跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

政府意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府网站。

Https公司

网站是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2022年4月11日；22(1):147.
doi:10.1186/s12935-022-02567-1。

B7-H4表达受PKCδ激活上调，并有助于PKCδ诱导的结直肠癌细胞运动

周斌 # 1 2 三, 陆友伟 # 4, 赵志明 4, 通国市 1 2 三, 吴洪雅 1 2 三, 陈伟昌 1 2 三, 梁张 5 6 7, 张雪光 8 9 10
附属公司

B7-H4表达受PKCδ激活上调，并有助于PKCδ诱导的结直肠癌细胞运动

滨州等。 癌细胞Int. .

摘要

简介：B7-H4在结直肠癌（CRC）中过度表达，在肿瘤生长和免疫抑制中起重要作用。然而，调节B7-H4表达的确切机制尚不清楚。在此，我们研究了蛋白激酶Cδ（PKCδ）是否调节大肠癌中B7-H4的表达。

方法：通过免疫组织化学（IHC）和免疫荧光（IF）染色，我们分析了225例大肠肿瘤标本中B7-H4和磷酸化PKCδ（p-PKCδ）的表达，并确定了其表达模式的临床意义。用CRC细胞系HCT116和SW620进行体外实验，以检测PKCδ激活对B7-H4表达的影响，并用罗氏菌素治疗异种移植小鼠，以监测B7-H5的表达和肿瘤转移。

结果：肿瘤组织中B7-H4表达水平与p-PKCδ水平显著相关（r=0.378，p<0.001）。p-PKCδ和B7-H4的共表达与中/低分化（p=0.024）、淋巴结转移（p=0.001）和晚期Dukes分期（p=0.002）显著相关。Western印迹分析显示，佛波醇-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯（TPA）以浓度依赖性的方式增加B7-H4的表达，并且罗特勒林消除了TPA诱导的B7-H4表达的增加。PKCδ特异性siRNA显著降低了B7-H4和p-STAT3的蛋白水平。此外，STAT3抑制剂隐丹参酮显著降低了CRC细胞中的B7-H3蛋白水平。B7-H4或PKCδ的敲除抑制细胞迁移和运动。Rottlerin在体内也抑制B7-H4的表达和肿瘤转移。

结论：B7-H4表达水平与大肠癌标本中p-PKCδ水平和肿瘤转移显著相关。通过PKCδ激活STAT3上调B7-H4的表达，并在PKCδ诱导的癌细胞运动和转移中发挥作用，提示PKCδ/STAT3/B7-H4轴可能是CRC的潜在治疗靶点。

关键词：B7-H4；大肠癌；转移；PKCδ；法规。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明，他们没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
临床CRC组织标本中B7-H4和p-PKCδ水平升高。A类负片的代表性图像（400 ×），弱（400 ×），中间（400 ×）和强（400 ×）B7-H4和p-PKCδ染色。B类大肠癌中B7-H4和p-PKCδ水平显著升高。将大肠癌组织样本中的B7-H4和p-PKCδ水平与相邻正常组织样本进行比较。采用非配对t检验进行统计分析(P（P） < 0.001).C类定量PCR分析表明，与邻近正常结肠组织样本相比，肿瘤组织样本中的B7-H4和PKCδ水平显著升高
图2
图2
B7-H4和p-PKCδ水平之间的相关性。A类在GEPIA网站上进行TCGA数据集分析(http://gepia.cancer-pku.cn/). 该分析表明，PRKCD（PKCδ）mRNA表达与VTCN1（编码B7-H4）mRNA的表达呈正相关。B类通过Western blot分析测定NCM460、SW480、HCT116、SW620和RKO细胞系中B7-H4和p-PKCδ的蛋白水平。数据表示为平均值 ± SD值；n个 = 三。C类序列p-PKCδ+肿瘤切片检查B7-H4的表达，阳性染色（400 图中显示了CRC样品中B7-H4的×）和p-PKCδ。对CRC标本进行双重IF染色。对CRC组织样本进行p-PKCδ染色（绿色，200 ×）和B7-H4（红色，200 ×). B7-H4型+/p-蛋白激酶Cδ+在CRC组织标本中发现细胞（深黄色；原始放大）。D类TCGA COAD数据集分析在XENA网站上进行。该分析表明B7-H4mRNA水平与淋巴结转移呈正相关
图3
图3
PKCδ介导CRC细胞株中B7-H4的上调。用不同浓度的TPA处理HCT116和SW620细胞(A类)或鹿特林(C类)持续20小时。B类分别用PE结合的抗B7-H4抗体和DAPI对HCT116细胞的B7-H5和细胞核进行染色。D类流式细胞术分析用于检测经TPA或rottlerin处理的HCT116和SW620细胞中B7-H4表达的变化。用TPA或rottlerin处理CRC细胞24 h，用流式细胞术检测细胞内B7-H4的表达。E类HCT116和SW620细胞系用1μM鹿特伦和100 nM TPA处理24 h，并用Western blotting测定B7-H4水平。左侧面板中显示了一个具有代表性的Western blot图像。B7-H4表达的统计分析（平均值 ± 右侧面板显示了三个独立实验的SD）*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01和***P（P） < 0.001
图4
图4
PKCδ基因敲除抑制了大肠癌细胞株中B7-H4的表达。用PKCδ特异性siRNA处理HCT116和SW620细胞45小时。定量RT-PCR检测B7-H4和PKCδ水平(A类)和蛋白质印迹(B类). 用PKCδ特异性siRNA处理HCT116和SW620细胞24小时，然后用TPA（100 nM）孵育20小时(C类). 收集细胞生成全细胞裂解物，通过Western blot分析检测指示的蛋白质。具有代表性的Western blot和B7-H4表达数据（平均值 ± SD），显示了三个单独的实验*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01和***P（P） < 0.001
图5
图5
PKCδ通过STAT3抑制CRC细胞株中B7-H4的表达。PKCδ特异性siRNA处理降低HCT116和SW620细胞中B7-H4和STAT3的表达(A类). 用不同浓度的STAT3抑制剂隐丹参酮处理HCT116和SW620细胞(B类)持续24小时。收集细胞生成全细胞裂解物，通过Western blot分析检测指示的蛋白质。代表性的蛋白质印迹和B7-H4表达数据（平均 ± SD），显示了三个单独的实验*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01和***P（P） < 0.001
图6
图6
PKCδ/B7-H4轴促进HCT116细胞的迁移。用PKCδ特异性siRNA和/或B7-H4特异性siRNAs处理HCT116细胞45 h，然后通过Western blot分析测定B7-H5蛋白水平(A类). 采用Transwell分析检测B7-H4 siRNA/HCT116、PKCδsiRNA/HCT116和PKCδsiRNA的构成性侵袭 + B7-H4 siRNA/HCT116和con siRNA/HCT116细胞(B类). 用100 nM TPA处理细胞24小时后，评估B7-H4 siRNA/HCT116细胞的侵袭性(C类). 通过伤口愈合试验评估PKCδ和B7-H4对细胞迁移的影响(D类). 实验一式三份*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01和***P（P） < 0.001
图7
图7
A类注射HCT116细胞54天后，小鼠肺转移性结节的典型图像出现。按照“材料和方法”一节中的说明处理隔离的肺部。比例尺，5 mm。B类，C类肺转移性结节的典型图像和H&E染色。红色箭头表示肺部有转移性结节。H&E染色用于评估一对小鼠的肺微转移A类.D类两组p-PKCδ和B7-H4的免疫组化分析。数据表示为平均值 ± SD值(n个 = 5只动物/组）*P（P） < 0.05; **P（P） < 0.01
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

工具书类

    1. Morris EJ、Forman D、Thomas JD、Quirke P、Taylor EF、Fairley L等。结直肠癌肝转移的外科治疗和结果。英国外科杂志，2010年；97(7):1110–1118. doi:10.1002/bjs.7032。-内政部-公共医学
    1. Xu G，Zhou Y，Zhou-F.九种趋化因子免疫相关分类器的开发和验证，用于预测结直肠癌术后I–III期患者的复发。2018年癌症管理研究；10:4051–4064. doi:10.2147/CMAR。S174452。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Levin B、Lieberman DA、McFarland B、Andrews KS、Brooks D、Bond J等。结直肠癌和腺瘤性息肉早期检测的筛查和监测，2008年：美国癌症协会、美国多社会结直肠癌工作组和美国放射学院的联合指南。胃肠病学。2008;134（5）：1570–1595。doi:10.1053/j.gastro.2008.02.002。-内政部-公共医学
    1. Han EC，Kwon Y-H，Park KJ，Jeong S-Y，Kang S-B，Oh JH，等。淋巴结转移在IV期结直肠癌血行转移生存中的意义。Ann Surg Treat研究，2018；95(4):201–212. doi:10.4174/astr.2018.95.4.201。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Zang X，Loke P，Kim J，Murphy K，Waitz R，Allison JP.B7x：一种广泛表达的抑制T细胞活化的B7家族成员。美国国家科学院院刊，2003年；100(18):10388–10392. doi:10.1073/pnas.1434299100。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学