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.2022年3月17日：13:832677。

doi:10.3389/fgene.2022.832677。 eCollection 2022年。

小鼠粗线期精母细胞和圆形精母细胞转录体宽m6A甲基化的综合分析

Shihao Hong先生¹, 沈晓忠¹, 程金美（Jinmei Cheng）¹, 韩愈汤¹, 孙飞¹

附属公司

PMID： 35368708
预防性维修识别码：项目管理委员会8968445
内政部： 10.3389/fgene.2022.832677年

小鼠粗线期精母细胞和圆形精母细胞转录体宽m6A甲基化的综合分析

Shihao Hong先生等。前Genet. 2022.

.2022年3月17日：13:832677。

doi:10.3389/fgene.2022.832677。 eCollection 2022年。

作者

Shihao Hong先生¹, 沈晓忠¹, 程金美（Jinmei Cheng）¹, 韩愈汤¹, 孙飞¹

附属

¹南通大学医学院生殖医学研究所，南通，中国。

PMID： 35368708
预防性维修识别码：项目管理委员会8968445
内政部： 10.3389/fgene.2022.832677年

中的勘误表

勘误表：小鼠粗线期精母细胞和圆形精子细胞转录体宽m6A甲基化的综合分析。
洪S、沈X、程J、唐H、孙F。 Hong S等人。前发电机。2022年8月15日；13:969985. doi:10.3389/fgene.2022.9699985。eCollection 2022年。前发电机。2022 PMID：36046238 免费PMC文章。

摘要

精子发生是雄性生殖系发育中一个高效而复杂的系统，需要一系列精心调控的遗传事件，其中二倍体精原细胞分化为单倍体精子。N6-甲基腺苷（m6A）是精子发生过程中发生的一种重要的表观遗传RNA修饰。ALKBH5是一款m6A橡皮擦Alkbh5公司增加总m6A甲基化水平并导致男性不育。在这项研究中，对MeRIP-seq和RNA-seq数据的综合分析揭示了野生型（WT）和Alkbh5公司敲除（KO）小鼠。在粗线期精母细胞（PA）中，从WT中检测到与9959个基因相关的8151个m6A峰，从KO小鼠中检测到10856个m6A峰，与10016个基因相关。在圆形精子细胞（RO）中，从WT小鼠中测试了与10109基因相关的10271 m6A峰，从KO小鼠中检测了与10138基因相关的9559 m6A峰值。峰主要集中在GGAC基序的编码区和终止密码子。此外，富集分析显示精子发生相关通路中存在显著的m6A甲基化基因。此外，我们对m6A甲基组和RNA转录进行了联合分析，表明m6A是基因表达的调节机制。最后，用qPCR验证了PA和RO中RNA-seq数据中7个差异表达的mRNA。总的来说，我们的研究为PA和RO中WT和KO之间的m6A修饰变化提供了新的信息，并可能为m6A修饰在生殖细胞发育和精子发生中的分子机制提供新的见解。

关键词：m6A甲基化；merip测序；粗线期精母细胞；圆形精子细胞；精子发生。

版权所有©2022 Hong、Shen、Cheng、Tang和Sun。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明，该研究是在没有任何可能被解释为潜在利益冲突的商业或金融关系的情况下进行的。

数字

图1
ALKBH5蛋白的Western blot分析。β-管蛋白被用作负荷控制（A）12周龄WT和WT的代表性右睾丸和右附睾Alkbh5公司KO小鼠（左图）。12周龄WT和Alkbh5公司KO小鼠（右图）条形图表示平均值±SEM（n=10****第页<0.0001）（B）用苏木精-伊红（H&E）染色WT和Alkbh5 KO小鼠的生精小管结构（比例尺，50μm）（C）用H&E染色的WT和Alkbh5 KO小鼠的尾和附睾头（比例尺，50μm）（D）.

图2
火山图显示WT PA和Alkbh5-KO PA之间的差异甲基化峰（A）火山图显示WT RO和Alkbh5公司-KO反渗透（B）m6A峰最富集于mRNA终止密码子附近的编码序列和PA中lncRNA的分布（C）m6A峰最富集于mRNA终止密码子附近的编码序列和lncRNA在RO中的分布（D）.不同区域在Alkbh5公司-KO和WT PA（E）.不同区域在Alkbh5公司-KO和WT RO（F）从Alkbh5-KO PA中鉴定出的前五个富含m6A峰的共有序列基序（G）.

图3
差异甲基化mRNA分析。上调GO富集分析（A）和下调（B）甲基化信使核糖核酸Alkbh5公司-上调的KO PA和WT PA.GO富集分析（C）和下调（D）甲基化mRNA介于Alkbh5公司-KO RO和WT RO。

图4
差异基因分析FPKM密度分布（A）火山图显示了Alkbh5公司-KO PA和WT PA（B）,Alkbh5公司-KO RO和WT RO（C）.

图5
上调GO富集分析（A）和下调（B）基因介于Alkbh5公司-上调的KO PA和WT PA.GO富集分析（C）和下调（D）基因介于Alkbh5公司-KO RO和WT RO。

图6
PA和RO甲基化和mRNA表达水平显著变化的基因关联分析（A）维恩图显示了上调和下调甲基化峰的交叉点，以及PA和RO的mRNA（B）七个基因的mRNA表达水平Alkbh5公司-qPCR检测KO和WT小鼠睾丸组织(****第页< 0.0001, ***第页= 0.0001, **第页< 0.01.)（C）.

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研究材料
- NCI CPTC抗体鉴定计划