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.2019年7月17日12:5751-5765。
doi:10.2147/OTT。S208924。 2019年eCollection。

冬凌草甲素通过调节GST-pi和LRP/1 ERK/JNK信号通路克服吉西他滨耐药PANC-1/Gem细胞

比利·王 # 1, 灿申 # 1 2, 杨丽 1, Ting Zhang（张婷） 1, Hui Huang（黄慧） 1, 任军 1, 胡政军 三, 徐健（Jian Xu） 1, 徐斌（Bin Xu） 4
附属公司

冬凌草甲素通过调节GST-pi和LRP/1 ERK/JNK信号通路克服吉西他滨耐药PANC-1/Gem细胞

比利·王等。 Onco目标Ther. .

摘要

背景：化疗仍是晚期胰腺癌的主要治疗方法。然而，化疗耐药会影响胰腺癌的治疗效果。吉西他滨是一种典型的治疗胰腺癌的药物，其耐药机制复杂，可能受基因和环境的影响。冬凌草甲素是一种从传统中药中提取的四环二萜化合物香茶菜冬凌草甲素可能克服胰腺癌的耐药性，但对冬凌草乙素化疗对胰腺癌耐药性的研究尚不完全清楚。目的：本研究旨在评估冬凌草甲素对吉西他滨耐药PANC-1（PANC-1/Gem）胰腺癌细胞多药耐药蛋白、凋亡相关蛋白和能量代谢的影响。方法：利用吉西他滨浓度梯度诱导PANC-1/Gem细胞对吉西他宾耐药。采用细胞计数试剂盒-8检测吉西他滨和冬凌草甲素对PANC-1和PANC-1/Gem细胞增殖的影响。Western blot分析和免疫荧光检测PANC-1/Gem细胞中多药耐药蛋白、凋亡相关蛋白和低密度脂蛋白受体蛋白1（LRP1）蛋白的表达。采用流式细胞术检测吉西他滨和冬凌草甲素对PANC-1/Gem细胞凋亡的影响。动物移植瘤实验用于检测吉西他滨和冬凌草甲素对胰腺癌的体内影响。此外，使用ATP检测试剂盒测定吉西他滨和冬凌草甲素对PANC-1/Gem细胞ATP水平的影响。采用免疫荧光法检测吉西他滨和冬凌草甲素对PANC-1/Gem细胞低密度脂蛋白受体蛋白1（LRP1）表达的影响。此外，通过慢病毒载体介导的RNA沉默，LRP1在PANC-1/Gem细胞中的表达被抑制。克隆形成实验和Western blot分析检测LRP1敲除对PANC-1/Gem细胞增殖的影响。结果：本研究结果表明，冬凌草甲素通过调节GST-pi和LRP1/ERK/JNK信号通路，克服PANC-1/Gem细胞吉西他滨抵抗。结论：总之，本研究表明冬凌草甲素可以通过调节GST-pi和LRP1/ERK/JNK信号通路，诱导细胞凋亡，从而克服PANC-1/Gem细胞对吉西他滨的耐药性。因此，对于胰腺癌患者来说，冬凌草甲素联合吉西他滨可能是一种很有前途的术前治疗方法。

关键词：吉西他滨耐药；谷胱甘肽S-转移酶pi；低密度脂蛋白受体；冬凌草甲素；胰腺癌PANC-1细胞。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者报告说，在这项工作中没有利益冲突。

数字

图1
图1
冬凌草甲素抑制PANC-1/Gem细胞增殖并克服吉西他滨耐药性。(A类)用不同剂量的吉西他滨处理PANC-1/Gem和PANC-1细胞24小时。使用CCK-8分析测定所示细胞的细胞活力**P（P）<0.01。(B类)通过CCK-8分析检测不同剂量冬凌草甲素处理24小时后PANC-1/Gem和PANC-1细胞的细胞活力。(C类)集成电路50吉西他滨在PANC-1/Gem和PANC-1细胞中的值。RI=PANC-1/宝石（IC50)/PANC−1（IC50)=3.68. **P（P）<0.01。(天)使用恒定比例设计的吉西他滨和冬凌草甲素联合治疗的效果。利用Calcusyn软件分析吉西他滨和冬凌草甲素治疗PANC-1/Gem细胞的CI。CI=1表示加性效应；CI<1表示协同效应。CI>1表示拮抗作用。缩写：CCK-8，细胞计数试剂盒-8；RI，反向指数；CI，组合指数；集成电路50，50%的抑制浓度。
图2
图2
冬凌草甲素调节PANC-1/Gem和PANC-1细胞中多药耐药蛋白的表达。(A类)Western blot分析用吉西他滨、冬凌草甲素或两者处理24小时后PANC-1和PANC-1/Gem细胞中P-gp、MRP1、LRP/MVP、Topo2和GST-pi蛋白的表达。β-actin作为负荷对照。(B类)Western Blot分析检测MRP1和GST-pi蛋白在PANC-1和PANC-1/Gem细胞中的表达。数据表示为平均值±标准偏差**P（P）<0.01.缩写：P-gp、P-糖蛋白；MRP1，多药耐药蛋白1；LRP/MVP、肺耐药蛋白/主穹窿蛋白；GST，谷胱甘肽S-转移酶。
图3
图3
冬凌草甲素通过抑制GSTπ的表达和改变细胞骨架的结构来克服PANC-1/Gem细胞对吉西他滨的耐药性。(A类和B类)吉西他滨、冬凌草甲素或两者处理24小时后，PANC-1/Gem细胞中GST-pi和α-微管蛋白的免疫荧光染色（放大倍数x200）。(C类和天)吉西他滨、冬凌草甲素或两者联合作用24小时后PANC-1/Gem细胞GST-pi和α-微管蛋白的Western blot分析。β-actin作为负荷对照。数据表示为平均值±标准偏差**P（P）<0.01.缩写：GST，谷胱甘肽S-转移酶。
图4
图4
冬凌草甲素通过诱导细胞死亡克服PANC-1/Gem细胞对吉西他滨的耐药性。(A类和B类)用流式细胞术分析吉西他滨、冬凌草甲素或两者联合作用24小时的PANC-1/Gem细胞。数据表示为平均值±标准偏差**P（P）<0.01。(C类)Western blot分析经吉西他滨、冬凌草甲素或两者联合作用24小时后PANC-1/Gem细胞中Caspase 3、Caspase 9、Bax或Bcl-2蛋白表达。β-actin作为负荷对照。(天)检测PANC-1/Gem细胞中Caspase 3、Caspase 9、Bax或Bcl-2蛋白的表达*P（P）<0.05和**P（P）<0.01.缩写：Bcl-2、B细胞淋巴瘤-2；Bax，Bcl-2相关x蛋白。
图5
图5
冬凌草甲素克服体内PANC-1/Gem细胞吉西他滨耐药。(A类)带有实验治疗时间点的肿瘤进展时间表。(B类)苏木精和伊红染色的正常胰腺组织和PANC-1/Gem细胞瘤移植。(C类)裸鼠肿瘤的典型图像。(天)在指定日期测量肿瘤体积的统计比较。数据表示为平均值±标准偏差*P（P）<0.05和**P（P）<0.01。(E类)移植肿瘤的重量*P（P）<0.05和**P（P）<0.01。(F类)用GST-pi抗体对小鼠的异种移植物进行免疫化学染色。缩写：GST，谷胱甘肽S-转移酶。
图6
图6
冬凌草甲素增强PANC-1/Gem细胞对吉西他滨的敏感性，并在LRP1沉默后抑制细胞生长。(A类)检测PANC-1/Gem和PANC-1细胞在不同处理24小时后的ATP水平。(B类)用吉西他滨、冬凌草甲素或两者处理24小时的PANC-1和PANC-1/Gem细胞中LRP1表达的蛋白质印迹分析。β-actin作为负荷对照。(C类)用吉西他滨、冬凌草甲素或两者处理24小时的PANC-1/Gem细胞中LRP1的免疫荧光染色（放大倍数，x200）。(天)通过细胞计数试剂盒-8检测接受不同剂量吉西他滨24小时的shNC和shLRP1处理的PANC-1/Gem细胞的细胞活力**P（P）<0.01。(E类)在克隆形成试验中分析shNC和shLRP1细胞的图像。缩写：低密度脂蛋白受体蛋白1；shLRP1，短发夹LRP1；shNC，非沉默控制shRNA（shNC）。
图7
图7
冬凌草甲素通过调节LRP1/ERK/JNK信号通路克服PANC-1/Gem细胞对吉西他滨的耐药性。(A类)检测shNC和shLRP1细胞中LRP1、ERK1/2、磷酸化ERK1/2，JNK1/2/3，磷酸化JNK和NF-κB的表达。在吉西他滨、冬凌草甲素或两者联合作用24小时的PANC-1/Gem细胞中检测到相同的蛋白。(B类)用LRP1抗体对小鼠的异种移植物进行免疫化学染色。缩写：低密度脂蛋白受体蛋白1；ERK，细胞外信号调节激酶；JNK，c-Jun N-末端激酶；NF，核因子；shLRP1，短发夹LRP1；shNC、非沉默对照shRNA（shNC）。
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