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.2022年12月;60(1):2355-2366.
doi:10.1080/13880209.2022.2147961。

小儿莲花清颗粒减轻甲型流感和呼吸道合胞病毒感染小鼠的病毒性肺炎

附属公司

小儿莲花清颗粒减轻甲型流感和呼吸道合胞病毒感染小鼠的病毒性肺炎

李汶妍等。 Pharm生物. 2022年12月.

摘要

上下文:小儿莲花清肝(XELH)是根据莲花清瘟(LHQW)处方研制而成,含有13种中药。它已经完成了用于治疗中国儿童呼吸道病毒感染的试验性新药申请。

目标:本研究证明了XELH对病毒性肺炎的药理作用。

材料和方法:研究了XELH的抗病毒和抗炎作用在体外使用H3N2感染的A549和LPS刺激的RAW264.7细胞和体内使用甲型流感病毒(H3N2)和呼吸道合胞病毒(RSV)感染的BALB/c小鼠模型。小鼠分为7组(n个=20):对照组、模型组、LHQW(0.5 g/kg)、XELH-low(2 g/kg),XELH-medium(4 g/kg)和XELH-high(8 g/kg)以及阳性药物(20 mg/kg奥司他韦或60 mg/kg利巴韦林)组。在LPS诱导发热的大鼠模型和二甲苯诱导耳肿胀的小鼠模型中测试XELH的抗炎作用。

结果: 在体外,XELH抑制促炎细胞因子和H1N1、H3N2、H1N1、FluB、H9N2、H6N2、H7N3、RSV和HCoV-229E病毒的复制50分别为47.4、114、79、250、99.2、170、79、62.5和93μg/mL)。体内XELH降低体重减轻和肺指数,抑制病毒复制和巨噬细胞M1极化,改善肺损伤,减少肺组织中炎性细胞浸润和促炎细胞因子的表达,增加CD4+/CD8(CD8)+比率。XELH抑制LPS诱导的大鼠发热和二甲苯诱导的小鼠耳肿胀。

结论:XELH的疗效部分取决于综合免疫调节作用。XELH是一种很有希望的治疗儿童呼吸道病毒感染的方法。

关键词:小二莲花清甘;抗炎作用;抗病毒作用;免疫调节作用。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者报告称,没有竞争性利益需要申报。

数字

图1。
图1。
小二莲花青qGan(XELH)的超高效液相色谱指纹图谱显示出10个色谱峰:(1)新绿原酸(2)绿原酸()隐绿原酸(4)异连翘苷(5)连翘苷A(6)维巴斯西德(7)4,5-地-O(运行)-咖啡酰奎宁酸(8)植酸(9)费利林(10)甘草酸。
图2。
图2。
使用甲基噻唑四氮唑(MTT)法评估XELH对MRC-5、Hep-2、Vero、MDCK和Huh-7细胞活力的细胞毒性。细胞被分成不同的组(n个 = 每组4孔),并用不同浓度的XELH(5、2.5、1.25、0.625、0.3125和0.15625mg/mL),培养48h、 和MTT(1mg/mL)添加到每个孔中4h.TC50MRC-5、Hep-2、Vero、MDCK和Huh-7细胞中的XELH值分别为2.03、1.25、3.4、4.25和1.25mg/mL。
图3。
图3。
XELH的抗炎作用在体外(A)XELH治疗的效果(10、100、1000μg/mL)对H3N2感染的A549细胞中炎症介质mRNA表达的影响*第页 ≤ 0.05, **第页 ≤ 0.01, ***第页 ≤ 0.001,XELH与模型组(XELH 0μg/mL)。(B) XELH治疗的效果(10、100、1000μg/mL)对脂多糖(LPS)刺激的RAW 264.7细胞中炎症介质mRNA表达水平的影响。数据以平均值表示±标准偏差(SD)(n个 = 每组3口井)*第页 ≤ 0.05, **第页 ≤ 0.01, ***第页 ≤ 0.001,XELH与模型组(XELH 0μg/mL)。
图4。
图4。
(A) XELH效应的时间过程分析(1000μg/mL)。(数据以平均值表示±标准偏差。+第页 ≤ 0.05,++第页 ≤ 0.01与正常组比较*第页 ≤ 0.05时**第页 ≤ 0.01与模型组相比。)(B) XELH对H3N2 NP蛋白表达的影响。
图5。
图5。
(A) XELH对H3N2感染小鼠体重的影响。数据以平均值表示±标准偏差(n个 = 每组20人)。+第页 ≤ 0.05++第页 ≤ 0.01,模型组与正常组*第页 ≤ 0.05, **第页 ≤ 0.01,LHQW组vs.模型组;#第页 ≤ 0.05,##第页 ≤ 0.01,Oseltamivir组vs.模型组;第页 ≤ 0.05, ▲▲第页 ≤ 0.01,XELH中等组与模型组;第页 ≤ 0.05, ▼▼第页 ≤ 0.01,XELH高剂量组与模型组。XELH治疗对(B)肺指数的影响;(C) 病毒HA滴度;(D) 肺组织中H3N2病毒载量;(E) 肺组织TNF-α水平;(F) H3N2感染小鼠肺组织中IL-1β水平。Oseltamivir(20岁mg/kg),LHQW(0.5g/kg),XELH低(2g/kg),XELH中等(4g/kg)和XELH高(8克/千克)。数据以平均值表示±标准偏差(n个 = 10).++第页 ≤ 0.01 vs.正常组*第页 ≤ 0.05, **第页 ≤ 0.01 vs.模型组。
图6。
图6。
XELH对H3N2感染小鼠肺组织病理学的影响。(A) 给药后对肺组织病理学的影响。(B) 第5天和第7天(D5和D7)的肺部病理变化评分。黑色箭头,肺泡;蓝色箭头,肺基质;红色箭头,细支气管。Oseltamivir(20岁mg/kg),LHQW(0.5g/kg),XELH低(2g/kg),XELH中等(4g/kg)和XELH高(8克/千克)。数据以平均值表示±标准偏差(n个 = 每组10人)。++第页 ≤ 0.01 vs.正常组*第页 ≤ 0.05, **第页 ≤ 0.01 vs.模型组。
图7。
图7。
XELH对CD4的影响+和CD8+H3N2感染小鼠肺组织中的细胞。(A) XELH对CD4荧光强度的影响+和CD8+细胞。(B) XELH对CD4的影响+/CD8(CD8)+肺组织中的比率。红色荧光,CD4+细胞;绿色荧光,CD8+细胞;用图像J分析荧光信号;荧光值代表CD4的数量+和CD8+细胞。Oseltamivir(20岁mg/kg),LHQW(0.5g/kg),XELH低(2g/kg),XELH中等(4g/kg)和XELH高(8克/千克)。数据以平均值表示±标准偏差(n个 = 6).++第页 ≤ 0.01 vs.正常组*第页 ≤ 0.05, **第页 ≤ 0.01 vs.模型组。)。
图8。
图8。
(A) XELH对呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠体重的影响。数据以平均值表示±标准偏差(n个 = 20) 。XELH对(B)肺指数的影响;(C) 肺组织病毒载量;(D) 肺组织IL-1β水平;(E) 肺组织中TNF-α水平;(F) 肺组织IL-10水平;(G) 肺组织中IFN-γ水平。利巴韦林(60mg/kg),LHQW(0.5g/kg),XELH低(2g/kg),XELH中等(4g/kg)和XELH高(8克/千克)。数据以平均值表示±标准偏差(n个 = 10).++第页 ≤ 0.01 vs.正常组*第页 ≤ 0.05, **第页 ≤ 0.01 vs.模型组。
图9。
图9。
XELH对RSV感染小鼠肺组织病理学的影响。(A)给药后肺组织病理的典型图像。(B) D5和D7的肺部病变评分。黑色箭头,肺泡;蓝色箭头,肺基质;红色箭头,细支气管。利巴韦林(60mg/kg),LHQW(0.5g/kg),XELH低(2g/kg),XELH中等(4g/kg)和XELH高(8克/千克)。数据以平均值表示±标准偏差(n个 = 10).++第页 ≤ 0.01 vs.正常组*第页 ≤ 0.05, **第页 ≤ 0.01 vs.模型组。
图10。
图10。
XELH对CD4的影响+,CD8+RSV感染小鼠肺组织中的M1和M2细胞。(A)XELH对CD4荧光强度的影响+和CD8+细胞;XELH对CD4的×400(B)效应+/CD8(CD8)+肺组织免疫组织化学荧光强度比值。(C,D)XELH对肺巨噬细胞的影响。红色荧光,CD4+细胞;绿色荧光,CD8+细胞。使用图像J分析荧光信号,荧光值被认为是CD4的数量+和CD8+利巴韦林(60mg/kg),LHQW(0.5g/kg),XELH低(2g/kg),XELH中等(4g/kg)和XELH高(8克/千克)。数据以平均值表示±标准偏差(n个 = 6).++第页 ≤ 0.01 vs.正常组*第页 ≤ 0.05, **第页 ≤ 0.01 vs.模型组。
图11。
图11。
(A) XELH对LPS诱导大鼠发热的影响。数据以平均值表示±标准偏差(n个 = 18). *第页 ≤ 0.05, **第页 ≤ 0.01,布洛芬组与模型组;#第页 ≤ 0.05,##第页 ≤ 0.01,XELH-高对比车型组。(B) XELH对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响。数据以平均值表示±标准偏差(n个 = 15).++第页 ≤ 0.01 vs.正常组*第页 ≤ 0.05, **第页 ≤ 0.01 vs.模型组。

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