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.2020年7月1日；94（14）：e00350-20。
doi:10.1128/JVI.00350-20。 2020年7月1日印刷。

免疫非洲猪瘟弱毒分离物OURT88/3或贝宁ΔMGF的家猪缺乏长期保护与调节性T细胞和白细胞介素-10水平升高相关

佩德罗·桑切斯·科尔顿 1, 塔玛拉·贾巴尔 2, 大卫·查普曼 2, 琳达·K·狄克逊 # 2, 玛丽亚·蒙托亚 # 2 三
附属机构

免疫非洲猪瘟弱毒分离物OURT88/3或贝宁ΔMGF的家猪缺乏长期保护与调节性T细胞和白细胞介素-10水平升高相关

佩德罗·桑切斯·科尔顿等。 J维罗尔. .

摘要

根据简短的免疫方案，自然减毒的非洲猪瘟病毒（ASFV）分离物OURT88/3和缺失突变的贝宁ΔMGF先前已被证明能在家猪中诱导高百分比的保护，以对抗强毒株的攻击。本研究获得的结果表明，用OURT88/3或BeninΔMGF对家猪进行单次肌肉注射免疫，然后在免疫后第130天对强毒株Benin 97/1进行攻击，并没有触发产生免疫记忆所需的机制，从而诱导对疾病的长期保护。所有猪都出现急性猪瘟（ASF）。γ-干扰素产生细胞在免疫后第24天达到峰值，随后下降。令人惊讶的是，实验结束时调节性T细胞（Tregs）和白细胞介素-10（IL-10）水平升高，表明免疫系统的调节成分可能会抑制有效保护。重要性任何候选疫苗的免疫持续时间都至关重要。在非洲猪瘟病毒候选疫苗的情况下，这个问题很少受到关注。在第一次免疫后几周，猪受到攻击，经过短时间的免疫方案，减弱的病毒已证明具有保护作用。在这里，研究了用天然减毒分离物OURT88/3和减毒基因删除分离物BeninΔMGF免疫的猪在激发前和激发后的免疫持续时间和130天内诱导的免疫反应。用OURT88/3分离物或贝宁ΔMGF病毒对家猪进行单次肌肉免疫后，在免疫后第130天，动物没有受到贝宁97/1型ASFV强毒株I的攻击。实验结束时调节性T细胞和IL-10水平升高，表明免疫系统的调节成分可能抑制有效保护。

关键词：非洲猪瘟病毒；减毒疫苗；白细胞介素-10；长期免疫；调节性T细胞。

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数字

图1
图1
（A至C）用OURT88/3（A）或BeninΔMGF（B）或未接种对照品免疫的猪的直肠温度动力学和临床评分（平均值±SD）（C）。（D） 在免疫和激发猪后的不同天评估直肠温度和临床评分。采用双向方差分析进行统计分析。星号表示实验组（*，P（P） < 0.05; **,P（P） < 0.01; ***,P（P） < 0.001; ****,P（P） < 0.0001). 一、 免疫日(x个轴）；C、 挑战日(x个轴）；Gp，组；IM，肌肉注射。
图2
图2
激发后存活猪的百分比。猪群(n个=====================================================================================================6） 通过肌肉注射（IM）途径进行单剂量免疫（104TCID公司50)缺失突变贝宁ΔMGF或低毒性ASFV分离物OURT88/3。在免疫后第130天（p.i.），所有免疫猪与三只对照非免疫猪平行，用1 ml含104TCID公司50基因型I强毒力ASFV分离物Benin 97/1。挑战后的天数显示在x个轴上显示了受保护猪的百分比年轴。
图3
图3
在整个实验过程中采集的血液样本中病毒血症水平（A至C）和感染病毒水平（E和F）的动力学。（D） 血样中ASFV基因组拷贝数（平均值±SD）。在免疫（I）和激发（C）后的不同天以及终止（学期）时采集EDTA抗凝血样。病毒基因组拷贝数由qPCR单独测定，用每毫升基因组拷贝总数表示。（G） 血液样本中的感染病毒水平（平均值±SD）。在用贝宁ΔMGF免疫的猪和未免疫的对照猪的血液样本中，在免疫和激发后以及终止时分别测定感染病毒的量。病毒滴度分别表示为感染50%巨噬细胞培养物的病毒数量（TCID数量50每毫升）。采用双向方差分析进行统计分析。星号表示实验组（****，P（P） < 0.0001).
图4
图4
（A和B）在整个实验过程中的不同天从接种OURT88/3（A）或BeninΔMGF（B）的猪身上采集的血清样本中ASFV特异性抗体的动力学。（C） 通过阻断ELISA测定血清样本中ASFV特异性抗体水平（平均值±SD）。阻断率>50%的血清样本被视为阳性。在免疫（I）、激发（C）和终止（学期）后的不同天采集血清样本。采用双向方差分析进行统计分析。
图5
图5
用OURT88/3或BeninΔMGF免疫的猪或未免疫的对照猪，在整个实验过程中不同时间采集的血清样本中IFN-α（A至C）、IFN-γ（E至G）和IL-10（I至K）的血清浓度动力学，并通过ELISA进行测定。还显示了IFN-α（D）、IFN-γ（H）和IL-10（L）的血清浓度（平均值±SD）。在免疫（I）、激发（C）和终止（学期）后的不同天采集血清样本。采用双向方差分析进行统计分析。星号表示实验组（**，P（P） < 0.01; ***,P（P） < 0.001).
图6
图6
（A和B）接种猪的免疫反应。使用从用OURT88/3、BeninΔMGF和Benin 97/1、培养基（模拟接种物）和植物血凝素（PHA；数据未显示）刺激的OURT88/1（A）或Benin△MGF（B）免疫的猪纯化的PBMC，通过ELISpot分析测定IFN-γ产生细胞的数量。结果显示，每10个细胞中IFN-γ分泌细胞（S-C）的数量（平均值±SD）6单元格(年轴）。正如预期的那样，在任何时间点对任何动物使用模拟兴奋剂时，均未检测到特定的IFN-γ分泌细胞，阳性对照的结果在200至300点/10之间6单元格（数据未显示）。采用双向方差分析进行统计分析。星号表示实验组（*，P（P） < 0.05; **,P（P） < 0.01; ***,P（P） < 0.001; ****,P（P） < 0.0001). 一、 免疫日；C、 挑战日(x个轴）。
图7
图7
IFN-γ阳性T细胞百分比的变化。在整个实验过程中，从接种OURT88/3或BeninΔMGF的猪身上获得的PBMC用培养基（模拟；数据未显示）、PMA-ION（数据未示出）、Benin 97/1（A）、OURT88/1（B）或Benin△MGF（C）刺激。结果显示IFN-γ阳性T细胞亚群的百分比（平均值±SD）(年axis）通过流式细胞术评估。红色和蓝色星号表示与每个实验组中分析的前一个日期相比存在统计显著性差异（单向方差分析）。黑色星号表示实验组（*，P（P） < 0.05; **,P（P） < 0.01; ***,P（P） < 0.001; ****,P（P） < 0.0001). 一、 免疫日；C、 挑战日(x个轴）。
图8
图8
用流式细胞术对用OURT88/3或BeninΔMGF免疫的猪获得的PBMC进行免疫表型分析。结果显示了整个实验过程中单核细胞（A）、树突状细胞亚群（B至C）和T细胞亚群的百分比（平均值±SD）和动力学。红色和蓝色星号表示与每个实验组中分析的前一个日期相比存在统计显著性差异（单向方差分析）。黑色星号表示第0天免疫前百分比之间的统计显著差异（单向方差分析） 第130天的p.i.和挑战前百分比 每个实验组（*，P（P） < 0.05; **,P（P） < 0.01; ***,P（P） < 0.001; ****,P（P） < 0.0001). 一、 免疫日；C、 挑战日(x个轴）。
图9
图9
（A和B）Tregs的百分比和动力学（CD3+CD4α+CD25型+福克斯P3+)在用OURT88/3（A）或贝宁ΔMGF（B）免疫后不同天从猪中采集的PBMC中。（C） OURT88/3或BeninΔMGF免疫后调节性T细胞（Tregs）的变化。结果显示Tregs（CD3）的百分比（平均值±SD）和动力学+CD4α+CD25型+福克斯P3+)流式细胞仪检测。黑色星号表示第0天免疫前百分比之间的统计显著差异（单向方差分析） 第130天的p.i.和激发前百分比 每个实验组（*，P（P） < 0.05). 一、 免疫日；C、 挑战日(x个轴）。（D） Tregs（CD3）的百分比和动力学+CD4α+CD25型+福克斯P3+)在之前的独立实验过程中收集的冻存PBMC（24）中，这些PBMC来自于用104TCID公司50贝宁ΔMGF，挑战104TCID公司50ASFV分离物Benin 97/1。在免疫后第0天和第38天采集冰冻PBMC进行分析。
图10
图10
用OURT88/3（数据未显示）或贝宁ΔMGF免疫的猪的调节性T细胞（Tregs）对自身淋巴细胞的抑制活性。（A） 未经刺激的淋巴细胞。（B） PHA刺激后增殖的淋巴细胞。（C） IL-10存在下PHA刺激后增殖淋巴细胞。（D） 在有分类Tregs的情况下，PHA刺激后增殖淋巴细胞。（E） 不同刺激下增殖淋巴细胞百分比的总结。这是用猪A1、A3、B4和B5的细胞进行的三个代表性实验。
图11
图11
应用于流式细胞术数据的门控策略。（A） 所有细胞均通过其侧向散射、前向散射和活/死门进行门控，最后去除双光子。以下分析仅用活的单细胞进行。（B） 面板1的选通策略。（C） 小组2的选通策略。（D） 面板3的选通策略。SSC-A，侧面散射面积；FSC-A，前向散射区。
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    1. Alejo A、Matamoros T、Guerra M、Andres G.，2018年。非洲猪瘟病毒颗粒的蛋白质组图谱。《病毒杂志》92:e01293-18。doi:10.1128/JVI.01293-18。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
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    1. 世界动物卫生组织。2019.东帝汶非洲猪瘟。https://www.oie.int/wahis_2/public/wahid.php/Reviewreport/Review？page_re。。。.

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