白血病细胞对阿霉素的耐药性促进铁下垂

夏武等。 分子医学代表. 2023年1月.

摘要

阿霉素（DOX）是一种广泛用于治疗白血病的化疗药物。然而，白血病患者对DOX的耐药性仍然是一个关键的临床问题。红细胞生成素2相关因子2（Nrf2）是抗氧化反应的主要调节因子，在维持细胞氧化稳态中起着关键作用。然而，Nrf2是否参与DOX抵抗尚不完全清楚。已有大量文献证明，雷公藤甲素是一种广泛用于治疗自身免疫性疾病的药物，具有抗肿瘤活性，但雷公藤乙素是否影响白血病细胞对DOX的敏感性尚待阐明。本研究旨在确定雷公藤内酯醇介导的Nrf2下调在调节白血病细胞铁凋亡和DOX耐药性中的作用。为此，使用低剂量DOX建立耐DOX的K562细胞和HL-60细胞。用定量PCR和western blotting检测Nrf2 mRNA和蛋白表达。雷公藤甲素对白血病细胞活力、活性氧（ROS）水平或脂质氧化的影响分别通过CCK8分析、DCFH‑DA分析或BODIPY 581/591 C11分析测定。结果表明，在耐DOX白血病细胞和临床白血病样本中，Nrf2表达显著上调。Nrf2沉默可显著提高白血病细胞对DOX的敏感性。此外，雷公藤内酯醇抑制Nrf2的表达并诱导白血病细胞的铁下垂，如ROS水平升高、脂质氧化以及谷胱甘肽过氧化物酶4表达降低所证明的。Nrf2的异位表达显著挽救了雷公藤甲素诱导的白血病细胞铁凋亡。值得注意的是，本研究表明雷公藤甲素使DOX耐药白血病细胞对DOX再次致敏。总之，本研究表明，Nrf2在白血病细胞对DOX的耐药性和雷公藤甲素诱导的铁下垂中起着关键作用，并提出了在白血病治疗中使用雷公藤乙素和DOX联合治疗的潜在策略。

关键词：Nrf2；阿霉素耐药；铁下垂；白血病；雷公藤甲素。

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数字

图1。
图1。
Nrf2在白血病细胞对DOX的抵抗中起着关键作用。K562或HL-60细胞在常规RPMI-1640培养基中在0.8µg/ml DOX存在或不存在的情况下生长24小时。第40天，收集存活的耐DOX的K562或HL-60细胞（K562-DR或HL-60-DR）进行进一步实验。（A） 用指示浓度的DOX（DOX）处理K562细胞、K562/DR、HL-60细胞或HL-60/DR 48小时。使用CCK8分析测定细胞活力。对K562、K562/DR、HL-60或HL-60/DR细胞进行（B）western blot或（C和D）qPCR分析。（E） 对K562、K562/DR、HL-60或HL-60/DR细胞进行细胞质和细胞核的分级，然后进行蛋白质印迹分析。（F） 对稳定表达shGFP、shNrf2-1或shNrf2-2的K562/DR或HL-60/DR细胞进行western blot分析。用1µG/ml DOX处理（G和H）细胞48小时。使用CCK8分析测定细胞活力。采用（I和J）western blot分析或（K）qPCR分析检测白血病患者（n=10）或耐DOX白血病患者（n=20）的外周血单个核细胞（PBMC）。数据来自至少三个独立实验，并以平均值±标准偏差表示***P<0.001**P＜0.01*P<0.05。核因子红细胞2相关因子2；DOX，阿霉素；qPCR，定量PCR。
图2。
图2。
雷公藤内酯醇抑制Nrf2表达并诱导白血病细胞凋亡。（A） 在进行western blot分析之前，用指示的化合物（40 nM）处理K562细胞24小时。用雷公藤内酯醇（40 nM）处理K562或HL-60细胞24小时。按照材料和方法中的描述，对细胞进行ROS水平（B和C）或脂质氧化（D和E）的测量。（F） 用指定浓度的雷公藤内酯醇处理K562或HL-60细胞48小时，或（G）用40nM雷公藤醇处理指定时间。使用CCK8分析测定细胞活力。数据来自至少三个独立实验，并以平均值±标准偏差表示***P<0.001。核因子红细胞2相关因子2；TPL、雷公藤甲素。
图3。
图3。
Nrf2的异位表达抑制雷公藤甲素介导的铁凋亡。（A） 对稳定表达Nrf2或载体对照的K562或HL-60细胞进行western blot分析。K562-Vec、K562-Nrf2、HL-60-Vec或HL-60-Nrf2细胞接受或不接受40 nM雷公藤内酯醇处理48 h。细胞接受（B）western blot分析，（C-E）ROS水平或（F-h）脂质氧化的测量，或接受（I和J）CCK8细胞生存力分析。数据来自至少三个独立实验，并以平均值±标准偏差表示***P<0.001**P<0.05。核因子红细胞2相关因子2；矢量控制。
图4。
图4。
雷公藤甲素使白血病细胞对DOX敏感。K562、K562/DR、HL-60或HL-60/DR细胞在存在或不存在10nM雷公藤甲素的情况下，用或不用1µg/ml DOX处理48小时。对细胞进行（A和B）蛋白质印迹分析或（C和D）CCK8分析以测定细胞活力。（E和F）K562、K562/DR、HL-60或HL-60/DR细胞在存在或不存在2µM橡皮素的情况下，用或不使用1µg/ml DOX处理48小时。细胞接受CCK8分析以了解细胞活力。数据来自至少三个独立实验，并以平均值±标准偏差表示***P<0.001。DOX，阿霉素。
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赠款和资金

本研究得到了金安区医院研究基金会（批准号JA2021KJ005）对GL的支持。