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.2021年3月15日；206(6):1395-1404.
doi:10.4049/jimmunol.2000500。 Epub 2021年2月5日。

Asah2抑制p53-Hmox1轴保护髓系抑制细胞免受铁凋亡

朱华斌 1 2 三, 约翰·德·克莱门特 1 2 三, 春湾路 1 2 三, 普里西拉·雷德 1 2 三, 杨大丰 1 2 三, 艾莉莎·德·史密斯 1 2 三, 达科塔·B·波舍尔 1 2 三, 邹娟（Juan Zou） 4, 丁柳 5, 彭·乔治·王 5, 大卫·奥斯特罗夫 6, 尼古拉斯·科恩 7, 优素福·A·汉农 7, 亚伦·H·科尔比 8 9, 马克·格林斯塔夫 9, 刘可斌 10 2 三
附属机构

Asah2抑制p53-Hmox1轴保护髓系抑制细胞免受铁凋亡

朱华斌等。 免疫学杂志. .

摘要

髓源性抑制细胞（MDSC）是一种免疫抑制细胞，在病理条件下大量积聚以抑制T细胞免疫反应。调控失调的细胞死亡有助于MDSC的积累，但这种细胞死亡调控失调的分子机制尚不完全清楚。在这项研究中，我们报告了中性神经酰胺酶（N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶[ASAH2]）在结肠癌肿瘤浸润性MDSC中高度表达，并作为MDSC生存因子。为了靶向ASAH2，我们基于人类ASAH2蛋白结构进行了分子对接。对确定的hits进行酶抑制分析，确定NC06为ASAH2抑制剂。化学和核磁共振分析确定NC06为7-氯-2-（3-氯苯胺基）吡喃[3,4-e][1,3]恶嗪-4,5-二酮。NC06通过IC抑制神经酰胺酶活性50人类ASAH2蛋白为10.16-25.91μM，小鼠ASAH2蛋白质为18.6-30.2μM。NC06以剂量依赖性的方式诱导MDSC死亡，抑制铁凋亡可降低NC06诱导的MDSC死亡。NC06增加谷胱甘肽合成并减少脂质活性氧物种，以抑制MDSC中的铁下垂。基因表达谱分析确定p53通路为MDSC的Asah2靶点。抑制Asah2可增加p53蛋白的稳定性，从而上调Hmox1的表达，抑制脂质活性氧的产生，从而抑制MDSC中的铁下垂。NC06治疗增加了MDSC的死亡，并减少了MDSC在荷瘤小鼠中的积聚，导致肿瘤浸润CTL的激活增加，并抑制了体内肿瘤生长。我们的数据表明，ASAH2通过破坏p53蛋白的稳定性来抑制肿瘤微环境中MDSC中的p53通路，从而保护MDSC免受铁下垂。用NC06靶向ASAH2诱导MDSC凋亡可能是癌症免疫治疗中抑制MDSC蓄积的有效疗法。

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数字

图1。
图1肿瘤浸润性MDSC中Asah2表达上调。
一个。的数据集ASAH2公司从TCGA数据库中提取并绘制人类结直肠癌标本（n=380）和非肿瘤结肠（n=51）的相对mRNA水平。这个ASAH2公司使用Graphpad Prism比较结肠和肿瘤标本的mRNA水平。每个点代表ASAH2公司一名患者的相对mRNA水平。B用ASAH2特异性抗体对人结肠癌（A1）和AOM-DSS诱导的小鼠结肠癌（B2）进行染色。A2表示A1的放大图像，B2表示B1的放大图像。（比例尺：左上角的棕色线=50μM）。C健康献血者（n=5）和结肠癌患者（n=7）的外周血单个核细胞用CD11b-、CD33-、HLA-DR和ASAH2特异性单克隆抗体染色，然后用DAPI染色。对MDSC（CD11b）中的活细胞进行ASAH2水平门控+CD33型+HLA-DR5型−单元格）。所示为门控策略。D.ASAH2 MFI的量化。
图2。
图2 ASAH2选择性小分子抑制剂NC06的开发。
答：。NC06化学结构。B以RBM14C16为底物，在NC06存在下以指定浓度与重组人（顶面板）和小鼠（底面板）Asah2蛋白孵育。使用GraphPad Prism测定IC50。酶活性测定进行了两次。
图3。
图3.NC06不抑制Asah1。
以C12-神经酰胺为底物，在NC06存在下以指定浓度与重组人Asah1蛋白孵育。使用GraphPad程序确定IC50。酶活性测定进行了两次。
图4。
图4.Asah2调节MDSC细胞死亡。
一个MDSC样小鼠细胞系J774M的表型。B.纯化CD3+用CFSE标记T细胞，接种于抗CD3和抗CD28涂层的96-well板（1.5×10）中5细胞/孔）。将J774M细胞按指定比例加入培养的T细胞中，培养72h。收集细胞并用CD3特异性单克隆抗体染色。CD3（CD3）+对细胞进行门控并分析CFSE强度。CCD3的量化+T细胞CFSE强度如B所示。垂直线：平均值。D类J774M细胞在NC06存在下以指定浓度培养24小时。然后用PI和Annexin V对细胞进行染色，并用流式细胞仪进行分析。两个%PI+和PI+膜联蛋白V+计算细胞数。所示为三个实验之一的代表性数据。E类BM细胞在GM-CSF存在下培养5天以诱导MDSCs（BM MDSCs）。然后将BM-MDSC在NC06的存在下以指定浓度培养24小时。细胞用CD11b-、Gr1-特异性抗体和Annexin V染色，然后用PI染色。流式细胞仪分析染色细胞。CD11（CD11）+第1组+细胞被选通并分析PI+和PI+膜联蛋白V+细胞。
图5。
图5 Asah2调节MDSC的铁凋亡。
将J774M细胞在NC06（25μM）+Z-DEVD（10μM）、Nec-1（10μM）和Fer-1（10µM）存在下培养24h。溶剂、Z-DEVD、Nec-1和Fer-1单独用作对照。细胞经PI和Annexin V染色，流式细胞仪分析。细胞死亡被量化并显示在底部面板上。柱：平均值，柱：标准差*第页<0.05. 显示了三个实验之一的代表性结果。BBM-MDSC按A处理。细胞用CD11b-、Gr1-特异性抗体和Annexin V染色，然后用PI染色和流式细胞仪分析。CD11b型+第1组+细胞被选通并分析PI+和Annexin V+细胞。细胞死亡被量化并显示在底部面板上。柱：平均值，柱：标准差*第页<0.05.CJ774M（左面板）和BM-MDSC在指定浓度下用NC06处理24h。然后使用GSH-Glo谷胱甘肽测定试剂盒测定GSH水平**第页<0.01.D类J774M细胞（左侧）和BM-MDSC（右侧）按指示用NC06处理24h。然后将细胞与BODIPY C11孵育30分钟，并通过流式细胞术进行分析，以量化通过BODIPY C11强度测量的脂质ROS水平。所示为BODIPY C11 MFI**第页<0.01.
图6。
图6抑制Asah2可增加MDSC细胞的周转，并抑制肿瘤小鼠中MDSC的积聚。
A和B从无瘤（TF，n=5）和CT26荷瘤小鼠（TB，n=6）的脾脏（A）和骨髓中制备正弦细胞。用CD11b-和Gr1-特异性单克隆抗体对细胞进行染色，并用流式细胞仪进行分析。所示为典型点图（左侧面板）和MDSC量化（右侧面板）。C将CT26细胞注射到BALB/c小鼠皮下荷瘤小鼠体内，21天后，腹腔注射载体（n=4）或NC06（n=5，20mg/kg体重），每2天注射3次。给出了肿瘤大小的量化。D类代表性点图显示了荷瘤小鼠脾脏中的MDSC（左侧面板）和MDSC量化（右侧面板）。E类.显示脾脏MDSC细胞死亡和量化的典型点图。F类.显示肿瘤浸润MDSC的典型点图（左侧面板）和量化（右侧面板）。G&H公司.显示肿瘤浸润CD8水平的典型点图+细胞（E）和CD8+产品开发-1+单元格（F）。
图7。
图7 Asah2抑制MDSC中的p53通路。
答：。用NC06（10μM）处理J774M细胞24小时，并用DNA微阵列分析全基因组基因表达谱。所示为基因集富集分析（GSEA），显示了p53途径的富集图。所有GSEA错误发现率q值<0.0001。B显示基于基因本体（GO）术语的差异表达p53通路基因的平方图。C在所示浓度下NC06处理24小时后J774M细胞中p53表达的.qPCR分析。D类用NC06处理24小时的J774M细胞中p53蛋白的Western blotting分析。实验进行了两次。E类用指定浓度的NC06处理J774M细胞24小时，并使用指定的基因特异性引物进行qPCR分析。F类将分别对Asah2、p53和Hmox1具有特异性的scramb和siRNA转染J774M细胞24小时。然后用流式细胞仪测定细胞的谷胱甘肽水平。G公司将分别对Asah2、p53和Hmox1具有特异性的scramb和siRNA转染J774M细胞24小时。然后通过流式细胞术分析细胞的脂质ROS。NT：流式细胞术阴性对照细胞无染色；对照组：不转染。
图8。
图8 NC06抑制体内肿瘤生长。
一个.4T1电池（1×104/小鼠）静脉注射给BALB/c小鼠。在每2天注射肿瘤细胞3天后，给小鼠注射载体（n=3）和NC06（20 mg/kg体重），共7次。肿瘤注射后17天处死小鼠，每2天处死一次，共7次。处死小鼠，用墨水给肺部充气。对肿瘤结节进行计数。B和C.CT26（B）和AB1（C）细胞（2×105细胞/小鼠）静脉注射给小鼠。对荷瘤小鼠进行治疗并分析肺肿瘤，如A。
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    Khan A、Huo Y、Guo Y、Shi J、Hou Y。 Khan A等人。 医学肿瘤学。2024年4月23日；41(5):124. doi:10.1007/s12032-024-02317-5。 医学Oncol。2024 PMID：38652406 审查。
  • 肝细胞癌中的铁下垂，从机制到效果。
    蒋S，张G，马Y，吴D，谢D，周S，蒋X。 姜S等。 前Oncol。2024年3月5日；14:1350011. doi:10.3389/fonc.2024.1350011。eCollection 2024年。 前Oncol。2024 PMID：38511140 免费PMC文章。 审查。
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    Zhu KL、Su F、Yang JR、Xiao RW、Wu RY、Cao MY、Ling XL、Zhang T。 Zhu KL等。 Mol Biol众议员2024年1月25日；51(1):205. doi:10.1007/s11033-023-09097-7。 分子生物学报告2024。 PMID：38270700 免费PMC文章。 审查。
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    1. Hanahan D和Weinberg RA，2011年。癌症的标志：下一代。手机144:646–674。-公共医学
    1. Nakamura K和Smyth MJ 2020。肿瘤微环境中的骨髓免疫抑制和免疫检查点。细胞分子免疫17:1-12。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Veglia F、Tyurin VA、Blasi M、De Leo A、Kossenkov AV、Donthireddy L、To TKJ、Schug Z、Basu S、Wang F、Ricciotti E、DiRusso C、Murphy ME、Vonderheide RH、Lieberman PM、Mulligan C、Nam B、Hockstein N、Masters G、Guarino M、Lin C、Nefedova Y、Black P、Kagan VE和Gabrilovich DI 2019。脂肪酸转运蛋白2对癌症中性粒细胞进行重组。自然569:73-78。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Lasry A、Zinger A和Ben-Neriah Y，2016年。结直肠癌的炎症网络。《自然免疫学》17:230–240。-公共医学
    1. Sceneay J、Parker BS、Smyth MJ和Moller A 2013。低氧驱动的免疫抑制有助于转移前生态位。肿瘤免疫学2:e22355。-项目管理咨询公司-公共医学

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