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。2020年2月18日；11(2):132.
doi:10.1038/s41419-020-2323-5。

沉默lncRNA Lfar1减轻肝纤维化中巨噬细胞的典型活化和脓毒症

Kun Zhang（张坤） # 1, 施哲敏 # 1, 张梦霞 1, 董学毅 2, Lina Zheng女士 1, 李冠彤 三, 韩晓辉 1, 芝瑶 4, 陶涵 5, 魏红 6
附属公司

沉默lncRNA Lfar1减轻肝纤维化中巨噬细胞的典型活化和脓毒症

Kun Zhang（张坤）等。 细胞死亡病。 。

摘要

肝纤维化是对持续肝损伤的持续伤口愈合反应的常见病理后果，其特征是细胞外基质的产生和积累增加。如果不解决，纤维化过程会导致器官衰竭，并最终在肝硬化发展后死亡。有研究表明，巨噬细胞在肝纤维化的进展中起着中心作用，这与炎症和热解有关，这是一种新的程序性和促炎性细胞死亡。然而，目前尚不清楚lncRNAs是否或如何调节肝纤维化中巨噬细胞的活化和凋亡。在本研究中，我们证明了富含肝脏的lncRNA Lfar1在促炎性M1激活和巨噬细胞凋亡过程中失调，该基因已被报道通过诱导肝星状细胞活化和肝细胞凋亡来促进肝纤维化。我们的研究表明，慢病毒shRNA沉默lnc-Lfar1可以缓解CCl4-和BDL诱导的促炎性M1巨噬细胞活化和NLRP3炎性体介导的细胞凋亡。此外，体外实验表明，lnc-Lfar1敲除显著抑制LPS-和IFN-γ诱导的巨噬细胞促炎性激活，并抑制LPS/ATP-和LPS/尼日利亚霉素诱导的NLRP3炎性体介导的细胞凋亡。从机制上讲，lnc-Lfar1通过NF-ĸB途径调节LPS-和IFN-γ诱导的巨噬细胞促炎激活。所有这些数据都支持我们的结论，即lnc-Lfar1在控制巨噬细胞的活化和凋亡方面发挥着重要作用，从而为治疗炎症相关疾病（包括肝纤维化）提供了可能的治疗靶点。

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数字

图1
图1。巨噬细胞活化中lnc-Lfar1的失调。
一基因表达的qRT-PCR分析lnc-Lfar1、Ly6c和Il-1β在从用CCl处理的小鼠中分离的KCs中4持续0、1、2、4或8周。b–gKCs、RAW264.7和BMM用20 ng/ml干扰素-γ或100 ng/ml LPS持续24小时 h和的表达式lnc-Lfar1型和阳性对照基因(Ly6c、Il-1β、iNos或Mcp-1型)通过qRT-PCR测定*对 < 0.05与对照组。
图2
图2。沉默lnc-Lfar1缓解CCl4-诱导巨噬细胞的促炎激活。
用油和注射lent-NC（NC，n个 = 10） 、CCl4结合注射lent-NC（NC + CCl公司4,n个 = 10） ，油与注射慢-lnc-Lfar1-shRNA（lnc-Lfar1-shRNA，n个 = 10） 和CCl4结合注射lent-lnc-Lfar1-shRNA（lnc-Lfar1-shRNA + CCl公司4,n个 = 10).一免疫组化检测F4/80和LY6C的表达；比例尺 = 100μm × 40×时为100μm。b条western blot检测F4/80、CD11b和LY6C蛋白水平。GAPDH被用作内部控制。c（c）mRNA水平F4/80，Ly6c,抄送2,Cd20、Il-6、iNos、Ccl5、Cxcl5、Cxcl9和Cxcl10公司通过qRT-PCR测定*对 < 0.05与NC，#对 < 0.05与NC + CCl公司4。
图3
图3。沉默lnc-Lfar1改善CCl4-以及BDL诱导的NLRP3炎症小体介导的pyroptosis。
小鼠接受油或假手术治疗，同时注射lent-NC（NC）、CCl4或BDL操作结合注射lent-NC（NC + CCl公司4/BDL）、油或假手术联合注射lent-lnc-Lfar1-shRNA（lnc-Lfar1-shRNA，n个 = 10） 和CCl4或BDL手术结合注射lent-lnc-Lfar1-shRNA（lnc-Lfar1-shRNA + CCl公司4/BDL）。一,b条western blot检测NLRP3、Caspase1和GSDMD蛋白水平。GAPDH被用作内部控制。c–fELISA法检测肝组织中成熟IL-1β和IL-18的水平*对 < 0.05与NC，#对 < 0.05与NC + CCl公司4/巴西存托凭证。
图4
图4。Lnc-Lfar1敲除抑制LPS-和IFN-γ诱导的巨噬细胞促炎激活。
用lnc-Lfar1 siRNA转染KCs，然后用20 纳克/毫升LPS或100 24小时每毫升干扰素-γ 小时。一共聚焦分析检测F4/80的表达；比例尺 = 10微米。b条,c（c）western blot检测CD11b和MCP-1蛋白水平。GAPDH被用作内部控制。d日,e（电子）RNA水平lnc-Lfar1、F4/80、Ly6c,Tnf-α、Mcp-1、Il-1β、Il-6、iNos、Ccl5和Cxcl10公司通过qRT-PCR测定*对 < 0.05 vs si-NC，#对 < 0.05 vs si-NC+LPS/IFN-γ。
图5
图5。Lnc-Lfar1敲低抑制LPS/ATP-和LPS/Nigericin诱导的NLRP3炎症小体介导的焦下垂。
用lnc-Lfar1 siRNA转染KCs 24小时 h、 然后用100刺激 纳克/毫升LPS 4 h，然后用5 mM ATP或100 2纳克/毫升 h诱导细胞凋亡。一,b条western blot检测NLRP3、Caspase1和GSDMD蛋白水平。GAPDH被用作内部控制。c–fELISA法测定细胞培养上清液中成熟IL-1β和IL-18的水平。克,小时通过上清液LDH活性测定上睑下垂*对 < 0.05 vs si-NC，#对 < 0.05 vs si-NC + 液化石油气 + ATP/尼日利亚。
图6
图6。lnc-Lfar1通过NF-ĸB途径调节巨噬细胞活化。
用lnc-Lfar1 siRNA转染BMM，然后用20 纳克/毫升LPS或100 24小时的ng/ml干扰素-γ 小时。一,b条western blot检测phos-IKK、IKK、phos-p65、p65、phos-IBα和I Bα的蛋白水平。GAPDH被用作内部控制。c（c）,d日通过共聚焦分析确定p50和p65的表达和位置；比例尺 = 10微米。
图7
图7。示意图说明了lnc-Lfar1在肝纤维化过程中巨噬细胞活化和焦下垂中的作用。
在所提出的模型中，肝损伤触发NF-κB介导的NLRP3和炎症前基因（包括IL-1β、IL-18、TNF-α和MCP-1）的上调，而lnc-Lfar1沉默可以缓解这些上调，从而提供一个有吸引力的抗肝纤维化治疗靶点。
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参考文献

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