Differential Size Distribution and Estrogen Receptor Cargo of Oviductal Extracellular Vesicles at Various Stages of Estrous Cycle in Mice

doi:10.1007/s43032-022-00862-w

.2022年10月；29(10):2847-2858.

doi:10.1007/s43032-022-00862-w。 Epub 2022年2月8日。

小鼠输卵管胞外囊泡在发情周期不同阶段的大小分布及雌激素受体负荷

陈陈毅¹, 亚尼¹, 孙培北¹, 田高¹, 李坤²

附属公司

¹杭州杭医学院生殖健康研究所，浙江杭州，310013。
²杭州杭医学院生殖健康研究所，浙江杭州，310013。likun_email@126.com。

PMID： 35137347
预防性维修识别码： PMC9537198
内政部： 10.1007/s43032-022-00862-w

小鼠输卵管胞外囊泡在发情周期不同阶段的大小分布及雌激素受体负荷

陈陈毅等。生殖科学. 2022年10月.

.2022年10月；29（10）：2847-2858。

doi:10.1007/s43032-022-00862-w。 Epub 2022年2月8日。

作者

陈陈毅¹, 亚尼¹, 孙培北¹, 田高¹, 李坤²

附属公司

¹杭州医学院生殖健康研究所，杭州，310013，中国浙江。
²杭州杭医学院生殖健康研究所，浙江杭州，310013。likun_email@126.com。

PMID： 35137347
预防性维修识别码： PMC9537198
内政部： 10.1007/s43032-022-00862-w

摘要

输卵管胞外囊泡（OEV）在受精和胚胎发育中起着重要作用。然而，在小鼠发情周期中，OEV的大小和蛋白质含量是否会发生变化，目前尚不清楚。本研究分析了小鼠发情周期四个阶段OEV大小分布和蛋白载量的变化。根据发情周期阶段，OEV的分布宽度为：发情前期，直径20-690nm，在50和250nm处有两个峰值；发情期，直径22-420nm，在40和200nm处有两个峰；metestrus，直径30-70nm，单峰位于40nm；间期，直径10-26nm，在20nm处有一个单峰。发情前期OEV雌激素受体（ER）水平与发情期（P=0.013）和间期（P=0.005）差异显著。CD9和Hsc70的水平在四个阶段波动，但没有显著差异。此外，在发情前期、发情期和间情期上皮细胞的纤毛和微绒毛中观察到OEV，但在发情后期没有观察到OEVs。观察到的OEV数量在发情前期最高，其次是发情期和间情期。在发情期和中间期也观察到内分泌物。OEV大小和ER载量的变化与小鼠发情周期有关。我们的发现增加了对OEV生理特性的了解，这可能具有临床应用。

关键词：雌激素受体；发情期；外显子；胞外小泡；输卵管；输卵管胞外囊泡；囊泡大小。

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作者声明没有相互竞争的利益。

数字

图1
发情周期不同阶段阴道分泌物的细胞形态学评价。（A）发情前期：主要是具有圆形细胞核的上皮细胞（白色箭头，黑色边缘）。（B）发情期：角化鳞状上皮细胞，呈密集簇状（白色箭头）。（C）流星雨期：主要是小白细胞（黑色箭头）。（D）间期：很少有鳞状上皮细胞带有碎片（黑色箭头），上皮细胞带有圆形细胞核（白色箭头带有黑色边缘），但主要是小白细胞。细胞在显微镜下观察（Eclipse 80i；Nikon Inc.，Tokyo，Japan），200 × 放大倍数。比例尺 = 20微米

图2
小鼠发情周期不同阶段的OEV大小特征。左，OEV的规模分布；发情前期OEV（从14只小鼠中汇集）、发情期OEV（由14只小鼠汇集）、Metestrus OEV（通过16只小鼠汇总）；间期OEV（来自34只小鼠）。使用Zeta sizer软件自动获取显示结果的图表。右侧，通过透射电镜观察确认左侧相应样品的粒径。比例尺 = 50纳米

图3
小鼠发情不同阶段OEV内质网的定量分析**循环。**Western blot分析时，装载来自OEV的4.6µg/lane蛋白质。（一） OEV内质网水平的定量分析。ER的相对水平是通过将发情前期的各组标准化为1.00来确定的*对 < 0.05，发情期ER水平(对 = 0.013）和间期(对 = 0.005）阶段与发情前阶段有统计学差异。数据以平均值表示 ± 平均值的标准误差，重复实验三次。（二） OEV内质网蛋白印迹。（三）使用免疫电子显微镜验证OEV中的ER。（A）发情前期，（B）发情期，（C）发情间期，（D）间期，以及（E）兔IgG对照。比例尺如图所示；绿色箭头所示的黑色金颗粒表明，OEV中的ER被ER抗体识别

图4
小鼠发情周期不同阶段OEV中CD9的定量分析。Western blot分析时，装载来自OEV的4.8µg/lane蛋白质。（I） OEV中CD9水平的定量分析。CD9的相对水平是通过将发情前期的各组标准化为1.00来确定的。数据以平均值表示 ± 平均值的标准误差，使用三个不同的样本重复实验六次。P值小于0.05具有统计学意义。（二） OEV中CD9的Western blot。（三）使用免疫电子显微镜验证OEV中的CD9。（A）发情前期，（B）发情期，（C）发情间期，（D）间期。对暗金颗粒的观察表明存在CD9。比例尺如图所示；绿色箭头所示的黑色金颗粒表明，OEV中的CD9被CD9抗体识别

图5
小鼠发情周期不同阶段OEV中Hsc70的定量分析。Western blot分析时，装载来自OEV的蛋白质，7.5µg/lane。（一） OEV中Hsc70水平的定量分析。通过将发情前期的各组标准化为1.00来确定Hsc70的水平。数据以平均值表示 ± 平均值的标准误差，使用三个不同的样本重复实验六次。A类对值小于0.05具有统计学意义。（二） OEV中Hsc70的Western blot

图6
小鼠发情周期不同阶段输卵管超微结构和OEV分泌。（A）发情前期：输卵管管腔上皮衬里表面可见厚纤毛和微绒毛；厚厚的纤毛和微绒毛中存在许多OEV（绿色箭头），并且OEV大小不同。共19张照片中的代表性图像。（B）发情期：输卵管管腔上皮衬里表面可见纤毛和微绒毛；粗大纤毛和微绒毛中存在OEV（绿色箭头），并观察到内体（黄色箭头）。总共20张照片中的代表性图像。（C）流星雨期：输卵管管腔上皮衬里表面仅可见微绒毛，无纤毛。共14张照片中的代表性图像。（D）间期：仅可见微绒毛，无纤毛。几乎没有观察到OEV，但可以看到内体（黄色箭头）。共有24张照片中的代表性图像。（E） TEM照片中OEV的数量。数据以平均值表示 ± 平均值的标准误差。n、照片数量；采用Mann-Whitney检验进行统计分析。A类对值小于0.05具有统计学意义

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