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.2020年6月；21(6):2385-2394.
doi:10.3892/mmr.20.11058。 Epub 2020年4月8日。

电刺激对受损背根神经节细胞活性、细胞周期、细胞凋亡及β‑catenin通路的影响

胡铭 1, 李红 1, 何松明 1, 黄国涛 1, 雁翔城 1, 钱晨 1
附属公司

电刺激对受损背根神经节细胞活性、细胞周期、细胞凋亡及β‑catenin通路的影响

胡铭等。 分子医学代表. 2020年6月.

摘要

本研究旨在探讨电刺激（ES）对周期性机械拉伸（CMS）损伤的大鼠背根神经节（DRG）细胞活性、细胞周期和凋亡的影响。本研究还研究了Wnt/β‑catenin途径是否参与这一过程。在DRG细胞中建立损伤和ES模型。然后，使用细胞计数试剂盒‑8和5‑乙炔‑2’‑脱氧尿苷‑594细胞增殖分析试剂盒检测细胞活性。使用细胞周期检测试剂盒检测细胞周期分布。使用Annexin V‑FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡，使用western blotting检测Wnt/β‑catenin途径相关蛋白。本研究表明，CMS降低DRG细胞活性，增加S期细胞数量，促进细胞凋亡，抑制Wnt/β‑catenin途径。此外，ES显著提高DRG细胞的增殖活性，增加G2期细胞数量，降低凋亡率，激活Wnt/β‑catenin通路，最终逆转CMS造成的损伤。使用XAV939抑制Wnt/β-catenin信号通路后，ES的作用减弱。总之，本研究表明ES可以逆转CMS诱导的DRG细胞损伤，Wnt信号通路可能参与了这一过程。

关键词：电刺激；背根神经节细胞；周围神经损伤；Wnt/β-catenin途径。

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数字

图1。
图1。
细胞力学加载原理。（A） 当培养板向上凸起时，细胞受到拉力。（B） 当培养板向下压时，细胞受到压力。
图2。
图2。
电刺激装置原理图。（A） 整体设备组成。（B） 电刺激循环培养皿的内部刺激图。
图3。
图3。
ES对受损DRG细胞活性的影响。（A） 使用OD值分析细胞活力。（B） EdU阳性增殖DRG细胞比例的定量分析。（C） EdU染色（放大，×200）。红色荧光表示增殖阳性细胞（a、d、g、j分别表示对照组、ES组、CMS组和CMS+ES组），蓝色荧光表示视图中所有细胞的细胞核（b、e、h、k分别表示对照、ES、CMS和CMS+ES组）。合并图像中的粉红色细胞为增殖阳性细胞（c、f、i、l分别代表对照组、ES组、CMS组和CMS+ES组）。每组实验重复三次。数据表示为平均值±标准偏差***与对照组相比，P<0.001；###与CMS组相比，P<0.001。ES，电刺激；DRG，背根神经节；控制；CMS，循环机械应力；OD，光密度；乙二胺四乙酸，5-乙炔基-2′-脱氧尿苷。
图4。
图4。
ES对DRG细胞周期分布的影响。（A）Con、（B）ES、（C）CMS和（D）CMS+ES组的流式细胞术细胞周期结果。（E） 细胞周期相比例的定量分析。数据表示为平均值±标准偏差。每组实验重复三次*与Con相比，P<0.05，***P<0.001；##P<0.01，###与CMS组相比，P<0.001。ES，电刺激；DRG，背根神经节；CMS，循环机械拉伸；Con，控制。
图5。
图5。
ES对DRG细胞凋亡的影响。（A）Con、（B）ES、（C）CMS和（D）CMS+ES组的流式细胞术凋亡结果。（E） 细胞凋亡率的定量分析。每组实验重复三次。数据表示为平均值±标准偏差***与对照组相比，P<0.001；###与CMS组相比，P<0.001。ES，电刺激；DRG，背根神经节；CMS，循环机械拉伸；控制；ns，不显著。
图6。
图6。
ES对受损DRG细胞Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达水平的影响。（A） β-catenin、Bax、Bcl-2和C-myc的代表性斑点。定量分析（B）β-catenin、（C）GSK-3β、（D）Bax、（E）Bcl-2和（F）C-myc的蛋白表达水平。每组实验重复三次。数据表示为平均值±标准偏差*与Con相比，P<0.05，***P<0.001；#P<0.05，###与CMS组相比，P<0.001。ES，电刺激；控制；CMS，循环机械拉伸；GSK-3β、糖原合成酶激酶-3β。
图7。
图7。
ES对XAV939治疗后DRG细胞活性的影响。每组实验重复三次。数据表示为平均值±标准偏差***P<0.001。ES，电刺激；DRG，背根神经节；控制；CMS，循环机械拉伸；ns，不显著。
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